功劳去火片口 由功劳木、黄柏、黄芩、栀子等4味组成，主要用于实热火毒所致的急性咽喉炎、急性胆囊炎和急性肠炎，药效学实验表明其具有较强的抗菌和抗病毒的作用。为了给临床的安全用药提供参考依据，本实验以血常规、血液生化、脏器系数和组织学检查等为主要指标，观察大鼠连续30 d大剂量灌服功劳去火片后对机体产生的毒副反应及其程度，确定中毒的靶向器官以及长期用药后可能出现的延迟性毒副反应。

 

　　1 材料与方法

 

　　1．1 实验材料

 

　　1．1．1 药物功劳去火片，规格：0．5 g／片(相当于生药2．51 g)，批号110201，由医院自制生产。临床用法用量：3片／次，3次／d。计算成人1 d最大用量：0．5 g／片×3片／次×3次／d／60 kg一0．075 g／kg／d(0．3765 g生药／kg／d)。

 

　　1．1．2 动物SD大鼠80只，体质量(1004-10)g，7周龄，雌雄各半，由四川I省实验动物中心提供，生产许可证号：SCXK (川)201l一0006，合格证号：

 

　　1104025。动物分笼饲养，每笼5只。实验动物使用许可证号：SYXK(川I)2011-0102。室温20~25℃ ，相对湿度55 ～65 。饲料：大鼠颗粒饲料(四川省食品药品检验所动物中心提供，质量符合GB14924—2001规定；饮水为灭菌自来水，符合《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2006)的规定，灭菌方法：121℃灭菌20 min，有效期10 d)。

 

　　1．1．3 仪器 ADVIA120血液分析仪(德国拜耳)；TBA一40FR型全自动生化分析仪(日本东芝)、电子天平DT12001(中国江苏常熟长青仪器仪表厂)、AG一285(瑞士梅特勒一托利多)、徕卡ASP300脱水机、徕卡EG1120包埋机、徕卡PM 2235切片机和徕卡ST 5010染色机。

 

　　1．1．4 试剂 血常规试剂由拜耳医疗保健有限公司提供、生化试剂由上海申能一德赛诊断技术有限公司提供、电解质试剂由上海迅达医疗器械有限公司提供。

 

　　1．2 实验方法

 

　　1．2．1 动物分组 选取健康活泼SD大鼠80只，按性别和体质量随机分为4组，分别为功劳去火片高、中、低剂量组和空白对照组，每组2O只，雌雄各半。

 

　　1．2．2 给药途径、时间及剂量 给药剂量按本品临床成人口服剂量设计。采用经口服灌胃给药 ，每周给药7 d，星期天不停药，每日给药时间相近，连续给药1个月。

 

　　1．2．3 观察指标 给药前及给药期间每3天称体质量1次，并按每笼平均体质量调整给药量。实验期间每天观察大鼠一般状态、体征、摄食量、饮水及粪便状况，每周测进食量1次。发现有中毒反应的动物应取出单笼饲养，重点观察。发现死亡或濒死动物应及时尸检。

 

　　1．2．4 检查指标 连续给药1个月时，药物高、中、低剂量组和对照组各取20只动物，雌雄各半，从股动脉采血。余下动物除不给药外饲养观察同前，停药2w剩余动物同法采血。上述各期动物检查指标具体如下：血液学指标：红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、血小板数(PLT)、白细胞数(WBC)、淋巴细胞百分比(IY 9／6)、中间细胞百分比(NEUT )、粒细胞百分比(M0N0 0A)、网织红细胞百分率(RET)；肝功能：天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(AI P)、总蛋白(TP)、白蛋白(A1B)、球蛋白(GLB)、白／球比值(A／G)、总胆红素(T—BIL)；肾功能：尿素(UREA)、肌酐(CREAA)；脏器指数：给药1个月及停药2 w分别按试验设计股动脉放血处死动物，取出心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑(大脑、小脑)、子宫、卵巢、睾丸和附睾称重。系统尸解：连续给药1个月及停药2 w分别处死动物后，立即按实验动物病理学程序进行常规尸解。检查受试动物各主要脏器的外观、色泽、质地，各脏器间的原有联系。为便于观察反映病灶在各脏器间的关系，采用脏器联合取检法。

 

　　组织形态学：在给药1个月及停药2 w股动脉放血处死动物，对药物高、中、低剂量组和对照组的心、肝、脾、肺、肾、脑(大脑、小脑、脑干)、垂体、脊髓(颈段、胸段、腰段)、睾丸、附睾、前列腺、子宫、卵巢、胰腺、肾上腺、食道、胃、十二指肠、回、结肠、膀胱、淋巴结(颌下淋巴结、肠系膜淋巴结)、气管、主动脉的组织形态学检查。方法：取上述器官组织一块，10 甲醛液固定，修剪、包埋切片、染色和封片等，最后镜检。

 

　　1．3 统计学方法采用SPSS19．0统计软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(z±s)表示，各组间比较采用单因素方差分析，P<O．05为差异有统计学意义。

 

　　2 实验结果

 

　　2．1 对大鼠一般情况的影响连续给药30 d，各剂量组大鼠在试验期间均未出现死亡，动物的一般活动正常，外观无异常。在给药期间，药物组有个别大鼠出现便溏现象，但在停药后可恢复，其他未见异常反应。

 

　　2．2 对大鼠摄食量的影响连续给药30d，药物中、低剂量组大鼠进食情况正常，与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0．05)。与空白对照组比较，高剂量组在第1周进食量差异有统计学意义(P<O．05)

 

　　2．3 对大鼠体质量的影响与空白对照组比较，药物中、低剂量组，大鼠体质量增长正常，差异无统计学意义(P>0．05)。高剂量组雄性大鼠在第10～13天体质量减轻，差异有统计学意义(P<0．05)；雌性大鼠在第lO天体质量减轻，差异有统计学意义(P<0．05)。

 

　　2．4 对大鼠血液学指标的影响结果显示，功劳去火片连续给药30 d及停药2w后，各剂量组大鼠血液学指标(WBC、RBC、HGB、PLT、NEUT、LY、MONO)与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0．05)(见表5)。

 

　　2．5 对大鼠血液生化学指标的影响连续给药30d及停药2 w后，各剂量组血液生化学指标(GLU、BUN、Crea、T—CHOI 、AI T、AST、TP、AIB、T—BII 和ALP)与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0．05)。

 

　　2．6 对大鼠主要脏器重量系数的影响连续给药3d，各剂量组与空白对照组在心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、睾丸、卵巢和脑的脏器系数方面比较，差异无统计学意义(P>0．05)；停药2 w后，各剂量组脏器重量系数与空白对照组比较差异无统计学意义(P>0．05)。

 

　　2．7 病理学检查连续给药30d和停药2 w后处死动物，取心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、睾丸、子宫、卵巢、脑、肠和胃等进行病理组织学检查，各脏器均未见病理组织学改变。

 

　　3 讨论功劳去火片组成药全为清热药，药性寒凉，多服能损伤阳气，影响脾胃消化，这与大剂量组与空白对照组相比出现摄食量减少和体质量低的情况相符，提示功劳去火片应用中应中病即止，以免多服而伤脾胃，另外在治疗时可适当考虑配伍维生素类药物。

 

　　本研究长期毒性试验周期为30d，能够支持临床<2w用药周期，因而本品临床用药周期不要超过2w。

 

　　4 结论功劳去火片高、中、低剂量组，分别相当于临床日用量的80倍、40倍和2O倍，连续给予大鼠30d。高剂量组对大鼠摄食量、体质量增长有一定程度影响，其他未见异常。本品临床安全剂量为3g／kg(相当生药15g／kg)以下。

 

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