HCV检测方法的建立与发展-护理论文写作发表
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应用转录介导的扩增系统（TMA）可以将HCV RNA的检出率提高到5～10Iu/ml的水平。其原理为：目标序列在逆转录酶作用下，以引物为引导进行逆转录，逆转录酶的RNA酶H活性将杂合链上的RNA降解以后，合成双链的DNA，并在T7 RNA多聚酶的作用下，转录出成千上万个目标RNA序列，这些RNA又可以作为模板进行下一个循环，整个反应是一个自我催化过程，灵敏度高，反应条件简单，扩增效率高，无需专门的扩增仪器，整个反应在一个试管中进行，减少污染。
1 丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立
多年来，专业人员一直探索能够直接检测HCV抗原，以达到缩短窗口期的目的。但是由于HCV抗原的特殊性和相关抗体制备中存在的困难，使这方面的进展受到阻碍。
HCV检测目前存在的主要问题有：
1.由于HCV抗原结构的特殊性，直接检测血清中HCV抗原的技术问题还未彻底解决。
2.抗体（抗－HCV）出现时间晚，从HCV感染后到抗体转阳的时间平均为50～70天，有的患者可延长至6～9个月，检测的“窗口期”较长。
3.病毒基因型复杂而且容易变异，使基因水平的检测质量不够稳定。随着有关人员近年来的不断努力和相关科学的迅猛发展，已经在HCV检测技术方面有了重要进展。
2.1 HCV核心抗原检测
HCV核心抗原是HCV感染者体内出现的早期感染指标，几乎与HCV RNA同时出现，核心抗原和HCV RNA的动力学变化密切相关。
HCV核心抗原检测用双抗体夹心法定性或定量检测血清样品中的HCV核心抗原，其基本原理是：以基因工程核心抗原免疫小鼠后获得的纯抗HCV核心抗原单克隆抗体作为固相包被物，用与固相包被物有不同抗原决定簇的抗-HCV核心抗原单克隆抗体作为辣根过氧化物酶标记物，与血清中的HCV核心抗原反应，OPD显色后进行定性或定量测定。该方法不受被检测样品中抗-HCV的干扰，检测结果准确可靠。可用于HCV早期急性丙型肝炎诊断，抗-HCV阳性感染者的病毒血症分析以及HCV感染者治疗前后病毒血症追踪分析[7]。
有报道，HCV-CAg检测可以较HCV抗体检出时间提早23～46d[8]，且EIA法较PCR法简便、快速，现有能力开展ELISA检测的实验室无需增加特殊设备，均可检测。其结果与RT-PCR方法的复合率为85.71%。因此，在不具备RNA检测条件的实验室开展HCV-CAg检测时很好的筛查方法。有报道，在对180例抗-HCV阴性患者的筛查中，检出HCV－CAg阳性2例，表明仅用抗－HCV检测将有可能存在0.55%感染者漏诊的风险，尤其是对手术前丙肝病毒筛查的病例，它涉及到术中感染责任和用血安全等问题。丙肝核心抗原检测在一定程度上降低了这些风险。因此，丙肝核心抗原检测可作为HCV抗体检测的补充试剂。
2.2 HCV抗原检测
十几年来，一些学者曾经试图建立血清中各种HCV抗原的检测方法，但由于血液中HCV抗原含量太低，用常规方法无法检测出。近年来，由于HCV单克隆抗体的研究成功，已有国内外学者发表了肝组织及人体分泌物中HCV抗原检测成功的报导。如果能加强对HCV中和抗体Wv、抗-HCV-IgM、抗-HCV核心抗体的研究[9]，进一步开发对血清及肝组织内HCV抗原的测定，可能会在丙肝的实验诊断方面取得更大进展。
3 丙型肝炎病毒RNA的检测
现在用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血清中的HCV RNA。基本原理是首先经逆转录酶作用，在特异性引物存在下，将HCV RNA逆转录为单链的CDNA，再通过PCR将CDNA扩增。定性PCR的灵敏度高于定量PCR。罗氏公司的定性PCR的灵敏度为50KIU/L，定量PCR为600KIU/L；拜尔公司的定性PCR的灵敏度为10KIU/L，其定量PCR为615KIU/L。定性PCR检测主要用于急性丙型肝炎诊断，而定量PCR则用于疗效监测。
内科护理论文 http://www.qikanba.com/
应用转录介导的扩增系统（TMA）可以将HCV RNA的检出率提高到5～10Iu/ml的水平。其原理为：目标序列在逆转录酶作用下，以引物为引导进行逆转录，逆转录酶的RNA酶H活性将杂合链上的RNA降解以后，合成双链的DNA，并在T7 RNA多聚酶的作用下，转录出成千上万个目标RNA序列，这些RNA又可以作为模板进行下一个循环，整个反应是一个自我催化过程，灵敏度高，反应条件简单，扩增效率高，无需专门的扩增仪器，整个反应在一个试管中进行，减少污染。
1 丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立
多年来，专业人员一直探索能够直接检测HCV抗原，以达到缩短窗口期的目的。但是由于HCV抗原的特殊性和相关抗体制备中存在的困难，使这方面的进展受到阻碍。
HCV检测目前存在的主要问题有：
1.由于HCV抗原结构的特殊性，直接检测血清中HCV抗原的技术问题还未彻底解决。
2.抗体（抗－HCV）出现时间晚，从HCV感染后到抗体转阳的时间平均为50～70天，有的患者可延长至6～9个月，检测的“窗口期”较长。
3.病毒基因型复杂而且容易变异，使基因水平的检测质量不够稳定。随着有关人员近年来的不断努力和相关科学的迅猛发展，已经在HCV检测技术方面有了重要进展。
2.1 HCV核心抗原检测
HCV核心抗原是HCV感染者体内出现的早期感染指标，几乎与HCV RNA同时出现，核心抗原和HCV RNA的动力学变化密切相关。
HCV核心抗原检测用双抗体夹心法定性或定量检测血清样品中的HCV核心抗原，其基本原理是：以基因工程核心抗原免疫小鼠后获得的纯抗HCV核心抗原单克隆抗体作为固相包被物，用与固相包被物有不同抗原决定簇的抗-HCV核心抗原单克隆抗体作为辣根过氧化物酶标记物，与血清中的HCV核心抗原反应，OPD显色后进行定性或定量测定。该方法不受被检测样品中抗-HCV的干扰，检测结果准确可靠。可用于HCV早期急性丙型肝炎诊断，抗-HCV阳性感染者的病毒血症分析以及HCV感染者治疗前后病毒血症追踪分析[7]。
有报道，HCV-CAg检测可以较HCV抗体检出时间提早23～46d[8]，且EIA法较PCR法简便、快速，现有能力开展ELISA检测的实验室无需增加特殊设备，均可检测。其结果与RT-PCR方法的复合率为85.71%。因此，在不具备RNA检测条件的实验室开展HCV-CAg检测时很好的筛查方法。有报道，在对180例抗-HCV阴性患者的筛查中，检出HCV－CAg阳性2例，表明仅用抗－HCV检测将有可能存在0.55%感染者漏诊的风险，尤其是对手术前丙肝病毒筛查的病例，它涉及到术中感染责任和用血安全等问题。丙肝核心抗原检测在一定程度上降低了这些风险。因此，丙肝核心抗原检测可作为HCV抗体检测的补充试剂。
2.2 HCV抗原检测
十几年来，一些学者曾经试图建立血清中各种HCV抗原的检测方法，但由于血液中HCV抗原含量太低，用常规方法无法检测出。近年来，由于HCV单克隆抗体的研究成功，已有国内外学者发表了肝组织及人体分泌物中HCV抗原检测成功的报导。如果能加强对HCV中和抗体Wv、抗-HCV-IgM、抗-HCV核心抗体的研究[9]，进一步开发对血清及肝组织内HCV抗原的测定，可能会在丙肝的实验诊断方面取得更大进展。
3 丙型肝炎病毒RNA的检测
现在用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血清中的HCV RNA。基本原理是首先经逆转录酶作用，在特异性引物存在下，将HCV RNA逆转录为单链的CDNA，再通过PCR将CDNA扩增。定性PCR的灵敏度高于定量PCR。罗氏公司的定性PCR的灵敏度为50KIU/L，定量PCR为600KIU/L；拜尔公司的定性PCR的灵敏度为10KIU/L，其定量PCR为615KIU/L。定性PCR检测主要用于急性丙型肝炎诊断，而定量PCR则用于疗效监测。
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