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claudin一1在胆囊癌中的表达及意义

　　1 资料与方法

　　1．1 一般资料2007年1月至2010年6月，选取蚌埠医学院第一附属医院手术切除且经病理证实的胆囊癌组织标本47例，男20例，女27例；年龄33～80岁，其中>160岁者25例，<60岁者22例。组织类型：腺癌42例，腺鳞癌3例，鳞癌2例。病理分级：高分化(I级)9例，中分化(Ⅱ级)l8例，低分化(Ⅲ级)2O例。按Nevin分期：I期1例，Ⅱ期2例，Ⅲ期10例，Ⅳ期8例，V期26例。有淋巴结或远处转移者33例，无转移者l4例。另外选取18例胆囊腺瘤和15例慢性胆囊炎组织标本作为对照。

　　1．2 实验方法 claudin．1兔抗人克隆抗体购自Lab Vision．NeoMark公司，sP试剂盒及DAB显色剂由福州迈新生物技术开发有限公司提供。采用免疫组织化学sP法，实验过程严格按试剂盒说明书进行，主要步骤为：微波抗原修复(100°C，15 min)，过氧化氢清除内源性过氧化物酶活性，正常羊血清阻断非特异性染色，依次加一抗(1：100稀释)、生物素标记的二抗和酶标链霉亲和素孵育(37 ℃ ，20 min)，DAB显色。用PBS液替一抗作阴性对照。

　　1．3 结果判定claudin．1阳性颗粒呈棕黄色，定位于细胞膜或细胞质。参照Sobel等 的标准，高倍镜(×400)下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定。染色强度评分标准：不着色为0分，黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。阳性细胞所占比例评分标准：阳性细胞数<10％者0分，10％ 一<40％者1分，40％ 一<70％者2分，≥70％者3分。

　　两者评分相加，0—2分为一，2分为+，3～4分为2+，5—6分为3+。

　　1．4 统计学方法采用 检验和秩和检验及四格表资料的确切概率法。

　　2 结果

　　2．1 胆囊癌、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组织中claudin 1的表达claudin．1阳性染色呈黄棕色，定位于细胞膜、细胞质。claudin一1在胆囊癌、胆囊腺瘤及慢性胆囊炎组中的表达率分别为89．4％、27．8％和26．7％，差异有统计学意义(P<0．01)(见表1)。2．2 胆囊癌临床病理参数与claudin．1表达的关系与胆囊癌患者的年龄、性别、肿瘤组织学类型间claudin一1表达差异均无统计学意义(P>0．05)，但病理分级Ⅱ 一Ⅲ级标本中claudin．1表达明显高于I级，Ⅳ ～V期患者标本中异常表达率高于I一Ⅲ期(P<0．05)，有转移者高于无转移者(P<0．05)3 讨论紧密连接结构的完整性的丧失可能是肿瘤发生、发展进程中的重要步骤，肿瘤细胞常表现为紧密连接的结构改变功能不足。连接蛋白表达变化导致细胞连接的减弱和瓦解是肿瘤细胞侵袭和转移原因之一。紧密连接蛋白claudin．1在胆囊癌中的表达情况有待研究。

　　claudin．1蛋白是紧密连接蛋白中的一种，在许多恶性肿瘤中有所报道。在有些肿瘤中claudin一1表达明显下调，这表明该基因具有抑制肿瘤发生、发展的作用 J。然而在很多报道中claudin-1高表达在肿瘤的发生中起作用，Dhawan等 在研究结直肠癌组织中促进其发病机制时发现，chudin·1过表达可以抑制E．cadhefin表达，从而促使13一cadherin／Tcf信号通路表达上调，因此可以导致肿瘤的发生发展。

　　在肝胆胰系统肿瘤中Zsuzsanna等 的研究结果表明claudin．1蛋白更多表达于肝内胆管肿瘤中，在胆囊癌中表达低于肝内。Tsukahara等 认为claudin．1在胰腺癌中表达较强且其高表达与胰腺癌的恶性进展密切相关。本实验结果提示，claudin 1在胆囊癌中阳性表达率为89．4％，明显高于胆囊腺瘤组及慢性胆囊炎组中表达率。说明claudin．1的高表达，细胞连接结构的破坏在胆囊癌的发生中起作用，但其确切机制尚不清楚。

　　进一步分析claudin-1表达与胆囊癌临床病理参数的关系后发现，其表达率在差分化肿瘤细胞中明显高于高分化者，这与国外报道 9 相一致，说明claudin-1的高表达可能提示胆囊癌的不良生物学行为。另外Nevin分期Ⅳ ～V期患者标本中表达率明显高于I一Ⅲ期，有转移者明显高于无转移者，提示claudin一1的高表达在胆囊癌的侵袭及转移中起一定的作用。与国内在胃癌中的研究结果相似。

　　Yoon等研究表明过表达的claudin．1增加正常肝细胞和肝癌细胞侵袭能力，机制可能为claudin l表达能明显诱导基质金属蛋白酶2的表达。

　　本实验结果提示claudin．1蛋白在胆囊癌的发生、侵袭及转移机制中均担任角色，但确切作用机制仍需进一步研究。在此基础上claudin一1在胆囊癌诊断以及判断预后中的价值值得深究。进而是否可以通过干扰或激活此蛋白的基因、转录因子从而恢复细胞问正常紧密连接结构降低肿瘤发生率及减弱肿瘤细胞侵袭转移，能否成为新的胆囊癌基因治疗靶点将成为研究热点。

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