研究miR-1256和miR143基因对人肾透明细胞癌的调控作用

　　透明细胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma，CCRCC)是肾脏恶性肿瘤的一种最常见的类型，其占全身恶性肿瘤的2%-3%，miRNA(microRNA)是一类具有调控基因表达功能的小分子,新近的临床研究表明大量miRNA能有效抑制肿瘤或者促使肿瘤发生和发展的潜能。这预示着研究miRNA信使分子能在人类肿瘤诊断治疗中发挥重要的作用，为了深入认识肾透明细胞癌起源的具体的发病机制，本文研究了miRNA在肾透明细胞癌组织中的表达调控情况，从而进一步探讨miR-143和miR-1256在肾透明细胞癌中的调控表达作用。

　　1资料与方法

　　1.1一般资料

　　收集我院自2003年1月至2010年10月期间的36例原发性散发肾透明细胞癌的手术时切除的标本，其中男患者20例，女16例，年龄都在31-80岁，平均年龄在55.6岁。左侧24例例，右侧12例。所有肿瘤标本都经过组织病理学证实确实为肾透明细胞癌。所有病例在手术前都未作任何放疗、化疗治疗。对照标本则由36例远离肿瘤的癌周围的肾脏组织。

　　1.2组织的提取

　　取肾透明细胞癌组织和正常肾组织标本采用Trizol法进行提取组织总刚A，通过异丙醇沉淀浓缩以及分光光度计测定浓度、琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量问。将提取的总RNA标本进行miRNA表达谱芯片分析。

　　1.3Real-timePCR分析

　　cDNA合成以lOng总的RNA为转录模板使用miR143和miR-1256特异性逆转录引物使其发生逆转录反应。反应条件为16°C，30min和42°C，30min、85°C，5min，采用SYBRGreen法进行试剂荧光定量PCR仪进行检测，实验重复3次确定CT值。

　　1.2方法

　　1.3统计学方法

　　本次研究所得数据采用SPSSl1.0软件包进行统计学分析，根据实验需要采用NOVA检验，以P<0.05为具有统计学意义。

　　2结果

　　miRNA表达谱芯片、NorthenblotReal-timeCR法进行检查，研究结果提示miR-143和miR-1256两基因在肾透明细胞癌中较正常的肾细胞组织相比知在肾透明细胞癌中明显低表达。miRNA表达谱芯片显示miR-143和miR-1256在肾透明细胞癌组织中比正常肾细胞组织表达低很多，二者表达差异的倍数分别是13.9和16.1倍。而Real-timePCR法显示miR-143在肾透明细胞癌组织中的表达为(16.01土8.90)相比正常的肾细胞组织317.79±124.65这一数据明显低很多，二者表达差异具有显著性差异具有统计学意义(P<0.05)，miR-1256在肾透明细胞癌组织中的表达数据为(1.29士0.83)较正常肾细胞组织(8到士5.81)也低很多，同样具有统计学意义，P<0.05。

　　3讨论

　　3.1肾透明细胞癌(clearcellrenalcellcarcinoma，CCRCC)是肾脏恶性肿瘤的一种最常见的类型，其占全身恶性肿瘤的2%-3%。miRNA是指一个短的核糖核酸(RNA)分子。一般在真核细胞中一个microRNA分子和其他分子RNA相比，核昔酸数较少(平均22)。m刚A作用是绑定到目标信使刚A转录(mRNA的)上的互补序列的转录后调节，通常在翻译抑制或目标退化和基因沉默

　　3.2结果分析

　　本次研究结果显示miRNA表达谱芯片、NorthenblotReal-timeCR法进行检查，研究结果提示miR-143和miR-1256两基因在肾透明细胞癌中较正常的肾细胞组织相比知在肾透明细胞癌中明显低表达.miRNA表达谱芯片显示miR-143和miR-1256在肾透明细胞癌组织中比正常肾细胞组织表达低很多，二者表达差异的倍数分别是13.9和16.1倍。而Real-timePCR法显示miR-143在肾透明细胞癌组织中的表达为(16.01士8.90)相比正常的肾细胞组织(317.79土124.65)这一数据明显低很多，二者表达差异具有显著性差异具有统计学意义，(P<0.05)，miR-1256在肾透明细胞癌组织中的表达数据为(1.29士0.83)较正常肾细胞组织(8.95±5.81)也低很多，同样具有统计学意义，P<0.05。

　　显然本研究通过多种检测方法都证实了miR-143miR-1256在肾透明细胞癌组织中明显下调表达且它们的低表达可能在不同临床肿瘤分期、分级中并无显著性差异。miR-143和miR-1256基因在肿瘤细胞中的下调表达是否与肿瘤的其它临床病理有关以及它们能否作为小分子阳A药物治疗肾透明细胞癌是我们后续研究的重点。

　　3.3结论

　　综上所述，miR-1256和miRI43基因的表达情况研究能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要临床指导意义

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