三叶青又叫蛇附子，为蔓生藤本植物。三叶青是一种用途非常广泛的中草药。药理研究表明具有解热、镇痛、抗炎、抗病毒、保肝、增强免疫、抗肿瘤等作用。

 

　　三叶青化学成分非常复杂，已经鉴定出的化学成分有黄酮、黄酮苷、淀粉、还原糖、甾类化合物、氨基酸等 关于三叶青的针剂提取物，目前研究发现含有淀粉、还原糖、黄酮、黄酮苷、甾体类化合物和氨基酸等 其中重要的生理活性物质有黄酮类、黄酮苷类、甾类 由于三叶青的作用非常广泛，具有很强的药用价值，因此，国内对三叶青有效成分的分析研究一直没有停止 笔者对三叶青中有效成分提取方法进行研究，筛选出萃取效果较好的有机溶剂分别是乙酸乙酯、乙醚与甲醇

 

　　1仪器与材料

 

　　1．1 仪器岛津SPD一20A液相色谱仪；岛津LCMS一2020液质联用质谱仪；Agilent6890N气相色谱仪(氢气发生器：CYH一500，进样器：Agilent7683B，色谱柱：HP一5，30m×3201xm×0．25Ixm)；电子天平；旋转蒸发仪。

 

　　1．2 试剂三叶青块根(产自于浙江丽水，计1．25kg，粉碎后过100目筛)；乙醚、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、丙酮、甲醇均为分析纯。

 

　　2 方法与结果

 

　　2．1 回流提取取粉状三叶青150g，平均分成3份，分别加入220rnL蒸馏水，浸泡3d。在6O 下恒温回流提取3d，提取完后的药材呈现棕褐色，浆状 用4层纱布过滤，得滤液约200mI ，棕黄色，备用

 

　　2．1．1 有机萃取：收集滤液，在6O 下旋转蒸发，减压蒸干后得到2．46g浸膏，呈棕褐色，黏着状 将浸膏过硅胶柱，按照极性从小到大，用有机溶剂冲洗。发现浸膏基本不溶于极性小的溶剂。最后用甲醇冲洗，部分溶于甲醇，出现红色物质，经称量仅为0．16g。

 

　　2．1．2甲醇萃取物检测：对用甲醇萃取的收集的红色物质进行高效液相色谱检测，峰号5、7、8的物质含量分别是10．9396、20．0557、23．0946，占比达到54．O9％ 。

 

　　2．2 煎煮提取取500g三叶青，加入800g蒸馏水，浸泡3d。

 

　　将药液分成2份，在IO0~C下，搅拌煎煮3d，煎煮后的药液呈糊状 将糊状提取物倒入2000mL大烧杯中，加入500mL蒸馏水静置1天1夜。之后用四层纱布过滤 两批滤液合并．在60℃下旋转蒸发浓缩，得到1L浓缩液，呈棕黄色．将浓缩液继续过滤1次，析出部分大分子物质，如糖类、淀粉等。

 

　　2．2．1 有机溶剂梯度萃取：用于萃取滤液的有机溶剂根据极性大小为：乙醚<石油醚<二氯甲烷<乙酸乙酯<氯仿<丙酮<甲醇。按极性从小到大逐次进行萃取 用不同配比配置展开剂，展开剂为氯仿一甲醇 比例为10：1，9：1，7：1，5：l，3：1，1：1 在不同比例下，取滤液点板，放在紫外检测器下检测。

 

　　最后得到在3：1的展开剂比例下，乙酸乙酯、乙醚、丙酮、甲醇的分离效果比较好 然后将萃取物分别进行液相色谱与气相色谱分析。

 

　　2．2．2 有机溶剂萃取物液相和气相色谱检测

 

　　2．2．3 甲醇萃取物液质联用检测：因甲醇萃取后的分离效果较好，故用液质联用(LC／MS)检测，其中有4个最大的峰(见图1～5)。甲醇萃取物经过质谱检测后，又用核磁做定量分析，计算出4个主要峰的相对分子质量为：644．70、579．50、691．70、648．65。

 

　　3 讨论分析

 

　　3．1 回流提取 回流提取效果并不很好，用有机溶剂萃取时基本得不到浸膏。可能的原因：① 三叶青中的有效成分未被有效煎煮出来；② 三叶青有效成分主要是黄酮类、甾体类与氨基酸等，是亲脂性物质，难溶于极性小的溶剂；③依旧有部分溶解于水的有效成分，只是量很少，不易用水提取出来；④ 可能与其他成分形成了助溶现象，于是无法提取完全。

 

　　3．2 液相检测 乙酸乙酯分析中，11号峰的含量最高，占48．3025％ ；乙醚分析中，除7、9号峰略高，其余各成分含量较多；丙酮中8号峰含量最高，占41．6450％，其余含量与乙醚相似，含量也较多；甲醇分析中除了3、7、9号含量为28．5137％ 、25．6087％ 和19．4283％ ，其余成分含量较低，萃取效果好。

 

　　3．3 气相检测 乙醚的气相分析结果显示，有一个含量97．07676％，可能由于乙醚提取物中其他物质不易汽化，也可能由于得到了比较纯的有效成分。乙酸乙酯的分析结果没有乙醚好，但是也有两个组分含量较高，只是杂质含量也较多，萃取效果没有乙醚好。

 

　　乙醚、甲醇中均只有一种物质含量特别高，分别为97．07676％、99．34304％；可以对乙醚及甲醇的提取物做进一步的测定和研究。丙酮中有两种物质的成分含量比较高，分别是1号45．61510％ ，2号52．88958％ ，其他成分含量很低。

 

　　3．4 实验结果尝试了用不同萃取剂对三叶青进行提取，并检测其成分含量。在萃取溶剂的选择方面，乙酸乙酯、乙醚与甲醇的萃取效果较好。但是由于成分比较复杂，实验室条件限制等原因，未对有效成分做进一步分离。本研究发现，水提法在沸水煎煮的状态下提取效果比较好，用有机溶剂提取的效果也不错，回流提取并不可取；本实验仅用了，液相色谱分析与气象色谱分析，简单使用过质谱仪，对于三叶青中未知成分结构的鉴定还需要更多更有效的检测方法和仪器。

 

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