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陈旧性组织苏木素―伊红教学切片的快速修复法

　　本文是一篇专业的医学论文，主要是关于陈旧性组织苏木素-伊红教学切片的快速修复法的阐述，详情请看下面的介绍。

　　医学形态学教学中尽管数字教学切片日渐普及与深化，但苏木素一伊红(hematoxylin—eosin staining，HE)染色切片仍是必不可少的最直观的重要教学工具。病变典型的教学切片十分珍贵，有的几乎是一片难求，尤其是上世纪5O～6o年代的一些特异性疾病的标本，如风湿性心肌炎、肾小球肾炎、大叶性肺炎、小叶性肺炎、乙型脑炎等。而随着使用时间延长，这些教学切片都会出现不同程度的褪色、变黄、组织结构模糊不清，蓝色的细胞核淡到无法观察，红色的细胞质变淡、变黄或整片红染(图lA，B)，严重影响学生对切片的正常观察和组织细胞结构变化的学习。2年来，笔者应用高温高压修复快速处理1954年以来的陈旧、褪色、发黄等无法观察的HE组织教学切片，使陈旧的HE教学切片组织结构清晰，细胞核、质染色对比良好，有效提高了奇、缺、难得病例教学切片的利用价值。

　　1 材料与方法

　　1．1 材料1954年以来本学系保存的颜色严重褪变且难得病例(如：风湿性心肌炎、肾小球肾炎、大叶性肺炎、小叶性肺炎、乙型脑炎等)的病理HE组织教学切片l3种。选用肾小球肾炎切片作为本实验材料。

　　1．2 仪器设备与试剂 家用18时高压锅；电磁炉(C21一FK2101，中国美的电器公司)；酒精灯或温控可调烤片机；耐高温塑料修复盒；耐高温塑料切片架；0．1 mmol／L(pH 9．o)EDTA修复液、0．5 高锰酸钾、2 草酸、1 盐酸、二甲苯、改良Gill苏木精染液、0．5 醇溶性伊红Y等。

　　1．3 方法

　　1．3．1 实验准备将褪色的肾小球肾炎HE教学切片置8O～95℃ 温控可调烤片机1O～20 min，或直接在酒精灯上烤片至切片有汽泡用眼科镊子轻轻移开盖玻片并取下，切片放人2缸二甲苯浸泡各3～5 min，溶解切片上残余的中性树胶后，人100 、95 、80、70 梯度乙醇至水。

　　1．3．2 切片分组及主要步骤A组：切片浸泡在水中备用；B组：按照常用的切片褪色处理法：0．5 高锰酸钾5 min，蒸馏水洗，2 草酸2 min，蒸馏水洗，待用；C组：切片人装有0．1 mmol(pH 9．0)EDTA修复液的修复盒，液体须高过载玻片，参照免疫组织化学抗原修复的方法先在高压锅内注入适量水，再把装有教学切片的耐高温塑料修复盒放人，盖上压力锅盖子，置于电磁炉上，开始通电加热，待高压锅喷气开始计时，1～2 min后断电，自然冷却至室温，取出切片，流水冲3～ 5 minll 。3组切片同时人改良Gill苏木精染液10 min，取出，流水冲洗15 min。显微镜下不断观察，必要时1 盐酸水溶液分化，水洗返蓝约3O～45 min，细胞核、核内染色质及核仁清晰，呈蓝色，细胞质、组织间质基本无色或很淡的蓝色。0．5％ 醇溶性伊红Y染色30 S，95 酒精分色、脱水，无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，显微镜下观察。

　　1．4 结果A组切片的组织结构和细胞轮廓存在，但细胞核染色不深，细胞质偏红，核质对比度差(图1C)；B组切片的组织细胞结构不清，细胞核、质、间质染色为均一蓝色，对比度欠佳(图1D)；C组切片的组织染色与新鲜取材的组织染色基本一致，组织细胞的基本形态清晰可见，蓝色的细胞核、核内染色质与粉红色的细胞质和桔红色的红细胞形成鲜明对比(图1E)。肾皮质部见肾小球体积增大，充血，球囊壁层上皮细胞肿胀增生成多层，形成“新月体”，有的增生上皮充塞囊腔，与毛细血管攀粘连，有的毛细血管攀受压萎缩，部分肾小球纤维化和玻璃样变；。肾小管上皮细胞肿胀颗粒变性，管腔内见有透明管型，肾间质血管扩张充血和少量炎症细胞浸润，达到了形态学实验课教学要求。

　　2 讨论

　　HE染色法是组织学最常用的一种染色法，即苏木精把细胞核染成蓝色，伊红把细胞质、胶原纤维、肌纤维、红细胞等染成深浅不同的红色。一般认为，天然的苏木精无染色能力，只有氧化失去两个氢原子才成为酸性染料苏木红，但它对组织的亲和力极弱，因此需要加媒染剂如铝盐，螯合成蓝色、强碱性、带正电荷的铝一苏木红色锭，这样才会与带负电荷的细胞核磷酸基极性结合而完成细胞核的染色l3 J。

　　HE组织教学切片褪色的原因可能有：(1)长期暴露在阳光、空气或高温中，HE染料中的氧化剂可继续进行氧化作用，最终破坏大部分的苏木红使其成为无色的化合物，因此陈旧的HE组织切片中看不到蓝色的细胞核。(2)组织在固定时使用的非中性固定液以及染色过程中酸性分色液(盐酸)在组织内残留，使细胞中蛋白质的酸、碱性物质改变，特别是酸性物质部分发生变性，与苏木红和铝结合成带正电荷有染色作用的蓝色色精逐渐失去结合力，导致组织褪色 。(3)HE染色的教学切片多用中性树胶作为封固剂。

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