本文是一篇专业的医学论文，主要对骨髓间充质干细胞治疗EAE的实验研究的介绍，详情请看下面的介绍。

 

　　1 材料与方法

 

　　1.1 C57BL/6小鼠MSCs的分离、扩增培养

 

　　参照Pittenger等[2]描述的方法,分离培养小鼠BMSCs。取C578BL/6的股骨、胫骨等长骨骨髓，采用骨髓培养法，按1×106/mL的密度接种至含10%胎牛血清（FBS）的高糖DMEM培养基中，5% CO2箱中孵育48 h后换液，3 d/次，细胞贴壁生长呈纤维样，1∶3传代继续扩增培养。

 

　　1. 2 EAE动物模型制备

 

　　参照我们之前的实验方法制作EAE模型[3]。将C57BL/6雌性小鼠分为EAE组、BMSCs治疗组和佐剂组，用MOG35-55诱导EAE模型，佐剂组以等量生理 盐水代替。BMSCs治疗组在发病第1天注射体外培养的BMSCs(1×106个)移植到EAE小鼠体内。

 

　　1.3 脾细胞的分离和制备

 

　　动物于p.i.18 d,各组取出8只小鼠,制备脾脏淋巴细胞悬液[3]。

 

　　1.4 细胞因子检测

 

　　参照ELISA试剂盒的说明书检测培淋巴上清液中细胞因子INF-γ、IL-17和IL-10的含量，测定A450 值。

 

　　1.5 统计方法

 

　　数据均用（x±s）来表示，采用SPSS 13．0 软件对所得数据进行分析处理，以P＜0．05为差异有统计学意义。

 

　　2 结果

 

　　2．1 小鼠MSCs的原代和传代培养

 

　　分离的骨髓细胞培养24 h后可见散在贴壁细胞，72 h后细胞开始增殖，呈集落样生长，细胞体积较小。传代细胞不再呈集落样生长，而是散在分布, 细胞较原代细胞大，呈宽大扁平状。

 

　　2．2 脾淋巴细胞上清液中细胞因子的检测结果

 

　　对各组淋巴细胞分泌的细胞因子INF-γ、IL-17和IL-10进行检测，发现EAE组三种细胞因子INF-γ、IL-17、IL-10的分泌均有增加，BMSCs明显抑制INF-γ、IL-17的分泌，并且促进IL-10 的分泌。

 

　　3 讨论

 

　　EAE是CD4+T细胞介导的自身免疫性疾病, 细胞因子的生成和调节是CD4+T细胞发挥效应作用的主要机制。Th1细胞主要分泌INF-γ、TNF-α等细胞因子，使EAE加重 ；Th2细胞则主要分泌IL-10和IL-4等细胞因子；对EAE有抑制作用[3]。MS病人血脑屏障细胞表达IL-17 和IL-23受体并且诱导BBB内皮细胞表达ACL2，ACL2与Th17细胞表面相应的趋化因子CCR2 受体结合后，破坏紧密连接，有效地通过BBB进入CNS，引起 CNS炎性改变[4]。IL-10是一种免疫负调节因子, 可以抑制Th1细胞分泌INF-γ、IL-2等因子,在EAE中具有抑制免疫病理的作用[5]。

 

　　我们发现在EAE发病高峰期,细胞因子INF-γ和IL-17显着上升。BMSCs移植治疗组显着抑制了INF-γ和IL-17，而提高了IL-10的分泌。推测BMSCs可能抑制Th1类细胞因子的分泌, 促进Th2类细胞因子的释放, 诱导Th1/Th2向Th2方向偏移。因此推测BMSCs治疗EAE的可能机制是抑制了炎症反应，从而达到保护轴突的作用，这为临床治疗MS提供了理论依据。

 

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