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不同产地葛根中葛根素的对比-医学核心期刊超声论文

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  HPLC法对不同产地的柴葛、粉葛中的葛根素的含量进行了测定,表明柴葛中葛根素含量约为粉葛的3倍,紫外测总黄酮含量表明,柴葛中葛根素量占总黄酮量的55%左右,粉葛中葛根素量占其总黄酮量的48%左右。同时比较了不同提取方法对葛根素和总黄酮含量测定的影响,发现回流提取法得到的葛根素含量较高,更有利于其提取。
  葛根素HPLC图谱中葛根素峰易拖尾,分离度低,本文研究了甲醇:水不同配比对峰形、分离度和保留时间的影响,体积比为25∶75时葛根素峰拖尾,与后面的小峰分离度为1.3,体积比为35∶65时葛根素峰与前峰易重合。甲醇∶水比(V/V)为32∶68时,在样品分析中葛根素与其它峰均能达到基线分离,保留时间适中,柱效高,故选用为流动相。
  1 仪器与材料
  1.1 仪器美国 Waters 公司600-2487高效液相色谱仪,Millenium数据处理系统;Waters2487紫外检测器;岛津UV-2401PC型紫外分光光度计;岛津AY120型万分之一电子分析天平;SB3200型超声清洗器。
  1.2 材料葛根素对照品:中国药品生物制品检定所;甲醇为色谱纯;水为重蒸馏超纯水;其它试剂均为分析纯。柴葛产于安徽岳西,粉葛产于广西。
  2 方法与结果
  2.1 HPLC法测定葛根中葛根素的含量
  2.1.1 色谱条件色谱柱:Zorbax XDB-C18(4.6mm×250mm, 5μm);流动相∶甲醇-水(32∶68);流速1ml/min;检测波长250 nm;柱温22℃;进样体积10μl。理论板数按葛根素峰计算不低于5000。在该色谱条件下,样品中的葛根素与其它峰均能达到基线分离,保留时间在14.3 min左右。
  2.1.2 对照品溶液的制备精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。分别移取0.5,1.0,2.0,2.5ml于5ml量瓶,水定容,与原液共同作为HPLC用对照品溶液。
  2.1.3 供试品溶液的制备 热回流提取法:精密称取柴葛、粉葛粉末(过50目筛)各0.1g,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇50 ml,称重。回流提取30min,放冷,称重并以30%乙醇补足减失重量,摇匀过滤,取续滤液为供试品,待测。
  2.1.4 线性关系考察取对照品溶液,按照色谱条件进样10μl,葛根素进样量X(μg)为横坐标,以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线,其回归方程为:Y=3.5076×106X+3.2745×104,r=0.9999。结果表明,葛根素进样量在0.204~2.04μg范围内与峰面积线性关系良好,可用外标两点法计算含量。
  2.1.5 精密度考察在色谱条件下,吸取同一对照品溶液10 μl,连续进样5次,测得峰面积,RSD=0.8%,表明进样与峰面积积分的精密度良好。
  2.1.6 重复性考察取同一批柴葛、粉葛样品5份,按外标法计算含量,RSD=2.8%,表明分析方法重复性良好。
  2.1.7 稳定性考察精密吸取对照
  品溶液10μl,分别在0,1,2,4,8,12,24,48h时进样,在色谱条件下测定峰面积,其RSD值为1.4%。表明葛根素在室内正常条件下48h内稳定,因此整个实验过程可以在常温不避光的条件下操作。
  2.1.8 回收率考察精密称取已知葛根素含量的同一样品药材粉末5份,20mg/份,精密称定后,每份加入浓度为0.204mg/ml的对照品溶液2.5~3.3 ml,按“供试品溶液制备”项下操作,精密吸取10 μl,进样,计算回收率。
  2.1.9 样品测定按“供试品溶液制备”项下操作,制备各样品溶液,精密吸取10μl,进样,在所选色谱条件下测定,外标两点法计算含量。
  2.2 紫外分光光度法测定葛根中总黄酮含量
  2.2.1 线性关系考察精密称取葛根素对照品5.1mg,甲醇定容于25ml量瓶。移取0.2,0.4,0.5,0.6,0.8ml置于10ml量瓶,水定容,为紫外测总黄酮用对照品溶液。以溶液浓度为横坐标,吸收度为纵坐标,得线性方程:Y= 0.078X+0.0152,r=0.9998。表明总黄酮浓度在4.08~16.32μg/ml范围时与吸收度线性关系良好。
  2.2.2 供试品制备 方法1:分别称取柴葛、粉葛4.5g,置于圆底烧瓶,乙醇回流提取3次,40ml/次,时间均为1h。合并3次滤液并浓缩置25ml量瓶,乙醇定容。取1ml用乙醇定容于100量瓶,再取1ml上清液于10ml量瓶,水定容,待测。以1ml乙醇加水定容于10ml量瓶中为空白对照。
  方法2:取上述液相用索氏提取法制得的待测品0.4ml,置于10ml量瓶,水定容,待测。吸收波长考察与样品测定在200~800nm间紫外扫描浓度为8.16μg/ml的葛根素对照品溶液。在249~251nm处有最大吸收,选用250nm测定。分别测定两种方法制得4个样品。
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