大黄抗菌作用的实验研究-心内科护理论文
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1 实验材料
大黄购于沈阳中街新药特药,金黄色葡萄球菌Staphy- lococcus aureus 209P购于辽宁省药品检验所。
2 方法与结果
2.1 大黄总蒽醌的提取[1]
称取25 g的大黄粗粉,置于圆底烧瓶中,先加入50 mL的20%硫酸,再加入125 mL的氯仿,75 ℃回流4 h。
2.2 游离蒽醌的分离[2]
本实验采用pH梯度萃取法进行分离。氯仿总提取液50 mL,加pH 8的缓冲液17 mL,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至pH 3,静置,沉淀,抽滤得大黄酸,用冰醋酸重结晶得大黄酸精品。剩余氯仿层加pH 9.9的缓冲液30.5 mL,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至pH 3,静置,沉淀,抽滤得大黄素,用冰醋酸重结晶得大黄素精品。剩余氯仿层加pH 13的缓冲液60 mL,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至pH 3,静置,沉淀,抽滤得芦荟大黄素,用冰醋酸重结晶得芦荟大黄素精品。剩余氯仿层回收氯仿,得大黄酚与大黄素甲醚混合物。
2.3 提取物溶液的配制:将各提取物用其相应的缓冲液配制成浓度6 mg/mL的溶液。
2.4 大黄中5种游离蒽醌抑菌作用的检验
2.4.1 培养基的制作：牛肉浸膏0.15%,酵母浸膏0.6%,蛋白胨0.6%,葡萄糖0.1%,琼脂1.8%,pH 6.9～7.1,常水配制。
2.4.2 操作过程
制备50 mL培养基,灭菌30 min。在超净工作台上,先倒出30 mL至培养皿中,再于50 ℃左右向另外20 mL培养基中迅速加入0.6 mL菌悬液,混匀,倒入同一个培养皿中。待培养基凝固后,分别点上5 μL、浓度为6 mg/mL的各提取物溶液。在37 ℃恒温培养箱中培养10 h,然后进行美蓝染色。量取100 mL 95 %乙醇,加浓盐酸1滴,即为酸性乙醇。量取100 mL 95%乙醇,加氢氧化钠2 g,振摇,待溶解后即为碱性乙醇。取美蓝溶液20 mL倒入平板中,用三角耙涂匀,2 min后倾去,倒入酸性乙醇20 mL,2 min后倾去,倒入碱性乙醇20 mL,2 min后倾去。细流自来水冲洗3 min,倾去并吸干浮水,快速贴上滤纸1张,用三角耙赶走气泡,10 min后揭下滤纸,晾干。5种游离蒽醌抑菌圈直径：大黄酸为5 mm,大黄素为9 mm,芦荟大黄素为3 mm,大黄酚与大黄素甲醚混合物为0 mm。
2.4.3 二分法测定各提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度[3]
准备16支试管,其中1支作为空白对照组,其余15支平均分成3组,分别代表3种不同的成分,每组分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号,并用记号笔标明。然后用相应的缓冲液配制成不同浓度的提取物溶液,向试管中加入培养基(配方与2.4.1相同,但不加琼脂),将培养基与提取物溶液充分混合后,灭菌。最后在超净工作台上分别向3组试管中(除空白对照组)分别加入金黄色葡萄球菌菌悬液。具体加入量见表1～表3。培养24 h酸的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号试管全部长菌,只有Ⅰ号试管没有长菌；芦荟大黄素的情况与大黄酸一样,只有Ⅰ号试管没有长菌。大黄素的抑菌作用最好,Ⅰ、Ⅱ管都没有长菌,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号试管全部长菌。
神经内科护理论文 http://www.qikanba.com/
1 实验材料
大黄购于沈阳中街新药特药,金黄色葡萄球菌Staphy- lococcus aureus 209P购于辽宁省药品检验所。
2 方法与结果
2.1 大黄总蒽醌的提取[1]
称取25 g的大黄粗粉,置于圆底烧瓶中,先加入50 mL的20%硫酸,再加入125 mL的氯仿,75 ℃回流4 h。
2.2 游离蒽醌的分离[2]
本实验采用pH梯度萃取法进行分离。氯仿总提取液50 mL,加pH 8的缓冲液17 mL,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至pH 3,静置,沉淀,抽滤得大黄酸,用冰醋酸重结晶得大黄酸精品。剩余氯仿层加pH 9.9的缓冲液30.5 mL,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至pH 3,静置,沉淀,抽滤得大黄素,用冰醋酸重结晶得大黄素精品。剩余氯仿层加pH 13的缓冲液60 mL,振摇,静置,缓冲液层加盐酸酸化至pH 3,静置,沉淀,抽滤得芦荟大黄素,用冰醋酸重结晶得芦荟大黄素精品。剩余氯仿层回收氯仿,得大黄酚与大黄素甲醚混合物。
2.3 提取物溶液的配制:将各提取物用其相应的缓冲液配制成浓度6 mg/mL的溶液。
2.4 大黄中5种游离蒽醌抑菌作用的检验
2.4.1 培养基的制作：牛肉浸膏0.15%,酵母浸膏0.6%,蛋白胨0.6%,葡萄糖0.1%,琼脂1.8%,pH 6.9～7.1,常水配制。
2.4.2 操作过程
制备50 mL培养基,灭菌30 min。在超净工作台上,先倒出30 mL至培养皿中,再于50 ℃左右向另外20 mL培养基中迅速加入0.6 mL菌悬液,混匀,倒入同一个培养皿中。待培养基凝固后,分别点上5 μL、浓度为6 mg/mL的各提取物溶液。在37 ℃恒温培养箱中培养10 h,然后进行美蓝染色。量取100 mL 95 %乙醇,加浓盐酸1滴,即为酸性乙醇。量取100 mL 95%乙醇,加氢氧化钠2 g,振摇,待溶解后即为碱性乙醇。取美蓝溶液20 mL倒入平板中,用三角耙涂匀,2 min后倾去,倒入酸性乙醇20 mL,2 min后倾去,倒入碱性乙醇20 mL,2 min后倾去。细流自来水冲洗3 min,倾去并吸干浮水,快速贴上滤纸1张,用三角耙赶走气泡,10 min后揭下滤纸,晾干。5种游离蒽醌抑菌圈直径：大黄酸为5 mm,大黄素为9 mm,芦荟大黄素为3 mm,大黄酚与大黄素甲醚混合物为0 mm。
2.4.3 二分法测定各提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度[3]
准备16支试管,其中1支作为空白对照组,其余15支平均分成3组,分别代表3种不同的成分,每组分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号,并用记号笔标明。然后用相应的缓冲液配制成不同浓度的提取物溶液,向试管中加入培养基(配方与2.4.1相同,但不加琼脂),将培养基与提取物溶液充分混合后,灭菌。最后在超净工作台上分别向3组试管中(除空白对照组)分别加入金黄色葡萄球菌菌悬液。具体加入量见表1～表3。培养24 h酸的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号试管全部长菌,只有Ⅰ号试管没有长菌；芦荟大黄素的情况与大黄酸一样,只有Ⅰ号试管没有长菌。大黄素的抑菌作用最好,Ⅰ、Ⅱ管都没有长菌,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ号试管全部长菌。
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