开塞通为本院脑病科中风专药，由本院名老中医研制(于2003年生产，制剂许可证号：鄂Z200311709，药物组成：地龙、水蛭、蜈蚣、僵蚕、川芎等)，该药在临床上已取得了一定疗效，本实验旨在观察开塞通对大鼠局灶性脑缺血的影响。

 

　　1 材料与方法

 

　　1．1 动物及试剂成年健康雄性Wistar大鼠150只，体质量180— 220g，由湖北科技学院动物实验中心提供，随机分为对照组、缺血组和药物组。MDA及SOD试剂测定盒由南京建成生物T程有限公司提供，其它试剂均为市售。

 

　　1．2 模型制作采用10％水合氯醛以350mg／kg体重，经腹腔注射麻醉大鼠后，切开颈部正中皮肤，分离左侧颈总动脉、颈外动脉并结扎，注意避免刺激迷走神经；从左颈总动脉分叉处插入直径为0．25mm的丝线，沿颈内动脉进入大脑前动脉，距颈总动脉分叉处约1．8—2．0cm缝合切口。术中肛温维持在37℃。

 

　　1．3 药物处理方法药物组于造模前1次／d，连续7d开塞通灌胃(150mg／kg)，连续7d。

 

　　1．4 指标检测各组大鼠于缺血lh后断头处死，在冰面上剥离脑组织，MDA、SOD及ATP酶检测按试剂盒说明进行。缺血72h后用流式细胞计数法检测脑细胞凋亡，步骤如下：①捣碎脑组织，用胰蛋白酶消化，之后生理盐水终止消化，经200目筛网过滤，高速离心后去上清夜，以PBS洗2次；②把待测细胞的浓度调整为0．5—1×10 个／ml；③取lml细胞，1000rpm，4cI=离心10min，弃上清；④加人lml冷的PBS，轻轻振荡使细胞悬浮；⑤1000rpm，4℃离心10min，弃上清；⑥将细胞悬于200 BindingBufer；⑦加入101xl Annexin V—FITC和5lPI，轻轻混匀，蔽光室温反应15min或4℃反应30min。

 

　　加入3001xl Binding Bufer，在lh内上机检测。

 

　　1．5 统计学分析实验数据以(x±s)表示，采用统计软件SPSS12．0版，数据进行单因素方差分析，以P<0．05为差异有统计学意义。

 

　　2 结果

 

　　2．1 开塞通对大鼠脑缺血后脑组织中MDA和SOD的影响大鼠脑缺血后脑组织中的MDA显著升高，SOD活性显著降低(P<0．01)，说明脑缺血造成大鼠脑组织损伤，预先应用开塞通处理后，脑组织中的MDA水平显著低于缺血组，SOD活性显著高于缺血组，表明开塞通可抑制氧化反应。

 

　　2．2 开塞通对大鼠脑缺血后脑组织中ATPase活性的影响与对照组比较，大鼠脑缺血后脑组织损伤、脑组织中Na一K 一ATPase与Ca．ATPase活性显著降低，而经应用药物开塞通后，NaK．ATPase与Ca．ATPase活性均显著高于缺血组，表明开塞通对缺血的脑组织中的ATPase活性具有保护作用。

 

　　2．3 开塞通对大鼠脑缺血后细胞凋亡率的影响对照组凋亡率为1．6±0．6，缺血组凋亡率明显增高，为31．1±3．7，开塞通组为19．2±3．3，较缺血组明显改善(P<O．05)。

 

　　3 讨论脑损伤细胞死亡有两种形式，早期坏死及较晚出现的细胞凋亡。研究表明 ，细胞凋亡在缺血性脑损伤的发生及发展过程中起重要作用。神经元凋亡的数量最终决定着梗死灶的范围，能量耗竭、兴奋性氨基酸释放、自由基生成、蛋白酶激活等机制都可引起神经元的缺血损伤，损伤程度的严重程度与细胞坏死和凋亡的方式密切相关，轻则细胞凋亡，重则细胞坏死。

 

　　开塞通中地龙含有蚯蚓素、蚓激酶，能直接溶解红细胞；水蛭含有水蛭素，能抗凝，二者联合使用，能有效起到抗凝及溶栓的效果，从而扩张脑血管、改善脑部血供循环、改善血液粘稠度、抑制血小板聚集、增加脑血灌注，进而达到改善脑组织缺血缺氧状态，清除自由基的目的。川芎中含有川芎嗪，起到调节TXA2／PGI2的平衡、抑制血小板聚集和黏附、降低纤维蛋白原、血液粘稠度和改善血液流变性的作用，达到改善半暗带区的微循环、缓解局部脑组织的缺血缺氧的作用。

 

　　本实验结果显示，大鼠脑缺血后脑组织中各种活性物质活性下降，如脂质过氧化产物丙二醛MDA显著升高，SOD酶活性及ATP酶活性显著下降，引起离子内环境紊乱，最终神经元损害出现。应用开塞通后，脑组织中MDA显著低于缺血组，SOD、Na一K-ATPase与Ca2-ATPase活性明显高于缺血组，表明开塞通可以抑制氧自由基的的活性，同时保护NaK 一ATPase与ca“一ATPase活性。脑缺血72h后，细胞凋亡率显著升高，开塞通可明显降低细胞凋亡百分率，提示开塞通可能通过抑制神经细胞凋亡，发挥抗脑缺血损伤的作用，其抑制神经细胞凋亡作用可能与其清除氧自由基，抑制脂质过氧化作，保护膜上钠钾及钙ATP酶，抑制钙超载有关，详细机制还有待进一步研究。

 

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