ING4基因在脑部肿瘤细胞中的表达-浙江省医学职称论文
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肿瘤是一种细胞周期调控异常性疾病，几乎所有的癌基因、抑癌基因的功能效应均与细胞生命活动异常有关[4]。ING4是生长抑制因子家族中的一个新成员，研究表明ING4能够与P300相互作用促使P53乙酰化，诱导细胞发生G2/M期周期阻滞，抑制细胞生长和诱导细胞凋亡，且ING4还能抑制肿瘤血管的生成。ING4基因的缺失或突变，与多种肿瘤的形成有关。Suwon Kim等[5]通过比较基因组杂交技术（CGH）分析了ING4基因周围的缺失程度，发现T47D乳腺导管癌至少有两个拷贝的缺失。
另外，Garkavtsev等[6]采用实时RT PCR的方法对50例神经胶质瘤和5例正常对照脑组织中ING4基因mRNA水平进行检测，结果显示ING4基因在神经胶质瘤中的表达下降，且与肿瘤恶性程度有关，级别越高表达水平越低。本实验结果与此一致。ING4蛋白在星形细胞瘤中表达降低，且与恶性程度呈负相关，提示ING4基因由于在星形细胞瘤中的缺失和突变，使肿瘤血管生成增多，细胞增殖加速和凋亡减少，是星形细胞瘤发病的关键因素。ING4有可能成为一个基因治疗的候选分子，通过对其表达的调控，进而有效地控制星形细胞瘤的发生发展。
1 材料与方法
1.1 一般资料 45例人脑星形细胞瘤均取自郑州大学第二附属医院神经外科2009 01～2009 07手术切除标本。男25例，女20例，年龄2～77岁，平均（41.8±18.3）岁。所有病例均为原发病例，术前未经放化疗。标本切除后中性福尔马林液固定保存，进行脱水、透明、浸蜡、包埋，蜡块连续切片，厚约4 μm，HE染色后观察。按照2000年WHO中枢神经系统肿瘤分类标准[2]，其中Ⅰ级6例，Ⅱ级18例，Ⅲ级14例，Ⅳ级7例。把24例Ⅰ～Ⅱ级设为低度恶性实验组，21例Ⅲ～Ⅳ级设为高度恶性实验组。11例正常脑组织为对照组，取自脑外伤、脑出血、脑动静脉畸形病人内减压者。
1.2 方法 应用免疫组化法检测，厚约4 μm组织切片常规脱蜡，按S P盒说明进行。以PBS代替一抗作为阴性对照，兔抗人ING4多克隆抗体和兔抗人HIF 1α单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，S P试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司，所用两种兔抗人抗体的终浓度为1∶100。
1.3 染色结果判定 ING4阳性表达以细胞核和或胞浆内出现棕黄色颗粒为准， HIF 1α表达于胞核或胞质，但主要是核表达，呈棕黄色。参考Hiroshi等[3]提到的方法，随机选10个高倍视野，依照细胞着色密度和着色强度半定量评分：（1）染色细胞百分比：未见染色为0分，≤25%细胞染色为1分，25%～50%细胞染色为2分，>50%细胞染色为3分；（2）依阳性细胞染色强度：未见染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，上述两者之和的总得分来判定结果，>2分定义为阳性表达（+），≤2分定义为阴性表达（-）。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理，统计方法采用χ2检验。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 ING4的染色结果 ING4阳性染色细胞可见细胞核和（或）胞浆内出现棕黄色或褐黄色均质颗粒，主要位于胞核，也可见于脑胶质细胞、脑锥体细胞、血管内皮细胞及间质纤维组织。正常脑组织均见表达，明显高于星形细胞瘤中的表达，且在Ⅰ～Ⅱ级组中阳性表达率高于Ⅲ～Ⅳ级组，差异均有统计学意义。见表1。表1 ING4蛋白在正常脑组织和星形细胞瘤中的表达注：脑组织与星形细胞瘤比较，χ2=11.864，P<0.05;Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ～Ⅳ级比较，χ2=5.472，P<0.05
2.2 HIF 1α的染色结果 HIF 1α阳性表达主要定位于肿瘤细胞核，部分位于胞浆内，呈黄色或棕黄色的染色颗粒，以肿瘤坏死区边缘最为明显。正常脑组织中未见表达，明显低于星形细胞瘤中的表达，且在Ⅰ～Ⅱ级组中的阳性表达率低于Ⅲ～Ⅳ级组，经统计学处理，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。表2 HIF 1α蛋白在正常脑组织和星形细胞瘤中的表达注：脑组织与星形细胞瘤比较，χ2=15.464，P<0.05;Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ～Ⅳ级比较，χ2=7.188，P<0.05
2.3 ING4和HIF 1α之间的关联性 19例ING4表达阳性的星形细胞瘤中HIF 1α表达阳性8例，26例ING4表达阴性的星形细胞瘤中HIF 1α表达阳性24例，经χ2检验，两者呈负相关，相关系数r=-0.480。见表3。表3 ING4蛋白和HIF 1α蛋白表达的关系。
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肿瘤是一种细胞周期调控异常性疾病，几乎所有的癌基因、抑癌基因的功能效应均与细胞生命活动异常有关[4]。ING4是生长抑制因子家族中的一个新成员，研究表明ING4能够与P300相互作用促使P53乙酰化，诱导细胞发生G2/M期周期阻滞，抑制细胞生长和诱导细胞凋亡，且ING4还能抑制肿瘤血管的生成。ING4基因的缺失或突变，与多种肿瘤的形成有关。Suwon Kim等[5]通过比较基因组杂交技术（CGH）分析了ING4基因周围的缺失程度，发现T47D乳腺导管癌至少有两个拷贝的缺失。
另外，Garkavtsev等[6]采用实时RT PCR的方法对50例神经胶质瘤和5例正常对照脑组织中ING4基因mRNA水平进行检测，结果显示ING4基因在神经胶质瘤中的表达下降，且与肿瘤恶性程度有关，级别越高表达水平越低。本实验结果与此一致。ING4蛋白在星形细胞瘤中表达降低，且与恶性程度呈负相关，提示ING4基因由于在星形细胞瘤中的缺失和突变，使肿瘤血管生成增多，细胞增殖加速和凋亡减少，是星形细胞瘤发病的关键因素。ING4有可能成为一个基因治疗的候选分子，通过对其表达的调控，进而有效地控制星形细胞瘤的发生发展。
1 材料与方法
1.1 一般资料 45例人脑星形细胞瘤均取自郑州大学第二附属医院神经外科2009 01～2009 07手术切除标本。男25例，女20例，年龄2～77岁，平均（41.8±18.3）岁。所有病例均为原发病例，术前未经放化疗。标本切除后中性福尔马林液固定保存，进行脱水、透明、浸蜡、包埋，蜡块连续切片，厚约4 μm，HE染色后观察。按照2000年WHO中枢神经系统肿瘤分类标准[2]，其中Ⅰ级6例，Ⅱ级18例，Ⅲ级14例，Ⅳ级7例。把24例Ⅰ～Ⅱ级设为低度恶性实验组，21例Ⅲ～Ⅳ级设为高度恶性实验组。11例正常脑组织为对照组，取自脑外伤、脑出血、脑动静脉畸形病人内减压者。
1.2 方法 应用免疫组化法检测，厚约4 μm组织切片常规脱蜡，按S P盒说明进行。以PBS代替一抗作为阴性对照，兔抗人ING4多克隆抗体和兔抗人HIF 1α单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，S P试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司，所用两种兔抗人抗体的终浓度为1∶100。
1.3 染色结果判定 ING4阳性表达以细胞核和或胞浆内出现棕黄色颗粒为准， HIF 1α表达于胞核或胞质，但主要是核表达，呈棕黄色。参考Hiroshi等[3]提到的方法，随机选10个高倍视野，依照细胞着色密度和着色强度半定量评分：（1）染色细胞百分比：未见染色为0分，≤25%细胞染色为1分，25%～50%细胞染色为2分，>50%细胞染色为3分；（2）依阳性细胞染色强度：未见染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，上述两者之和的总得分来判定结果，>2分定义为阳性表达（+），≤2分定义为阴性表达（-）。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0统计软件包进行统计学处理，统计方法采用χ2检验。检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 ING4的染色结果 ING4阳性染色细胞可见细胞核和（或）胞浆内出现棕黄色或褐黄色均质颗粒，主要位于胞核，也可见于脑胶质细胞、脑锥体细胞、血管内皮细胞及间质纤维组织。正常脑组织均见表达，明显高于星形细胞瘤中的表达，且在Ⅰ～Ⅱ级组中阳性表达率高于Ⅲ～Ⅳ级组，差异均有统计学意义。见表1。表1 ING4蛋白在正常脑组织和星形细胞瘤中的表达注：脑组织与星形细胞瘤比较，χ2=11.864，P<0.05;Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ～Ⅳ级比较，χ2=5.472，P<0.05
2.2 HIF 1α的染色结果 HIF 1α阳性表达主要定位于肿瘤细胞核，部分位于胞浆内，呈黄色或棕黄色的染色颗粒，以肿瘤坏死区边缘最为明显。正常脑组织中未见表达，明显低于星形细胞瘤中的表达，且在Ⅰ～Ⅱ级组中的阳性表达率低于Ⅲ～Ⅳ级组，经统计学处理，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。表2 HIF 1α蛋白在正常脑组织和星形细胞瘤中的表达注：脑组织与星形细胞瘤比较，χ2=15.464，P<0.05;Ⅰ～Ⅱ级与Ⅲ～Ⅳ级比较，χ2=7.188，P<0.05
2.3 ING4和HIF 1α之间的关联性 19例ING4表达阳性的星形细胞瘤中HIF 1α表达阳性8例，26例ING4表达阴性的星形细胞瘤中HIF 1α表达阳性24例，经χ2检验，两者呈负相关，相关系数r=-0.480。见表3。表3 ING4蛋白和HIF 1α蛋白表达的关系。
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