阿尔茨海默病(Alzheimer S disease，AD)俗称老年痴呆，是一种老年慢性进展性中枢神经系统退行性疾病，以认知损害为主要临床表现。随着中国平均寿命的延长和社会人口老龄化的迅速进展，AD对人类健康的危害变得日益严重。研究发现，老年斑、神经纤维缠结以及海马神经元突触丢失和突触可塑性的变化在AD的病理过程中具有重要的地位，可能是AD患者学习记忆功能障碍的神经生物学基础。国内外已经从行为学、胆碱能学说、氨基酸兴奋性毒性学说、炎症免疫学说、信号传导等方面进行了大量的机理研究。由于突触可塑性变化是AD发病的基础之一，因此，阻止突触可塑性变化也就成为防治AD的重要手段。本实验测定实验大鼠海马区TNF-ot、MDA和SOD含量，并对动物进行水迷宫训练，从而探讨防治AD的有效方法。

 

　　1 材料与方法

 

　　1．1 药品与器材药品：丙酮(acetone，成都鸿鹤化工试剂厂)；四氧化锇酸(Osmic Acid Crystal，BATCH0C20C07，JOHNSON MA1TrHEY，MATERLALS TE—CHONOLOGY，英国)；邻苯二甲酸二丁酯(成都鸿鹤化工试剂厂)。器材：颅脑立体定位仪、牙科钻、WQ1002F型Hans水迷宫训练仪，Morris水迷宫(医学科学院药研所制)。

 

　　1．2 实验动物 24月龄雄性SD大鼠60只，体质量(480-20)g，由湖北民族学院动物实验中心提供，实验前适应性训练1周，饲养温度维持在20℃ ，湿度70％左右。经水迷宫测试筛选，剔除不合格动物，随机分成对照组、模型组、水迷宫短期训练组和水迷宫长期训练组。

 

　　1．3 方法采用穹窿一海马伞损伤法造模。对照组：不造模，不施水迷宫训练，于实验开始后与水迷宫训练组同样的方法，在同样时间固定，每次30min。模型组：大鼠经腹腔注射3％戊巴比妥钠麻醉后，固定于脑立体定位仪上，参照大鼠脑立体定位图谱(AP：3．5mill，ML：2．0 IRITI，H：2．7mim)对双侧海马CA3区立体定位，颅顶区备皮，常规消毒手术区皮肤，无菌操作，沿颅顶中线长2 on切口，湿棉球分离骨膜；于前囟后2mm中线旁1 mm处，用牙科钻钻穿颅骨；进行穹窿一海马伞损伤的系列操作；然后缝合切口，其他处理完全与对照组相同。水迷宫短期训练组和水迷宫长期训练组均参照上述造模法完成造模。

 

　　1．4 水迷宫训练模型组于实验开始后，不施水迷宫(Morris)iJiI练刺激，其他同对照组。水迷宫短期训练组：造模后第26d开始水迷宫训练20 d。水迷宫长期训练组：造模后第6 d开始对其进行水迷宫训练40d。训练时每天分上、下午两段，每段训练4次，每次训练间隔为60 S。训练时随机选择一个入水点，将大鼠面向池壁放入水中，如果大鼠在120 S内未找到平台，须将其引至平台。

 

　　第41 d，对各组大鼠重新按照上述方法进行空间学习记忆能力训练5 d，然后进行定位航行实验和空间搜索实验测试。即测量大鼠寻找并爬上平台时所需时间(即潜伏期)，观察大鼠对水迷宫学习、记忆的获取能力以及撤去平台后在120 S内跨过原平台相应位置的次数。

 

　　1．5 化学指标测定及结果判定部分大鼠断头取脑制备海马匀浆，酶联免疫吸附法(ELISA)测定海马区炎性因子TNF-ot含量的水平；比色法检测海马组织匀浆中SOD和MDA含量。

 

　　1．6 统计学处理采用SPSS10．0统计软件进行比较，所有结果均以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用方差分析方法，P<0．05为差异有显著性。

 

　　2 结果

 

　　2．1 水迷宫训练对AD大鼠海马区TNF-x、MDA和SOD含量的影响 模型组大鼠的TNF一仅、MDA含量较对照组明显增加(P<0．01)，而SOD活性明显降低(P<O．05)；水迷宫短期和长期训练组大鼠的TNF—Ot、MDA较对照组均明显增高(P<0．05)，而SOD活性均明显降低(P<0．01)；水迷宫短期和长期训练组大鼠的TNF-Or、MDA较模型组均明显降低(P<0．05)，而SOD活性均明显增加(P<0．O1)；而且短期训练组与长期训练组TNF一0、MDA、SOD活性之间均有显著性差异(P<0．05)。

 

　　2．2 水迷宫训练对AD大鼠学习能力的影响模型组大鼠的逃避潜伏期较对照组明显延长(P<0．01)，表现出学习能力明显下降，提示痴呆大鼠造模成功；水迷宫长期训练组逃避潜伏期较模型组明显缩短(P<0．01)，而水迷宫短期训练组其逃避潜伏期也有所缩短，但差异无显著性(P>0．05)。以上结果提示，经水迷宫训练治疗后，Ap诱导痴呆大鼠的学习能力明显提高，且水迷宫长期训练组疗效优于水迷宫短期训练组3 讨论用穹窿海马伞切断法制造AD动物模型，虽不能形成老年斑、神经纤维缠结两大病理特征性改变，但可造成胆碱能神经元的损伤、突触形态和功能的代偿，可用于监测海马区AD炎症介质含量和功能变化的研究。研究证实，在老年期经常从事脑力劳动，可增强学习记忆，有效防治AD，这种改善学习记忆能力的作用可能与增强动物海马部位SOD含量，减少炎症介质TNF—ot和膜脂质过氧化物MDA的水平以及发挥抗氧化的作用有关。在本实验中，发现模型组大鼠海马区神经元突触的SOD等氧化应激指标明显下降，炎症介质TNF一 和过氧化物MDA明显增加，可能就是因海马神经元突触代偿所致；在水迷宫训练组中，AD大鼠海马区神经元突触的SOD等氧化应激指标有所恢复，TNF一仪和MDA有所减少，而且与训练的时间长短有关，时间越长，恢复越明显，说明水迷宫训练可通过抗炎、抗氧化、抗凋亡等途径对抗海马损伤，改善认知功能，对AD的防治起到一定的作用。在临床中，通过对AD、帕金森、脑血管疾病进行智力训练，可明显改善症状 。穹窿一海马伞损伤诱导AD大鼠的模型可通过增加炎症介质TNF-o造成大鼠海马区的氧化应激损伤，TNF-a作为一种重要的炎症介质，能够刺激细胞产生大量ROS；而补体受体又可以同超氧自由基反应生成MDA，后者介导膜脂质过氧化，损伤血脑屏障及脑细胞膜。因此，增多的炎症介质可透过损伤的血脑屏障及受损的细胞膜，进一步导致其他因子引起的氧化应激和神经褪化的积累，促进AD病情的加重。水迷宫训练能够增加抗氧化酶SOD的活性，具有抗氧化效应，从未发挥保护大鼠海马区氧化还原功能的作用。

 

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