多种检测耐甲氧西林葡萄球菌MRS的方法比较-中国医师杂志投稿
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目前国内外虽然用以检测耐甲氧西林葡萄球菌MRS的方法很多，由于MRS本身对甲氧西林耐药存在有不均一性，且甲氧西林不稳定，故常用苯唑西林代替甲氧西林来检测MRS。由于纸片扩散法操作简便、价格低廉，不需要特殊仪器设备，可以和普通药敏实验同时进行，在多种MRS检测方法中，目前很多医院临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，从我们的实验结果看，纸片扩散法与被NCCLS推荐为参考方法的琼脂稀释法对MRS检出率差异无显着性，因此可以用于临床常规微生物实验室，对MRS进行常规检测。
VITEK 32型GPS SV药敏卡方法简单、快捷，从结果看其MRS检出率与琼脂稀释法差异无显着性，虽然其与纸片扩散法MRS检出率也无明显差异，但其检测速度比纸片扩散法更快捷，可以及时给出准确的报告，节约了时间，因此评估GPS SV药敏卡的准确性，为临床找出一种准确而简单、快捷的筛选MRS的方法是极有意义的，且VITEK 32型微生物鉴定药敏分析系统配套使用的GPS SV卡葡萄球菌药敏检测，其苯唑西林检测孔含有4% NaCl，符合NCCLS推荐的检测MRS的方法标准［4］，因此，仪器法GPS SV卡可用于葡萄球菌耐甲氧西林的检测，且简便准确、快速。所以纸片扩散法和仪器法均可用于医院常规实验室MRS检测，但对有条件的实验室建议采用仪器法，目前也出现了一些更准确可靠的方法，即对耐甲氧西林葡萄球菌进行基因层次的分型检测，并也出现了商品化的几种mecA基因乳胶检测法［5］，也是目前可采用的较好的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株及其来源 自2006年1月至2006年5月从江医二附院临床患者的痰、血、尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本，经常规分离得到63 株葡萄球菌，包括凝固酶阳性葡萄球菌50 株，凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）13株。另MRS阳性参考菌株ATCC（R）43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自卫生部临检中心。
1.1.2 苯唑西林纸片 购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司，SDS琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶K为美国Sigma产品，丙烯酰胺、双丙烯酰胺TEMED和TBE为美国Gibcobrl公司产品。法国生物梅里埃公司生产的VITEK 32型鉴定系统及配套的GPS SV葡萄球菌药敏检测卡。
1.2 方法
1.2.1 含4% NaCl M H平板纸片扩散法 由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制0.5麦氏单位菌液接种于含4% NaCl的M H平板，贴1 μg/片苯唑西林药敏纸片，35 ℃、24 h观察结果（CNS孵育48 h）金黄色葡萄球菌（SA）抑菌圈≥13 mm为敏感，11 mm～12 mm为中介，≤10 mm为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌≥18 mm为敏感，≤17 mm为耐药。
1.2.2 琼脂稀释法 NCCLS推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法，在含4% NaCl、6 μg/ml苯唑西林M H平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35 ℃、24 h孵育检查琼脂表面有无细菌生长，只要有一个菌落生长即判为MRS。
1.2.3 仪器检测
挑取待检菌落，严格参照GPS SV卡说明书配制一定浓度菌悬液，置备GPS SV药敏卡上机，用VITEK 32型全自动微生物鉴定仪检测结果。以金黄色葡萄球菌ATCC（R）43300为MRS阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。
2 结果
对3种方法MRS检出率进行χ2检验，含4% NaCl M H平板药敏纸片扩散法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异无显着性（χ2=1.16，P>0.05），VITEK 32型仪器检测法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异也无显着性（χ2=0.51，P＞0.05），同时纸片扩散法MRS检出率与VITEK 32型仪器检测法MRS检出率差异也无显着性（χ2=0.13，P＞0.05）。
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目前国内外虽然用以检测耐甲氧西林葡萄球菌MRS的方法很多，由于MRS本身对甲氧西林耐药存在有不均一性，且甲氧西林不稳定，故常用苯唑西林代替甲氧西林来检测MRS。由于纸片扩散法操作简便、价格低廉，不需要特殊仪器设备，可以和普通药敏实验同时进行，在多种MRS检测方法中，目前很多医院临床常规微生物实验室仍在采用这种方法，从我们的实验结果看，纸片扩散法与被NCCLS推荐为参考方法的琼脂稀释法对MRS检出率差异无显着性，因此可以用于临床常规微生物实验室，对MRS进行常规检测。
VITEK 32型GPS SV药敏卡方法简单、快捷，从结果看其MRS检出率与琼脂稀释法差异无显着性，虽然其与纸片扩散法MRS检出率也无明显差异，但其检测速度比纸片扩散法更快捷，可以及时给出准确的报告，节约了时间，因此评估GPS SV药敏卡的准确性，为临床找出一种准确而简单、快捷的筛选MRS的方法是极有意义的，且VITEK 32型微生物鉴定药敏分析系统配套使用的GPS SV卡葡萄球菌药敏检测，其苯唑西林检测孔含有4% NaCl，符合NCCLS推荐的检测MRS的方法标准［4］，因此，仪器法GPS SV卡可用于葡萄球菌耐甲氧西林的检测，且简便准确、快速。所以纸片扩散法和仪器法均可用于医院常规实验室MRS检测，但对有条件的实验室建议采用仪器法，目前也出现了一些更准确可靠的方法，即对耐甲氧西林葡萄球菌进行基因层次的分型检测，并也出现了商品化的几种mecA基因乳胶检测法［5］，也是目前可采用的较好的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌株及其来源 自2006年1月至2006年5月从江医二附院临床患者的痰、血、尿、脓液、前列腺液及阴道分泌物等标本，经常规分离得到63 株葡萄球菌，包括凝固酶阳性葡萄球菌50 株，凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）13株。另MRS阳性参考菌株ATCC（R）43300，MRS阴性金黄色葡萄球菌ATCC25923，购自卫生部临检中心。
1.1.2 苯唑西林纸片 购自北京天坛生物制品有限公司，苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司，SDS琼脂糖、溴化乙锭、溶菌酶、蛋白酶K为美国Sigma产品，丙烯酰胺、双丙烯酰胺TEMED和TBE为美国Gibcobrl公司产品。法国生物梅里埃公司生产的VITEK 32型鉴定系统及配套的GPS SV葡萄球菌药敏检测卡。
1.2 方法
1.2.1 含4% NaCl M H平板纸片扩散法 由于苯唑西林较甲氧西林稳定、不易失活，通常用苯唑西林代替甲氧西林测定葡萄球菌。配制0.5麦氏单位菌液接种于含4% NaCl的M H平板，贴1 μg/片苯唑西林药敏纸片，35 ℃、24 h观察结果（CNS孵育48 h）金黄色葡萄球菌（SA）抑菌圈≥13 mm为敏感，11 mm～12 mm为中介，≤10 mm为耐药，凝固酶阴性葡萄球菌≥18 mm为敏感，≤17 mm为耐药。
1.2.2 琼脂稀释法 NCCLS推荐为测定耐甲氧西林葡萄球菌的参考方法，在含4% NaCl、6 μg/ml苯唑西林M H平板中点种0.5麦氏单位菌液，经35 ℃、24 h孵育检查琼脂表面有无细菌生长，只要有一个菌落生长即判为MRS。
1.2.3 仪器检测
挑取待检菌落，严格参照GPS SV卡说明书配制一定浓度菌悬液，置备GPS SV药敏卡上机，用VITEK 32型全自动微生物鉴定仪检测结果。以金黄色葡萄球菌ATCC（R）43300为MRS阳性参考菌株，金黄色葡萄球菌ATCC25923为MRS阴性参考菌株及药敏质控菌株与实验菌株同时进行检测。
2 结果
对3种方法MRS检出率进行χ2检验，含4% NaCl M H平板药敏纸片扩散法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异无显着性（χ2=1.16，P>0.05），VITEK 32型仪器检测法MRS检出率与琼脂稀释法MRS检出率差异也无显着性（χ2=0.51，P＞0.05），同时纸片扩散法MRS检出率与VITEK 32型仪器检测法MRS检出率差异也无显着性（χ2=0.13，P＞0.05）。
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