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《中国药房》生半夏对生川乌中生物碱溶出量的影响

　　【摘要】目的：测定生川乌与不同比例的生半夏配伍水浸液中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。方法：将生川乌与生半夏分别按l：0、l：0．125、1：0．25、1：0．5、l：0．75、l：l、l：2的比例配伍，采用HPLC法测定各比例配伍样品中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量。色谱条件为：HypersilBDSC18(5m，4．6mmx250mm)色谱柱，流动相为甲醇：水：氯仿：三乙胺(70：30：2：0．1)，流速为1．Oml／min，柱温30°C，检测波长235nm。结果：乌头碱在1．5g／II11．-25．0g／ml(t=0．9996)、新乌头碱在17．0“g／ml-85．0“g／rrd(t=0．9998)、次乌头碱在16．0g／m【60．0g／ml(0．9995)范围内线性关系良好。随着生半夏配伍比例的增加，生川乌中3种生物碱的溶出量逐渐降低。结论：生半夏可降低生川乌水浸液中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的溶出量。

　　【关键词】高效液相色谱法；乌头碱；新乌头碱；次乌头碱；含量测定

　　【中图分类号】R284．1【文献标识码IA【文章编号]1004--6879(2013)02--9104--03

　　乌头和半夏是出自“十八反”的药对，但从古至今在许多处方中配伍使用，如孙思邈(《千金要方中的大五饮丸、半夏汤，(《金匮要略》中的赤丸方，宋代太平惠民和剂局方中的十四味建中汤等；以及近代外敷治疗膝骨性关节病的乌头半夏散，治疗乙肝的神丹等。乌头和半夏能否共用，一直是学者们争论的焦点。本研究通过探讨生川乌与不同比例生半夏配伍后水浸液中3种生物碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱，生物碱是乌头的主要毒性成分)的含量，探讨生川乌与生半夏毒性最小的配伍比例，以期为临床用药提供实验依据。

　　1仪器与试药

　　1．1主要仪器安捷伦l200高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；HylzemilBDSCI8(5m，4．6mmx25omm)色谱柱，大连伊利特分析仪器有限公司。

　　1．2试药乌头碱(批号：201l011)、次乌头碱(批号：201101RS)、新乌头碱(批号：201lOl1)对照品，云南特法特生物科技有限公司。生川乌(批号：0902l2)，河北省光明饮生有限公司汉草饮生厂；生半夏(批号：l00l01)，河北省安国市光明饮片加工厂。

　　2方法与结果

　　2．1色谱条件流动相为甲醇一水一氯仿一三乙胺(70：30：2：0．1)，检测波长235nm，流速1．0ml／min，柱温30~C，进样量l0u。

　　2．2对照品溶液的制备分别取对照品精密称定，an-氯甲烷溶解，配成lml含乌头碱50g、新乌头碱100g、次乌头碱160g的混合对照品溶液。精密量取混合对照品溶液稀释成lml含乌头碱分别为25g、l2．5ug、6．25ug、3．125ug、1．5625ug的等比稀释溶液。

　　2．3供试品溶液的制备称取单味生川乌(生川乌：生半夏)，3倍量水浸泡3次，每次24h，合并滤液，用等体积乙醚提取3次，乙醚萃取液合并后20°C下蒸干，加二氯甲烷溶解，即得供试品溶液。其余不同配伍比例组处理同单味生川乌。

　　2．4方法学考察

　　2．4．1线性范围考察：分别精密吸取系列混合对照品溶液l0l，按照2．1的色谱条件进行测定。以峰面积为纵坐标，进样浓度(g／m1)为横坐标，绘制标准曲线，得乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的回归方程分别为：／1-14．502X+0．2743、r=0．9996，Y=I1．2l6)．7607、=I)．9998，Y=l1．6245．495j'--M)．9996。鸟碱在1．5g／ml-25．0g／ml、新乌头碱在17．0g／l85．0，ml、次乌头碉芷16．0g／l-160g/llVa范围内，线性关系良好。

　　2．4．2精密度试验：精密吸取乌头碱浓度为50ug／md的混合对照品溶液l0l，连续进样5次，乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的峰面积ID值分别为1．02％、1．21％、1．08％(n=5)，说明仪器精密度良好。

　　2．4．3重复性试验：精密称取生川乌样品，按2．3的方法操作制备供试品溶液，重复测定5次，得新乌头碱、乌头碱和次乌头碱的平均含量分别为0．080mg／g、0．021mg／g、0．125mg／g，RSD值分别为1．21％、1．16％、1．13％，表明实验有很好的重复性。

　　2．4．4稳定性试验：在相同实验条件下，各供试品溶液分别于室温下放置0、4、8、12、24h后测定，结果见表1，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

　　2．4．5加样回收率试验：精密吸取对照品溶液，其中含乌头碱l2．5ug、新乌头碱25g、次乌头碱40g，置于25ml三角烧瓶中，室温下挥去二氯甲烷，精密称取生川乌加入三角烧瓶，按照2．3的条件制备供试品溶液，按照2．1的色谱条件进行含量测定，计算回收率(n=5)。结果乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的平均加样回收率分别为98．79％、97．340／0、101．330值分别为1．1％、1．08％、1．21％。

　　2．5供试品测定分别精密吸取生川乌、生半夏不同比例配伍组供试品溶液10l进行含量测定，结果见表2：随着半夏比例的增加，生川乌中3种生物碱的溶出量均下降，显示生川乌毒性降低。3讨论乌头类生物碱是生川乌中的主要毒性成分，同时也是其主要有效成分。乌头类生物碱的测定方法有酸碱中和法、分光光度法、薄层扫描法等，目前最常用的是薄层扫描法中的高效液相色谱法(HPLC)。2010中国药典中采用高效液相色谱法可以同时测定6种单酯型和双酯型生物碱的含量，操作简便，样品用量少，杂质分离效果好，乌头碱、次乌头碱、新乌头碱均达到了基线分离，回收率、重现性、精密度均很好。本研究研究发现，生川乌中乌头碱、新乌头碱和次乌头碱的含量随生半夏加入量的增加而降低，说明生川乌的毒性和药效也会随着半夏加入量的增加而降低，但与十八反中二药合用会引起剧烈的毒性反应或副作用的说法不符，有待进一步的研究探讨。

　　本篇医学论文是来自《中国药房》，如果您有兴趣可以点击查看。

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