重组人生长激素对脑缺血/再灌注损伤的影响分析-护理论文格式
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脑缺血/再灌注损伤是一种常见的、复杂的病理生理过程。有研究表明[6],脑缺血后随着再灌注时间的延长，缺血侧皮层凋亡细胞数量明显增加，主要分布在梗死灶边缘区，48 h凋亡细胞达到高峰，说明凋亡在脑缺血/再灌注损伤中起重要作用。半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（cysteing aspartate specific protease, Caspase）特别是Caspase 3处于凋亡过程的下游阶段，是凋亡过程中的关键蛋白酶，及时抑制凋亡级联反应过程中的关键蛋白酶，挽救缺血半暗带区尚未凋亡的神经元是脑血管疾病治疗的关键。而Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成员，是至今发现作用最强的凋亡抑制蛋白之一，既能抑制细胞凋亡，又能诱导调控神经细胞的有丝分裂及生长周期时相，促进神经细胞增殖和血管生成等[7 8]。
1 材料与方法
1.1 实验动物和分组 健康雄性SD大鼠72只，体质量250～280 g,由郑州大学实验动物中心提供。术前禁食12 h,禁水4 h。随机分为假手术组、对照组（脑缺血/再灌注+生理盐水组）、治疗组（脑缺血/再灌注+rhGH组）3组，每组24只。
1.2 主要试剂和药物 重组人生长激素注射液由长春金赛药业有限责任公司生产； Survivin多克隆抗体及Caspase 3多克隆抗体购自美国SANTA CRUZ生物技术公司。
1.3 大鼠脑缺血/再灌注模型的制备及处理 线栓法大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型采用改良的Longa[5]线栓法，大脑中动脉（MCA）阻断2 h后，将尼龙栓线拔出，实现再灌注。假手术组除不插线外，其余步骤与对照组和治疗组相同。参照 Zea Longa 5级4分制评分标准[5]，评分为1～3分的实验动物入选。治疗组在脑缺血/再灌注模型成功后开始颈部皮下注射重组人生长激素0.1 U·kg 1· d 1,1次/24 h。
对照组注射同样剂量生理盐水，注射时间与次数同治疗组。
1.4 组织切片和免疫组化检测 分别于脑缺血/再灌注后1、3、5、7 d处死大鼠，以4%多聚甲醛灌注固定，石蜡包埋和切片。常规脱蜡、水化，取缺血侧大脑皮质，按试剂盒提供的实验步骤进行操作，DAB显色，光镜下观察，胞浆出现棕色颗粒为阳性着色。
1.5 免疫组化结果分析 在光镜下观察Survivin 和Caspase 3免疫反应的结果，并采用Biosens Digital Imaging System v1.6（上海山富科学仪器有限公司） 图像分析系统进行图像定量分析。Survivin 和Caspase 3免疫组化染色标记强度用灰度值表示，比较各组阳性区平均灰度值的差异。
1.6 统计学处理 所有数据采用SPSS 13.0软件处理，各组数据以±s表示，组间比较采用单因素方差分析，用LSD t法进行两两比较，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 大脑皮质Survivin表达的变化 假手术组大鼠脑组织中Survivin仅有少量表达，对照组1～3 d达到高峰，随后逐渐降低，至7 d仍有较高水平的表达，较假手术组显着升高；治疗组较对照组显着升高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 大脑皮质Caspase 3表达的变化 Caspase 3在假手术组少量表达，对照组1～3 d达到高峰，后开始下降，至7 d时仍高于假手术组；治疗组较对照组显着下降，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。表1 各组Survivin表达的变化（阳性区平均灰度表示）注：与假手术组同一时间点比较，△P<0.05;与对照组同一时间点比较， ▲P<0.05 表2 各组Caspase 3表达的变化（阳性区平均灰度表示）注：与假手术组同一时间点比较，△P<0.05;与对照组同一时间点比较，▲P<0.05
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脑缺血/再灌注损伤是一种常见的、复杂的病理生理过程。有研究表明[6],脑缺血后随着再灌注时间的延长，缺血侧皮层凋亡细胞数量明显增加，主要分布在梗死灶边缘区，48 h凋亡细胞达到高峰，说明凋亡在脑缺血/再灌注损伤中起重要作用。半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（cysteing aspartate specific protease, Caspase）特别是Caspase 3处于凋亡过程的下游阶段，是凋亡过程中的关键蛋白酶，及时抑制凋亡级联反应过程中的关键蛋白酶，挽救缺血半暗带区尚未凋亡的神经元是脑血管疾病治疗的关键。而Survivin是凋亡抑制蛋白家族的成员，是至今发现作用最强的凋亡抑制蛋白之一，既能抑制细胞凋亡，又能诱导调控神经细胞的有丝分裂及生长周期时相，促进神经细胞增殖和血管生成等[7 8]。
1 材料与方法
1.1 实验动物和分组 健康雄性SD大鼠72只，体质量250～280 g,由郑州大学实验动物中心提供。术前禁食12 h,禁水4 h。随机分为假手术组、对照组（脑缺血/再灌注+生理盐水组）、治疗组（脑缺血/再灌注+rhGH组）3组，每组24只。
1.2 主要试剂和药物 重组人生长激素注射液由长春金赛药业有限责任公司生产； Survivin多克隆抗体及Caspase 3多克隆抗体购自美国SANTA CRUZ生物技术公司。
1.3 大鼠脑缺血/再灌注模型的制备及处理 线栓法大鼠局灶性脑缺血/再灌注模型采用改良的Longa[5]线栓法，大脑中动脉（MCA）阻断2 h后，将尼龙栓线拔出，实现再灌注。假手术组除不插线外，其余步骤与对照组和治疗组相同。参照 Zea Longa 5级4分制评分标准[5]，评分为1～3分的实验动物入选。治疗组在脑缺血/再灌注模型成功后开始颈部皮下注射重组人生长激素0.1 U·kg 1· d 1,1次/24 h。
对照组注射同样剂量生理盐水，注射时间与次数同治疗组。
1.4 组织切片和免疫组化检测 分别于脑缺血/再灌注后1、3、5、7 d处死大鼠，以4%多聚甲醛灌注固定，石蜡包埋和切片。常规脱蜡、水化，取缺血侧大脑皮质，按试剂盒提供的实验步骤进行操作，DAB显色，光镜下观察，胞浆出现棕色颗粒为阳性着色。
1.5 免疫组化结果分析 在光镜下观察Survivin 和Caspase 3免疫反应的结果，并采用Biosens Digital Imaging System v1.6（上海山富科学仪器有限公司） 图像分析系统进行图像定量分析。Survivin 和Caspase 3免疫组化染色标记强度用灰度值表示，比较各组阳性区平均灰度值的差异。
1.6 统计学处理 所有数据采用SPSS 13.0软件处理，各组数据以±s表示，组间比较采用单因素方差分析，用LSD t法进行两两比较，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 大脑皮质Survivin表达的变化 假手术组大鼠脑组织中Survivin仅有少量表达，对照组1～3 d达到高峰，随后逐渐降低，至7 d仍有较高水平的表达，较假手术组显着升高；治疗组较对照组显着升高，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。
2.2 大脑皮质Caspase 3表达的变化 Caspase 3在假手术组少量表达，对照组1～3 d达到高峰，后开始下降，至7 d时仍高于假手术组；治疗组较对照组显着下降，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。表1 各组Survivin表达的变化（阳性区平均灰度表示）注：与假手术组同一时间点比较，△P<0.05;与对照组同一时间点比较， ▲P<0.05 表2 各组Caspase 3表达的变化（阳性区平均灰度表示）注：与假手术组同一时间点比较，△P<0.05;与对照组同一时间点比较，▲P<0.05
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