近年来，预防和延缓皮肤的衰老成为研究的热点之一。补益营卫方从补益营卫的角度出发组建而成，其方药对衰老小鼠皮肤中的SOD、MDA等指标产生的影响已有相关报道，而对衰老皮肤弹力纤维的影响未见报道。本文通过构建D一半乳糖衰老模型，研究补益营卫方对皮肤弹力纤维的影响。

 

　　1 材料与方法

 

　　1．1 实验动物昆明种雌性小鼠60只，清洁级，2—3月龄，重量(20±2)g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(2011—0001)。

 

　　1．2 实验药物补益营卫方药由人参5g、生黄芪15g和炙甘草7g等组成，购自宁夏医科大学中医门诊部。上方常规水煎2次，合并滤液浓缩至生药含量lg·mL一，4°C冷藏保存，使用时用生理盐水稀释至所需浓度。设维生素E为阳性对照组，购自市售药店(厦门星鲨制药有限公司出品)。

 

　　1．3 实验试剂D一半乳糖购自美国amresco公司；弹力纤维染色试剂盒购自北京益利精细化学品有限公司；苏木素、中性甲醛、乙醇、二甲苯等常规试剂由宁夏医科大学总医院病理科提供。

 

　　1．4 造模和取材60只昆明种雌性小鼠，按体重随机分为六组，每组10只，分别设为正常组、模型组、VE对照组、补益营卫高剂量组、中剂量组和低剂量组。参照文献法，除正常组外其它各组每日背部皮下注射10％D一半乳糖1000mg·～，连续6周，正常组每日皮下注射生理盐水1次(0．1mL／10g)，同时正常组和模型组每13灌服等剂量生理盐水，补益营卫方高、中、低剂量组每天分别按8、4、2g·kg 的剂量灌胃给药，VE对照组按50mg-kg 剂量灌胃给药，每日1次，连续6周，每周禁食称重1次。取材前1d用配置的8％ 硫化钠溶液给小鼠项背部脱毛，取材当天，小鼠处死后，剪下背部脱毛皮肤，置于中性甲醛中固定。

 

　　1．5 染色方法将固定标本取出脱水，透明，浸蜡后包埋。弹力纤维采用verhoeff铁苏木素染色。

 

　　1．6 图像分析弹力纤维verhoeff铁苏木素染色：每组各10张样本切片，每张切片选取3个视野，每个视野摄取一个图片，应用专业图像分析软件Image—Pro Plus 6．0半定量分析每张图片内弹力纤维的含量，每张切片取其平均值，所得到的积分光密度值(IOD)作为皮肤组织弹力纤维含量的测定值。

 

　　1．7 统计学方法应用SPSS 11．5软件进行数据分析。实验数据用( ±s)表示，进行方差齐性检验，方差不齐选用秩和检验。

 

　　2 结果

 

　　2．1 小鼠皮肤组织弹力纤维染色显微镜观察结果光镜(400倍)下显示，皮肤弹力纤维呈黑色或蓝黑色，细胞核也呈黑色，胶原纤维为红色。正常组弹力纤维呈细丝状，含量较丰富。模型组弹力纤维数量减少，断裂，增生；VE对照组，高、中剂量组弹力纤维含量增加呈细丝状，其中高剂量组含量增加较明显；低剂量组与模型组相比变化不明显。

 

　　2．2 小鼠皮肤组织弹力纤维含量的变化 应用IPP 6．0图像分析软件处理后其结果显示(见表1)，模型组与正常组相比，弹力纤维表达含量减少(P<0．05)，应用补益营卫方后，各组的积分光密度与模型组相比均有提高，其中高剂量组与模型组差异有统计学意义(P<0．01)，VE组与模型组相比差异也具有统计学意义(P<0．05)。

 

　　3 讨论衰老是指随着增龄，个体发生的功能性和器质性衰退的渐进过程。皮肤作为人体最大的器官，其衰老是人体衰老的一部分。老化皮肤表现为皮肤松弛，皮肤弹性降低，产生皱纹，色素沉着等体表特征，其中皱纹是老化皮肤最显着的特征，而皮肤的充盈饱满和富有弹性主要依赖于胶原纤维和弹力纤维。

 

　　非酶糖基化(NEG)衰老学说认为糖基化造成的蛋白质的交联损伤是衰老的主要原因。胶原蛋白与细胞外液的葡萄糖发生NEG形成高级糖基化终产物(AGEs)，且随着年龄的增长而增多。随AGEs的进行性增加，胶原蛋白形成分子间交联，不但降低了结缔组织的通透性，还使养料及废物的扩散性能减弱、组织延展性和硬度增加；降低了胶原的可溶性而难以被胶原酶水解，造成皮肤弹性下降，皱纹产生。在光老化皮肤中AGEs通过上调基质金属蛋白酶(MMPS)的表达和下调胶原蛋白的表达，使胶原纤维合成减少，降解增加，最终胶原纤维含量减少。弹性蛋白与细胞外液的葡萄糖发生NEG形成AGEs，导致弹性纤维发生变性交联，弹性消退、皮肤变薄、含水量减少，皮肤进一步萎缩、变皱。胶原蛋白和弹力蛋白的含量减少是皮肤的老化的重要原因。

 

　　成纤维细胞既能合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白，又生成胶原纤维、网状纤维和弹性纤维。

 

　　在衰老皮肤中，成纤维细胞数目减少，功能紊乱，合成蛋白、纤维的功能受损，其合成蛋白的能力下降，同时还可以产生大量异常弹性蛋白，导致皮肤弹性下降，皱纹增多，且难以平复。弹性纤维的退化，表现为真皮乳突层的弹力纤维网消失，弹力纤维降解变性、数目减少、变细甚至片段化，使皮肤拉伸后弹性回复力减弱和皮肤松弛，在皱纹的形成与发展上起着重要作用。有研究表明，补益营卫方能够促进皮肤成纤维细胞的增殖。因此认为成纤维细胞增加，其合成蛋白的能力增加，从而改善皮肤衰老状况。羟脯氨酸约占胶原蛋白全部氨基酸残基的13．4％，是胶原纤维和胶原蛋白中的一种主要而又相对恒定的氨基酸。补益营卫方能够增加皮肤中羟脯氨酸的含量，使衰老皮肤胶原蛋白的合成增加，进而促进胶原纤维形成。补益营卫方是否能够增加弹力纤维的含量以改善衰老皮肤状况有待进一步研究。

 

　　本实验通过构建D一半乳糖小鼠皮肤衰老模型，结合补益营卫理论，探讨补益营卫方对小鼠皮肤弹力纤维的影响。中医理论认为，营卫由水谷精微所化生，营气行于脉中，以化生血液，营养周身，为皮肤提供滋养；卫气行于脉外，善走窜达于体表，起到温润皮肤、肌肉，主司汗孔的开合以防御外邪的作用。营卫之气在皮肤交会、气化，温养皮肤，以维持皮肤细胞的分化、蛋白合成，是使皮肤保持厚度的基础物质。营卫的盛衰与皮肤衰老直接相关，通过调节营卫，以充皮肤，肥腠理，可达到延缓皮肤衰老的功效。本文结果显示，模型组与正常组比较小鼠皮肤弹力纤维减少，变性，增粗；而应用补益营卫方后，各组与模型组相比弹性纤维数量均有所增加，由计算机图像系统分析的结果显示，高剂量组与模型组积分光密度值相比差异最为明显(P<0．01)。因此认为，补益营卫方能够发挥其调补营卫的作用，改善皮肤弹力纤维的状况，在一定的程度上起到延缓皮肤衰老的作用。

 

　　本文节选自《山西医科大学学报》的医学论文，感谢你的阅读！