探讨抗狂犬病毒特免血浆的检测系统-护理类核心期刊
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ELISA检测方法与小鼠中和法的比较：早在20世纪末国内就有人［4］将ELISA与小鼠中和试验进行了比较，两者已经有了很好的一致性。苏军英等［5］在vero细胞狂犬病疫苗免疫人的效果观察中，用ELISA与MNT、RFFIT三种方法进行比较，也有相似的结果［6，7］。在实验中测定的结果也证实上述两种方法具有良好的正相关性。
同时通过在ELISA实验中同步设立了已知的SNT效价的阳性对照作为工作参考标准，最大限度地减少其他因素对实验结果的影响。针对大规模人源性狂犬病毒特异性免疫血浆的采集工作的需要，实验中根据稀释阳性对照标准的ELISA测定结果绘制标准曲线作为参照，建立了有效的收浆方案［8］，从而克服了小鼠中和法诸如检测周期长、实验条件复杂、费用高、其检测样品受到限制等不利于采浆站大规模初筛特异性免疫血浆的要求。为加快HRIG制品的研制、开发提供了技术条件。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 狂犬病毒抗原
狂犬病毒北京固定毒AG株适应地鼠肾细胞传代培养的病毒悬液经灭活初步纯化后的疫苗原液，由兰州生物制品研究所疫苗四室提供。
1.1.2 ELISA检测试剂
ELISA定量检测人抗狂犬病抗体诊断，分别由兰州生物制品研究所、宁波天润生物药业有限公司、武汉生物制品研究所、珠海海泰生物制药有限公司提供），抗狂犬病参考血清由中国药品生物制品检定所惠赠。
1.1.3 人用狂犬病疫苗和工作对照品
人用浓缩狂犬病疫苗（≥2.5 IU/瓶），批号20040401、20040403、20041101。工作对照品（HRIG）批号9008。以上制品均由兰州生物制品研究所生产。
1.1.4 实验样本
狂犬病毒抗体阳性血浆20份（SNT效价≥10 IU/ml），阴性血浆100份，均由兰州生物制品研究所血液制剂室提供。
1.2 方法
首先对供浆者进行0、3、7、14、28日程序狂犬疫苗注射，于最后一针1个月后采集血样，用ELISA试剂盒检测其相对效价，将此血样与标准品进行系列稀释，分别与狂犬病毒悬液结合，小鼠脑内注射，在规定的时间内，观察小鼠存活和死亡情况，测定出供试品效价，之后再用小鼠中和法试验SNT效价进行比较。将中和法测得SNT效价结果≥10 IU/ml的样品，再用其他三家ELISA［4］试剂盒进行检测。最终筛选出与小鼠中和法试验结果相接近的试剂盒作为大规模筛查狂犬病抗体阳性血浆初筛试剂盒，设计出能满足单采浆站特异性免疫血浆筛选的需要和可靠的收浆方案。
2 结果
2.1 初免后两种检测方法的比较
按0、3、7、14、28日程序免疫后1个月采集的血样用两种方法检测的结果比较，见表1。表1 初免后两种检测方法的比较 （略） 注：兰生所试剂（批号为20040703），从表1可以看出，小鼠中和法与A厂家ELISA试剂盒检测结果存在很大差异，从而导致了大量的特免血浆漏检。
经小鼠中和法测得SNT效价（≥10 IU/ml）样品与其他三个生产厂家试剂盒检测结果比较，见表2。表2 不同厂家ELISA试剂盒检测结果比较 （略）注：样品1～7号为同一供浆者不同次血浆样，8～9号为同一供浆者。不同次血浆样中，小鼠中的样品作过一次。海泰批号为200801
从表2可以看出，采用B、C、D厂家ELISA试剂盒经中和法测得SNA≥10 IU/ml的9份血样进行检测，结果显示，B、D厂家ELISA试剂盒检测结果与中和法SNT值接近。以9008批HRIG为工作参考品，用不同ELISA试剂盒测得的线性关系比较，见表3。表3 不同ELISA试剂盒标准曲线对比（略） 注：工作参考品为98008 HRIG冻干品经小鼠中和法测得效价为60 IU/ml，从表3可以看出，以HRIG（批号：98008）为工作参考品的检测结果可以看出，B、D ELISA生产厂家的试剂盒线性关系较好（分别为：r＝0.997，r＝0.996），可以作为初筛狂犬免疫血浆的首选试剂。
社区医学杂志投稿 http://www.qikanba.com/
ELISA检测方法与小鼠中和法的比较：早在20世纪末国内就有人［4］将ELISA与小鼠中和试验进行了比较，两者已经有了很好的一致性。苏军英等［5］在vero细胞狂犬病疫苗免疫人的效果观察中，用ELISA与MNT、RFFIT三种方法进行比较，也有相似的结果［6，7］。在实验中测定的结果也证实上述两种方法具有良好的正相关性。
同时通过在ELISA实验中同步设立了已知的SNT效价的阳性对照作为工作参考标准，最大限度地减少其他因素对实验结果的影响。针对大规模人源性狂犬病毒特异性免疫血浆的采集工作的需要，实验中根据稀释阳性对照标准的ELISA测定结果绘制标准曲线作为参照，建立了有效的收浆方案［8］，从而克服了小鼠中和法诸如检测周期长、实验条件复杂、费用高、其检测样品受到限制等不利于采浆站大规模初筛特异性免疫血浆的要求。为加快HRIG制品的研制、开发提供了技术条件。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 狂犬病毒抗原
狂犬病毒北京固定毒AG株适应地鼠肾细胞传代培养的病毒悬液经灭活初步纯化后的疫苗原液，由兰州生物制品研究所疫苗四室提供。
1.1.2 ELISA检测试剂
ELISA定量检测人抗狂犬病抗体诊断，分别由兰州生物制品研究所、宁波天润生物药业有限公司、武汉生物制品研究所、珠海海泰生物制药有限公司提供），抗狂犬病参考血清由中国药品生物制品检定所惠赠。
1.1.3 人用狂犬病疫苗和工作对照品
人用浓缩狂犬病疫苗（≥2.5 IU/瓶），批号20040401、20040403、20041101。工作对照品（HRIG）批号9008。以上制品均由兰州生物制品研究所生产。
1.1.4 实验样本
狂犬病毒抗体阳性血浆20份（SNT效价≥10 IU/ml），阴性血浆100份，均由兰州生物制品研究所血液制剂室提供。
1.2 方法
首先对供浆者进行0、3、7、14、28日程序狂犬疫苗注射，于最后一针1个月后采集血样，用ELISA试剂盒检测其相对效价，将此血样与标准品进行系列稀释，分别与狂犬病毒悬液结合，小鼠脑内注射，在规定的时间内，观察小鼠存活和死亡情况，测定出供试品效价，之后再用小鼠中和法试验SNT效价进行比较。将中和法测得SNT效价结果≥10 IU/ml的样品，再用其他三家ELISA［4］试剂盒进行检测。最终筛选出与小鼠中和法试验结果相接近的试剂盒作为大规模筛查狂犬病抗体阳性血浆初筛试剂盒，设计出能满足单采浆站特异性免疫血浆筛选的需要和可靠的收浆方案。
2 结果
2.1 初免后两种检测方法的比较
按0、3、7、14、28日程序免疫后1个月采集的血样用两种方法检测的结果比较，见表1。表1 初免后两种检测方法的比较 （略） 注：兰生所试剂（批号为20040703），从表1可以看出，小鼠中和法与A厂家ELISA试剂盒检测结果存在很大差异，从而导致了大量的特免血浆漏检。
经小鼠中和法测得SNT效价（≥10 IU/ml）样品与其他三个生产厂家试剂盒检测结果比较，见表2。表2 不同厂家ELISA试剂盒检测结果比较 （略）注：样品1～7号为同一供浆者不同次血浆样，8～9号为同一供浆者。不同次血浆样中，小鼠中的样品作过一次。海泰批号为200801
从表2可以看出，采用B、C、D厂家ELISA试剂盒经中和法测得SNA≥10 IU/ml的9份血样进行检测，结果显示，B、D厂家ELISA试剂盒检测结果与中和法SNT值接近。以9008批HRIG为工作参考品，用不同ELISA试剂盒测得的线性关系比较，见表3。表3 不同ELISA试剂盒标准曲线对比（略） 注：工作参考品为98008 HRIG冻干品经小鼠中和法测得效价为60 IU/ml，从表3可以看出，以HRIG（批号：98008）为工作参考品的检测结果可以看出，B、D ELISA生产厂家的试剂盒线性关系较好（分别为：r＝0.997，r＝0.996），可以作为初筛狂犬免疫血浆的首选试剂。
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