益肾活血清利方对慢性肾间质纤维化的治疗功效分析-基础护理论文
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益肾活血清利方是根据慢性肾病“肾虚湿瘀”理论总结的治疗原则组方，本方实验结果显示对UUO大鼠肾间质纤维化进程有着显著的干预作用[2]。慢性肾间质纤维化是多种肾脏疾患进展至终末期肾病的共同通路，与肾损害进展密切相关，决定肾功能的预后[3]。肾间质巨噬细胞积聚可促进肾间质纤维化的发生和进展[4]，巨噬细胞进入肾间质后，分泌一系列促纤维化因子，如TGF-β、FGF、TNF-α、PDGF、EGF等，这些细胞因子可使肾间质肌成纤维细胞合成TIMP、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)增多，使基质金属蛋白酶(MMP)减少，从而影响基质转运，加重肾间质纤维化[4]。本实验用药各组对ED1的积聚有着明显的抑制作用，但中药组优于西药组。
1 材料
1.1 动物 雄性SD大鼠，40只，体重150～170g，由南京青龙山动物饲养厂提供(许可证号：SCXK-2001-0018)。
1.2 药物 根据益肾活血清利法组方(主要由杜仲、川芎、白花蛇舌草等中药组成，购自南京药材采购供应公司)，水煎分别浓缩至每1ml含生药1g (低剂量)、2g(高剂量。
1.3 实验仪器 Leica光学显微镜(型号：DM LS2)。
1.4 实验试剂 ED1一抗为鼠抗鼠巨噬细胞ED1(CD68)单克隆抗体，Chemicon international (a Serological Ccompany)，美国。NF-κB一抗为核转录因子NF-κB单克隆抗体，二抗为辣根过氧化酶(HRP)标记的链菌素抗生物素IgG (HRP-Polymer Goat anti-MS/Rb IgG)。磷酸盐缓冲液PBS、DAB显色液。
2 方法
2.1 造模及给药方法 将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾活血清利方组、益肾活血清利方高剂量组(2ml/100g)、苯那普利组(45mg/kg)，提前1天给药，每天2次灌胃。以2%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，行左侧输尿管结扎术[1]。无菌手术打开腹腔，分离右侧输尿管, 在肾盂处和输尿管上1/3处用3号线双重结扎输尿管，分层缝合关闭腹腔;假手术组仅将输尿管游离但不结扎。术后21天称重后处死大鼠，留取梗阻侧肾脏标本，置于10%中性甲醛固定液中保存，用以作有关病理检查。
2.2 肾组织标本ED1及 NF-κB免疫组化检查 免疫组化在江苏省中医院病理科进行。采用改良SP法：(1)脱蜡修复液修复10min，微波450W，停留15min，自来水冷却，PBS洗3次，各2min。(2)加羊血清孵育10min，加第一抗体，室温1h，PBS洗3次，各2min。(3)加第二抗体，室温15min，PBS洗3次，各2min。(4)DAB显色液显色，水洗;苏木素复染1min，水洗;(5)1%盐酸酒精分化数秒，各级酒精脱水，二甲苯透明。(6)中性树胶封固，光镜下观察。肾小管间质ED1及 NF-κB免疫组化染色阳性面积测定：在光学显微镜(×400倍)宁阙病理计算机图像分析系统屏幕上计算每例切片20个不重叠视野中阳性染色面积的吸光度值并取平均值，吸光度值越大，表明表达量越多。
2.3 统计学处理 所有计量数据以(x±s)表示，采用单因素方差分析。计算采用SPSS11.5软件进行。
3 结果
NF-κB表达以肾间质明显，其中模型组、中药组与假手术组比较，P<0.01;中药高剂量组表达与模型组比较，P<0.05(详见表1及附图2)。表1 肾组织免疫组化ED1、 NF-κB光密度阳性表达值图1 UUO大鼠肾组织ED1免疫组化表达(×400) 说明：NF-κB在正常组(Ⅰ)表达量极少，模型组(Ⅱ)已丧失正常间质结构，广泛表达NF-κB，中药组(G)、中药高剂量组(H)及洛汀新组(X)的表达依次增强。图2 UUO大鼠肾组织NF-κB免疫组化表达(×400)
肾组织标本ED1/ NF-κB免疫组化染色阳性面积 UUO术后21天假手术组右肾小管轻度变性，模型组大鼠右肾小管间质纤维组织呈片状分布，ED1表达以肾间质明显，其中模型组与假手术组比较，P<0.00;中药组、中药高剂量组及苯那普利组表达与模型组比较，P<0.01;中药组、中药高剂量组与假手术组比较，P<0.05;苯那普利组表达与假手术组比较，P<0.01(详见表1及附图1)。
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益肾活血清利方是根据慢性肾病“肾虚湿瘀”理论总结的治疗原则组方，本方实验结果显示对UUO大鼠肾间质纤维化进程有着显著的干预作用[2]。慢性肾间质纤维化是多种肾脏疾患进展至终末期肾病的共同通路，与肾损害进展密切相关，决定肾功能的预后[3]。肾间质巨噬细胞积聚可促进肾间质纤维化的发生和进展[4]，巨噬细胞进入肾间质后，分泌一系列促纤维化因子，如TGF-β、FGF、TNF-α、PDGF、EGF等，这些细胞因子可使肾间质肌成纤维细胞合成TIMP、纤溶酶原激活剂抑制物(PAI 1)增多，使基质金属蛋白酶(MMP)减少，从而影响基质转运，加重肾间质纤维化[4]。本实验用药各组对ED1的积聚有着明显的抑制作用，但中药组优于西药组。
1 材料
1.1 动物 雄性SD大鼠，40只，体重150～170g，由南京青龙山动物饲养厂提供(许可证号：SCXK-2001-0018)。
1.2 药物 根据益肾活血清利法组方(主要由杜仲、川芎、白花蛇舌草等中药组成，购自南京药材采购供应公司)，水煎分别浓缩至每1ml含生药1g (低剂量)、2g(高剂量。
1.3 实验仪器 Leica光学显微镜(型号：DM LS2)。
1.4 实验试剂 ED1一抗为鼠抗鼠巨噬细胞ED1(CD68)单克隆抗体，Chemicon international (a Serological Ccompany)，美国。NF-κB一抗为核转录因子NF-κB单克隆抗体，二抗为辣根过氧化酶(HRP)标记的链菌素抗生物素IgG (HRP-Polymer Goat anti-MS/Rb IgG)。磷酸盐缓冲液PBS、DAB显色液。
2 方法
2.1 造模及给药方法 将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、益肾活血清利方组、益肾活血清利方高剂量组(2ml/100g)、苯那普利组(45mg/kg)，提前1天给药，每天2次灌胃。以2%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，行左侧输尿管结扎术[1]。无菌手术打开腹腔，分离右侧输尿管, 在肾盂处和输尿管上1/3处用3号线双重结扎输尿管，分层缝合关闭腹腔;假手术组仅将输尿管游离但不结扎。术后21天称重后处死大鼠，留取梗阻侧肾脏标本，置于10%中性甲醛固定液中保存，用以作有关病理检查。
2.2 肾组织标本ED1及 NF-κB免疫组化检查 免疫组化在江苏省中医院病理科进行。采用改良SP法：(1)脱蜡修复液修复10min，微波450W，停留15min，自来水冷却，PBS洗3次，各2min。(2)加羊血清孵育10min，加第一抗体，室温1h，PBS洗3次，各2min。(3)加第二抗体，室温15min，PBS洗3次，各2min。(4)DAB显色液显色，水洗;苏木素复染1min，水洗;(5)1%盐酸酒精分化数秒，各级酒精脱水，二甲苯透明。(6)中性树胶封固，光镜下观察。肾小管间质ED1及 NF-κB免疫组化染色阳性面积测定：在光学显微镜(×400倍)宁阙病理计算机图像分析系统屏幕上计算每例切片20个不重叠视野中阳性染色面积的吸光度值并取平均值，吸光度值越大，表明表达量越多。
2.3 统计学处理 所有计量数据以(x±s)表示，采用单因素方差分析。计算采用SPSS11.5软件进行。
3 结果
NF-κB表达以肾间质明显，其中模型组、中药组与假手术组比较，P<0.01;中药高剂量组表达与模型组比较，P<0.05(详见表1及附图2)。表1 肾组织免疫组化ED1、 NF-κB光密度阳性表达值图1 UUO大鼠肾组织ED1免疫组化表达(×400) 说明：NF-κB在正常组(Ⅰ)表达量极少，模型组(Ⅱ)已丧失正常间质结构，广泛表达NF-κB，中药组(G)、中药高剂量组(H)及洛汀新组(X)的表达依次增强。图2 UUO大鼠肾组织NF-κB免疫组化表达(×400)
肾组织标本ED1/ NF-κB免疫组化染色阳性面积 UUO术后21天假手术组右肾小管轻度变性，模型组大鼠右肾小管间质纤维组织呈片状分布，ED1表达以肾间质明显，其中模型组与假手术组比较，P<0.00;中药组、中药高剂量组及苯那普利组表达与模型组比较，P<0.01;中药组、中药高剂量组与假手术组比较，P<0.05;苯那普利组表达与假手术组比较，P<0.01(详见表1及附图1)。
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