肺动脉高压(pulmonary hypertension，PH)是临床常见又难以治愈的心肺血管疾病之一，在形态学上常表现为肺小动脉痉挛、内膜增生和重构。

 

　　内皮细胞是血管平滑肌与血液之间的重要屏障，其能分泌多种血管活性物质，对维持血管正常功能具有重要意义。因此，维持内皮细胞的功能是当前治疗肺动脉高压的研究热点之一。硫化氢(hydrogen sulfide，Hs)是第三种气体信号分子，研究发现HS具有抑制肺血管重构和保护心脏功能作用，而Naris是外源性Hs的供体，在体内转化为HS。H S能否降低肺动脉高压以及如何调控肺动脉高压，目前尚不清楚。本研究旨在通过NariS干预治疗颈动静脉吻合肺动脉高压，探讨HS对肺动脉高压血管内皮细胞的调控机制。

 

　　1 材料与方法

 

　　1．1 动物分组及肺动脉高压模型的建立3O只雄性SD大鼠(购自沈阳军区总医院动物实验科)，随机分为对照组(一10)、实验组(一10)及HalS干预组(一10)。将大鼠麻醉后固定在解剖台上，颈部纵行切口，约1．5 cm，暴露左颈外静脉及左颈总动脉。对照组大鼠分别结扎左颈外静脉及左颈总动脉；实验组和干预组大鼠，近心端以血管夹阻断血流，远心端结扎、切断，肝素冲洗血管，动静脉近端端端吻合；干预组大鼠腹腔注射NariS(56mol／kg·d)，实验组和对照组每天给予腹腔注射同等剂量的生理盐水，饲养ll w。

 

　　1．2 血流动力学检测大鼠称体质量后，用戊巴比妥钠(33mg／kg)麻醉后，固定在小动物解剖台上，分离出右颈外静脉，远端结扎，近端活结准备。将微导管连接到换能器上再连接于BI420E系统，调零，肝素盐水润管。小剪刀剪开静脉壁，将微导管插入静脉中，将近端活结系紧以固定微导管。利用右心导管法，通过BI420E系统测定并记录平均肺动脉收缩压(mPAP)。

 

　　1．3 右心室肥厚指数的检测大鼠麻醉后，固定于小动物解剖台上，开胸，完整切下大鼠心脏，分别剪取右心室(RV)和左心室+室间隔(LV+S)，用滤纸吸干水分后称质量，计算RV／(LV+S)值。

 

　　1．4 血浆内皮素ET-1检测采用酶联免疫吸附试验(ELIsA)法进行，严格按试剂盒的说明步骤，检测大鼠血浆中ET一1的含量。

 

　　1．5 内皮细胞凋亡检测利用TUNEI 方法检测肺血管内皮细胞的凋亡指数，具体步骤按TUNEL凋亡检测试剂盒说明进行。

 

　　1．6 统计学方法利用SPSS 18．0统计学软件进行数据统计与分析，计量资料用均数±标准差(x±t)表示，各组大鼠相关数据采用两独立样本的t检验，以P<O．05为差异有统计学意义。

 

　　2 结果

 

　　2．1 大鼠一般情况颈动静脉吻合11w后，大鼠体质量下降，呼吸急促，出现腹水、肝脏肿大、四肢发绀、心脏增大等表现。

 

　　2．2 血流动力学结果与对照组相比，实验组及干预组大鼠平均肺动脉压力均显著升高，差异有统计学意义(P<0．05)；干预组大鼠平均肺动脉压力较实验组下降，差异无统计学意义(P>0．05)(见图1)。

 

　　2．3 右心室肥厚指数测定实验组及干预组大鼠右心室肥厚指数均显著高于对照组(P<0．05)，干预组大鼠右心室壁增厚程度较实验组降低，差异无统计学意义(P>0．05)。

 

　　2．4 血浆中ET-1含量检测实验组大鼠血浆中ET一1表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0．05)，H S干预治疗11 w后，干预组大鼠血浆中ET～1表达水平显著低于实验组，差异有统计学意义(P<0．05)(见图1)。

 

　　2．5 内皮细胞凋亡检测颈动静脉吻合11w后，实验组及干预组大鼠内皮细胞凋亡数量增多，与对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)；干预组大鼠内皮细胞的凋亡数量较实验组明显减少，差异有统计学意义(P<0．05)。

 

　　3 讨论本研究采用左颈总动脉与左颈外静脉近心端吻合建立高肺血流量肺动脉高压模型，术后l1w，实验组大鼠肺动脉压力明显高于对照组，实验组大鼠右心室肥厚指数显著高于对照组，结果证明通过颈动静脉吻合成功建立了肺动脉高压动物模型。Hz s是新近发现的第三种气体信号分子，其在体内主要是以L～半胱氨酸为底物，在胱硫醚一l3一合酶和胱硫醚一裂解酶的催化作用下产生。研究发现人体绝大部分组织都能产生内源性HS，这些HS可起到降低肺动脉高压及抑制心衰进程等作用 引。本研究利用NariS对肺动脉高压的大鼠进行干预治疗，发现干预组大鼠在NariS腹腔注射11w 后，肺动脉收缩压明显降低(P<0．05)，提示Hs具有调节大鼠肺动脉高压的作用。肺血管内皮细胞是血液与血管平滑肌问的重要保护屏障，能降低血管壁通透性、保护血管壁平滑肌细胞及分泌多种调节血管收缩及扩张的血管活性物质。内皮细胞受损是肺动脉高压的始动因素之一，受损的内皮细胞释放的各种活性因子导致血管平滑肌细胞异常增殖，内皮细胞分泌血管活性物质失调，缩血管物质分泌增多，舒血管物质分泌减少，导致肺动脉高压的发生。研究表明Hs对肺血管内皮细胞产生重要的影响，本研究通过HS对肺动脉高压模型的干预治疗，发现实验组大鼠的右心室肥厚指数、内皮细胞凋亡指数、内皮素ET一1表达均显著高于对照组，而经Hs干预后大鼠的右心室肥厚指数、内皮细胞凋亡指数、内皮素ET一1等指标明显下降。结果提示Hs可能通过抑制内皮细胞的凋亡及内皮素ET一1蛋白的表达干预调节大鼠肺动脉高压的发生发展。近期研究发现HS可以通过促进ERK1／2及p38MAPK 的磷酸化 、影响细胞内的信号转导，从而实现调控血管的功能，参与内皮细胞的增殖。

 

　　总之，外源性HS通过抑制内皮细胞凋亡数量及内皮素ET一1蛋白表达，干预高肺血流性肺动脉高压的进展。Hs是通过何种信号传导通路进行调控肺动脉高压发生，有待进一步研究。

 

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