丹参中有效药性成分提取方法比较-中国护士网护理论文
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丹参的主要成分有水溶性丹参素和脂溶性的丹参酮ⅡA。丹参素溶于水,且热稳定性较好,故水煎法与乙醇回流法的丹参素较高,CO2超临界流体萃取法最高；脂溶性的丹参酮ⅡA受热不稳定,会分解,受加热和浓缩时间的影响,故用水做溶媒的提取含量偏低,用乙醇作为夹带剂的CO2超临界流体萃取法含量最高。故选用CO2超临界流体萃取法来提取丹参的有效成分.
1 仪器和试剂
Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司),KQ-500DE型医用超声波(昆山市超声仪器有限公司,频率40 kHz)。丹参购于广州清平药材市场,经鉴定为正品；丹参素对照品(自制,批号20040510,含量99.5%)、丹参酮ⅡA对照品(自制,批号20041015,含量99.2%)。甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。
2 分析检测方法
2.1 丹参素HPLC分析的色谱条件：色谱柱：Zorbax ODS反相柱(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相：甲醇-水=0.1∶0.9(用冰醋酸调pH=3),进样量：20 μL；灵敏度：0.16；柱温：40 ℃；λ=281 nm；流速：1.0 mL/min。
2.2 丹参酮ⅡA HPLC分析的色谱条件
色谱柱：Zorbax ODS反相柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：甲醇-水=0.85∶0.15,进样量：20 μL；灵敏度：0.32；柱温：40 ℃；λ=270 nm；流速：1.0 mL/min。
3 实验方法
3.1 传统水煎法
3.1.1 试验方法：准确称取丹参25.00 g,加入一定量的水,加热煎煮,根据表1条件进行试验。丹参提取液水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量,计算提取量。表1 传统水煎法试验因素水平表（略）
3.1.2 结果分析
由实验结果得出,影响因素顺序为B>C>A,最佳工艺为A3B3C2,即采用12倍量水,煎煮2次,每次1.5 h的煎煮方法,其丹参素和丹参酮ⅡA含量明显高于其他条件的含量。故认为此条件为传统水煎法的最佳提取条件。
3.2 乙醇回流法
3.2.1 试验方法
准确称取丹参25.00 g,加入一定浓度、一定量的乙醇,加热回流,根据表2条件进行试验。丹参提取液高速离心,上清液回收乙醇,再水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA的含量,计算提取量。
3.2.2 结果分析
丹参素的提取量：根据实验结果得出,其影响因素顺序为C>B>A,最佳工艺为A2B2C3,即60%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析得知影响提取效果的主要因素是回流时间,乙醇浓度和乙醇量对其影响不显著。丹参酮ⅡA的提取量：根据实验结果判断其影响因素顺序为A>C>B,最佳工艺为A3B2C3,即80%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析可知,乙醇浓度对提取效果有显著性差异,乙醇量和回流时间对其影响不显著。综合考虑认为丹参采用回流提取法,以80 %乙醇、10倍量回流2次、每次1.5 h的方法较好。
3.3 超声波提取法
3.3.1 试验方法
准确称取丹参25.00 g,加入一定量的水,超声提取,按表3方法进行试验。丹参提取液水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量,计算提取量。表3 超声波提取法试验因素水平表（略）
3.3.2 结果分析
由实验结果得知：影响因素顺序为B>A>C,最佳工艺为A1B2C2,即40 Hz、12倍加水量、60 min,其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
3.4 CO2超临界流体萃取法
3.4.1 试验方法
准确称取丹参25.00 g,选用不同萃取压力、萃取温度、原料粒度(目数)、95%的乙醇做夹带剂,按表4方法进行试验。丹参提取液水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量,计算提取量。
3.4.2 结果分析
由实验结果得知：影响萃取率工艺参数顺序：D>C>A>B,最优化工艺条件为：A3B2C3D3,即萃取压力25 MPa,萃取温度45 ℃,夹带剂用量(95%的乙醇)400 mL/h,原料粒度为40目,其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
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丹参的主要成分有水溶性丹参素和脂溶性的丹参酮ⅡA。丹参素溶于水,且热稳定性较好,故水煎法与乙醇回流法的丹参素较高,CO2超临界流体萃取法最高；脂溶性的丹参酮ⅡA受热不稳定,会分解,受加热和浓缩时间的影响,故用水做溶媒的提取含量偏低,用乙醇作为夹带剂的CO2超临界流体萃取法含量最高。故选用CO2超临界流体萃取法来提取丹参的有效成分.
1 仪器和试剂
Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司),KQ-500DE型医用超声波(昆山市超声仪器有限公司,频率40 kHz)。丹参购于广州清平药材市场,经鉴定为正品；丹参素对照品(自制,批号20040510,含量99.5%)、丹参酮ⅡA对照品(自制,批号20041015,含量99.2%)。甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。
2 分析检测方法
2.1 丹参素HPLC分析的色谱条件：色谱柱：Zorbax ODS反相柱(250 mm×4.6mm,5 μm),流动相：甲醇-水=0.1∶0.9(用冰醋酸调pH=3),进样量：20 μL；灵敏度：0.16；柱温：40 ℃；λ=281 nm；流速：1.0 mL/min。
2.2 丹参酮ⅡA HPLC分析的色谱条件
色谱柱：Zorbax ODS反相柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：甲醇-水=0.85∶0.15,进样量：20 μL；灵敏度：0.32；柱温：40 ℃；λ=270 nm；流速：1.0 mL/min。
3 实验方法
3.1 传统水煎法
3.1.1 试验方法：准确称取丹参25.00 g,加入一定量的水,加热煎煮,根据表1条件进行试验。丹参提取液水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量,计算提取量。表1 传统水煎法试验因素水平表（略）
3.1.2 结果分析
由实验结果得出,影响因素顺序为B>C>A,最佳工艺为A3B3C2,即采用12倍量水,煎煮2次,每次1.5 h的煎煮方法,其丹参素和丹参酮ⅡA含量明显高于其他条件的含量。故认为此条件为传统水煎法的最佳提取条件。
3.2 乙醇回流法
3.2.1 试验方法
准确称取丹参25.00 g,加入一定浓度、一定量的乙醇,加热回流,根据表2条件进行试验。丹参提取液高速离心,上清液回收乙醇,再水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA的含量,计算提取量。
3.2.2 结果分析
丹参素的提取量：根据实验结果得出,其影响因素顺序为C>B>A,最佳工艺为A2B2C3,即60%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析得知影响提取效果的主要因素是回流时间,乙醇浓度和乙醇量对其影响不显著。丹参酮ⅡA的提取量：根据实验结果判断其影响因素顺序为A>C>B,最佳工艺为A3B2C3,即80%乙醇、10倍量、回流1.5 h。从方差分析可知,乙醇浓度对提取效果有显著性差异,乙醇量和回流时间对其影响不显著。综合考虑认为丹参采用回流提取法,以80 %乙醇、10倍量回流2次、每次1.5 h的方法较好。
3.3 超声波提取法
3.3.1 试验方法
准确称取丹参25.00 g,加入一定量的水,超声提取,按表3方法进行试验。丹参提取液水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量,计算提取量。表3 超声波提取法试验因素水平表（略）
3.3.2 结果分析
由实验结果得知：影响因素顺序为B>A>C,最佳工艺为A1B2C2,即40 Hz、12倍加水量、60 min,其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
3.4 CO2超临界流体萃取法
3.4.1 试验方法
准确称取丹参25.00 g,选用不同萃取压力、萃取温度、原料粒度(目数)、95%的乙醇做夹带剂,按表4方法进行试验。丹参提取液水浴浓缩,用蒸馏水洗入50 mL量瓶,定容。HPLC法测定丹参素和丹参酮ⅡA含量,计算提取量。
3.4.2 结果分析
由实验结果得知：影响萃取率工艺参数顺序：D>C>A>B,最优化工艺条件为：A3B2C3D3,即萃取压力25 MPa,萃取温度45 ℃,夹带剂用量(95%的乙醇)400 mL/h,原料粒度为40目,其丹参素和丹参酮ⅡA的含量高于其他条件的含量。
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