单味中药对子宫肌瘤之实验研究_走好职场第一部论文
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子宫肌瘤是妇科最常见的良性肿瘤,由平滑肌纤维和结缔组织组成,所以临床上又称子宫纤维瘤。子宫肌瘤好发于20～50岁的妇女,其中年龄＞40岁的妇女约有50%患有子宫肌瘤,但 Cramer和 Patel经尸体解剖 (autopsy)的统计后认为子宫肌瘤的发生率高达75%［1］。
对于一个不需再生育的妇女而言,全子宫切除(totalhystectomy)是治疗子宫肌瘤的方法之一,然而台湾地区子宫切除术是否有过于泛滥的情形常受质疑。有研究指出台湾地区子宫切除率以台北、台中、高雄为高。变异大多可由医疗资源分布解释,而子宫切除年龄最高分布在40～44岁占29.9%。除癌细胞病变外,以生殖器脱垂的病变为最高,这可以由医疗不适当性解释［2］。因而子宫切除的适当性除须由专家审视外,如果能有更多其他替代疗法,也是对妇女的一种保障。
子宫肌瘤真正形成的原因,至今尚不清楚,但有不少研究认为雌激素 (estrogen )与黄体素(progesterone )与子宫肌瘤的生长有密切关系,这些激素又必须透过生长因子(growth factor )才能运作［3］，而人绒毛膜促性腺激素(human，HCG )也能调节生长。黄体素可刺激子宫肌瘤上皮生长因子(epidermal growh factor )产生，造成子宫肌瘤的增生和分化。子宫肌瘤虽然是由单一的细胞突变开始,而雌激素可增加雌激素接受体(estrogen receptor, ER )与黄体素受体(progsterone receptor,PR )也可促进子宫肌瘤的增生。黄体素则对突变的正常子宫细胞有加速分裂和增生的作用［4］。
性腺激素释放激素强化物 (GnRHa)是经由降低GnRH接受体而使性腺分泌减少,进而使卵巢分泌雌激素和黄体素减少,而抑制子宫肌瘤生长［5］。根据国内研究,GnRHa 在连续注射到12周时,达到最大的疗效,大部分的子宫肌瘤会缩小为原来的一半。缩小的百分比和未结合 PR浓度成反比,而和未结合ER关系不大。因此GnRHa可缩小子宫肌瘤,部分取决于子宫肌瘤上未结合性激素接受体浓度所影响［6］。
子宫肌瘤属于中医医学“积聚”“瘕”范围,瘕是泛指腹腔内的有形肿块而言,所谓者,是指腹腔内有形的肿块,有一定的部位,属血病。所谓瘕者,是指腹腔内无形的气块,无一定的部位,属气病。《内经・灵枢・水胀篇》谓;“石瘕生于胞中,寒气客于子门,子门闭塞,气不得通,恶血当泻不泻,以留止,日益以大,状如怀子,月事不以时下,皆生于女子,可导而下”。《校注妇人良方》谓“妇人腹中瘀者,由月经闭积,或产后血未尽,或风寒滞瘀,久而不消,则为积聚瘕矣”。因此中医认为,六淫之邪,七情内伤,引起脏腑功能失调,气血不合,以致气滞血瘀,新血与旧血凝聚成块,结于胞室,日益长大而成子宫肌瘤。
子宫肌瘤临床表现为月经过多,经期延长,周期缩短,或不规则子宫出血,常会伴有不同程度的贫血。中医认为,脏腑不合,气滞血瘀,冲任失调是本病的主要原因,临床上可以辨证分型治疗。本病是以子宫出血为主要临床症状,病久失血,而导致气血两虚,在治疗时,除出血期以化瘀止血、平时破瘀消外,还必须结合补益气血。对于瘕的治法,《内经》提出“坚者削之,结者散之,留者攻之,滞者导之”的原则;《女科经纶》：“善治瘕者,调其气而破其血,消其食而豁其痰,衰其大半而止”。
汉方医学已有数千年之历史,而且是累积经验的循证疗法之一,由于化学药物引起的药害,以及食品添加物或清洁剂引起的公害等,引起人们对利用自然药物的兴趣,纷纷把目光转向天然中药。依据汉方的思想,绝大多数的妇女疾病是属于体内“血”的异常,中医所谓的“血”,不单是指血液,也包括淋巴液或激素作用。中医对女性的生理及病理独具慧眼,其用药经验可以说是数千年来累积而成。
中药的运用是几千年来前人智慧结晶所在,其内容相当丰富且千变万化。从《内经》、《伤寒论》始,前人从药物的升降浮沉,四气五味,虚实补泻,脏腑归经,针对人体阴阳表里,寒热虚实,把数百种药物归纳,依据理论用于临床。
1 实验材料
1.1 中药材来源 本项研究所测试的中药材来自台北南京泰生堂参药有限公司,实验中药材见表1。
表1 单味药材50%酒精之萃取率 略
1.2 仪器 (1)回转式真空减压浓缩机 (Switzerland BUCHIRE 111 );(2)离心机Centrifuge 5415C (Eppendorf );(3)冷冻干燥机(Eyela; Cool Ace.CA-105 );(4)微量电子天秤(Shimazu, Libror ACF-200 )；(5)显微镜(Olympus, Tokyo )；(6)二氧化碳培养箱(Espec BNA-211 )；(7)血细胞计数器(Hemocytometer; Bright-line )；(8)组织培养角瓶(Corning )；(9)组织培养皿(Falcon ) ；(10)96-Well组织培养盘(Corning )；(11)微量吸管(Biohit )；(12)高温灭菌器(Tomin 1 Medical Equipmene Co,LTD; TM-325)；(13)过滤膜(Coming )；(14)-80℃冰箱(Enviromental Equip. Co; So-Low )。
1.3 子宫肌瘤细胞 由荣民医院妇产科提供病理检体。当患者在妇产科门诊,以内诊与超声波扫描确诊为子宫肌瘤,依临床路径安排入院手术治病者,以做本研究之素材。即由此类患者在手术切除后,立即切取肌瘤组织,放入转输液 (DMEM)中,送实验室做组织培养。
1.4 试药与试剂
1.4.1 培养液 （1）DMEM (Dulbecco’s Minimum Essential Medium ) ；（2）Fetal Bovine Serum (Hyclone: Cat No.1115-L )；（3）Penicillin-Strepetomycin (Seromed: Cat No. 03-033-1B )；（4）L-Glutamine (Seromed: Cat No.0020-1B )；（5）NAA (Mem-Eagle Non-essential Amino Acids Solution )；（6）L-Glutamine 200 mM (Gibco: Cat No. 25930-081) 。
1.4.2 染色剂 （1）Trypan blue (Sigma )；（2）MTT: {3(4,5-dimethylthiazoled 1-2-y1)-2,5-dipheyl tetrasolium bromide } (Boehringer Mannheim GmbK Cat No. 1465 007 )。
1.4.3 一般化学药品 （1）DMSO (Merck, Germany, K23951931, Max 0.05% H2O )；（2）Sodium Hydrogen Carbonate ( Merck, Germany,NaHCO3; Pro analysis )；（3）Isopropanol (Merck, Germany )。
1.4.4 测试药品与酵素 （1）B-Estradiol (Sigma USA )E-2758 Lot 79H0941；（2）Progesteronl (Sigma USA )P-8783 Lot 80K0885；（3）Trypsin, 2.5% (Sigma USA )Lot 1077108；（4）Trypsin-EDTA (Sigma USA )Lot 1089908 ；（5）LSAB(Dako, Denmark, Code No. K0675 )；（6）Monoclonal Anti-Human Progesterone receptors(Dako, Denmark, clone pgR 636, 1:50 )。
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对于一个不需再生育的妇女而言,全子宫切除(totalhystectomy)是治疗子宫肌瘤的方法之一,然而台湾地区子宫切除术是否有过于泛滥的情形常受质疑。有研究指出台湾地区子宫切除率以台北、台中、高雄为高。变异大多可由医疗资源分布解释,而子宫切除年龄最高分布在40～44岁占29.9%。除癌细胞病变外,以生殖器脱垂的病变为最高,这可以由医疗不适当性解释［2］。因而子宫切除的适当性除须由专家审视外,如果能有更多其他替代疗法,也是对妇女的一种保障。
子宫肌瘤真正形成的原因,至今尚不清楚,但有不少研究认为雌激素 (estrogen )与黄体素(progesterone )与子宫肌瘤的生长有密切关系,这些激素又必须透过生长因子(growth factor )才能运作［3］，而人绒毛膜促性腺激素(human，HCG )也能调节生长。黄体素可刺激子宫肌瘤上皮生长因子(epidermal growh factor )产生，造成子宫肌瘤的增生和分化。子宫肌瘤虽然是由单一的细胞突变开始,而雌激素可增加雌激素接受体(estrogen receptor, ER )与黄体素受体(progsterone receptor,PR )也可促进子宫肌瘤的增生。黄体素则对突变的正常子宫细胞有加速分裂和增生的作用［4］。
性腺激素释放激素强化物 (GnRHa)是经由降低GnRH接受体而使性腺分泌减少,进而使卵巢分泌雌激素和黄体素减少,而抑制子宫肌瘤生长［5］。根据国内研究,GnRHa 在连续注射到12周时,达到最大的疗效,大部分的子宫肌瘤会缩小为原来的一半。缩小的百分比和未结合 PR浓度成反比,而和未结合ER关系不大。因此GnRHa可缩小子宫肌瘤,部分取决于子宫肌瘤上未结合性激素接受体浓度所影响［6］。
子宫肌瘤属于中医医学“积聚”“瘕”范围,瘕是泛指腹腔内的有形肿块而言,所谓者,是指腹腔内有形的肿块,有一定的部位,属血病。所谓瘕者,是指腹腔内无形的气块,无一定的部位,属气病。《内经・灵枢・水胀篇》谓;“石瘕生于胞中,寒气客于子门,子门闭塞,气不得通,恶血当泻不泻,以留止,日益以大,状如怀子,月事不以时下,皆生于女子,可导而下”。《校注妇人良方》谓“妇人腹中瘀者,由月经闭积,或产后血未尽,或风寒滞瘀,久而不消,则为积聚瘕矣”。因此中医认为,六淫之邪,七情内伤,引起脏腑功能失调,气血不合,以致气滞血瘀,新血与旧血凝聚成块,结于胞室,日益长大而成子宫肌瘤。
子宫肌瘤临床表现为月经过多,经期延长,周期缩短,或不规则子宫出血,常会伴有不同程度的贫血。中医认为,脏腑不合,气滞血瘀,冲任失调是本病的主要原因,临床上可以辨证分型治疗。本病是以子宫出血为主要临床症状,病久失血,而导致气血两虚,在治疗时,除出血期以化瘀止血、平时破瘀消外,还必须结合补益气血。对于瘕的治法,《内经》提出“坚者削之,结者散之,留者攻之,滞者导之”的原则;《女科经纶》：“善治瘕者,调其气而破其血,消其食而豁其痰,衰其大半而止”。
汉方医学已有数千年之历史,而且是累积经验的循证疗法之一,由于化学药物引起的药害,以及食品添加物或清洁剂引起的公害等,引起人们对利用自然药物的兴趣,纷纷把目光转向天然中药。依据汉方的思想,绝大多数的妇女疾病是属于体内“血”的异常,中医所谓的“血”,不单是指血液,也包括淋巴液或激素作用。中医对女性的生理及病理独具慧眼,其用药经验可以说是数千年来累积而成。
中药的运用是几千年来前人智慧结晶所在,其内容相当丰富且千变万化。从《内经》、《伤寒论》始,前人从药物的升降浮沉,四气五味,虚实补泻,脏腑归经,针对人体阴阳表里,寒热虚实,把数百种药物归纳,依据理论用于临床。
1 实验材料
1.1 中药材来源 本项研究所测试的中药材来自台北南京泰生堂参药有限公司,实验中药材见表1。
表1 单味药材50%酒精之萃取率 略
1.2 仪器 (1)回转式真空减压浓缩机 (Switzerland BUCHIRE 111 );(2)离心机Centrifuge 5415C (Eppendorf );(3)冷冻干燥机(Eyela; Cool Ace.CA-105 );(4)微量电子天秤(Shimazu, Libror ACF-200 )；(5)显微镜(Olympus, Tokyo )；(6)二氧化碳培养箱(Espec BNA-211 )；(7)血细胞计数器(Hemocytometer; Bright-line )；(8)组织培养角瓶(Corning )；(9)组织培养皿(Falcon ) ；(10)96-Well组织培养盘(Corning )；(11)微量吸管(Biohit )；(12)高温灭菌器(Tomin 1 Medical Equipmene Co,LTD; TM-325)；(13)过滤膜(Coming )；(14)-80℃冰箱(Enviromental Equip. Co; So-Low )。
1.3 子宫肌瘤细胞 由荣民医院妇产科提供病理检体。当患者在妇产科门诊,以内诊与超声波扫描确诊为子宫肌瘤,依临床路径安排入院手术治病者,以做本研究之素材。即由此类患者在手术切除后,立即切取肌瘤组织,放入转输液 (DMEM)中,送实验室做组织培养。
1.4 试药与试剂
1.4.1 培养液 （1）DMEM (Dulbecco’s Minimum Essential Medium ) ；（2）Fetal Bovine Serum (Hyclone: Cat No.1115-L )；（3）Penicillin-Strepetomycin (Seromed: Cat No. 03-033-1B )；（4）L-Glutamine (Seromed: Cat No.0020-1B )；（5）NAA (Mem-Eagle Non-essential Amino Acids Solution )；（6）L-Glutamine 200 mM (Gibco: Cat No. 25930-081) 。
1.4.2 染色剂 （1）Trypan blue (Sigma )；（2）MTT: {3(4,5-dimethylthiazoled 1-2-y1)-2,5-dipheyl tetrasolium bromide } (Boehringer Mannheim GmbK Cat No. 1465 007 )。
1.4.3 一般化学药品 （1）DMSO (Merck, Germany, K23951931, Max 0.05% H2O )；（2）Sodium Hydrogen Carbonate ( Merck, Germany,NaHCO3; Pro analysis )；（3）Isopropanol (Merck, Germany )。
1.4.4 测试药品与酵素 （1）B-Estradiol (Sigma USA )E-2758 Lot 79H0941；（2）Progesteronl (Sigma USA )P-8783 Lot 80K0885；（3）Trypsin, 2.5% (Sigma USA )Lot 1077108；（4）Trypsin-EDTA (Sigma USA )Lot 1089908 ；（5）LSAB(Dako, Denmark, Code No. K0675 )；（6）Monoclonal Anti-Human Progesterone receptors(Dako, Denmark, clone pgR 636, 1:50 )。
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