川芎愈伤组织中阿魏酸含量的测定实验-护理综述论文
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本试验表明,川芎愈伤组织中确实含有阿魏酸,但是相比于对照药材中的含量较低。我们可以通过选择不同的外植体、筛选高产细胞系、调控物理因子和化学因子及改变培养方法等刺激代谢产物的合成与积累。本研究为利用川芎组织培养进行阿魏酸的工业化生产提供了理论空间和试验依据。
我们在试验中发现,药材和愈伤组织中的成分虽然不能逐一确定,但是通过比较愈伤组织与药材的HPLC图谱(见图1),发现愈伤组织和药材中的化学成分并不完全一致。即药材中不存在的成分,培养物中有可能存在；而药材中存在的成分,培养物中不一定产生。我们推测,可能不同药用成分基因的启动时间有差异,同时也可能是在植物生长发育过程的不同时间(愈伤组织、植株生长、药材成熟期)有效成分的生成及其累积量不同而造成的。
1 实验材料
Agilent 1100 series 高效液相色谱仪。川芎愈伤组织为本研究室自培养,继代次数分别为第8代、第9代、第10代；阿魏酸对照品。试剂：甲醇、乙腈均为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
ZORBAX 300SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-1%三乙胺溶液(用磷酸将pH值调至3.0,15∶85)；检测波长：320 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：27 ℃；进样20 μL。
2.2 阿魏酸对照品溶液的配制
精密称取阿魏酸对照品0.93 mg于100 mL容量瓶中,以甲醇溶解并定容,摇匀,配成9.3 μg/mL的溶液。川芎愈伤组织供试品溶液制备：取川芎经粉碎的干燥愈伤组织0.5 g,精密称取,加甲醇-甲酸(95∶5)溶液20 mL,超声处理(功率250 W,频率50 kHz)50 min,取出,放冷,过滤,收上清液,水浴蒸干,残渣用3 mL甲醇溶解,用0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,备用。另取川芎对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。
2.3 检测波长的选择
取阿魏酸对照品溶液,置于紫外分光光度计中,在200～400 nm范围内进行扫描,结果在320 nm处有较大吸收峰,吸收度较强且不受溶剂峰的干扰,故选择320 nm处测定吸收波长。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液100、126、167、251、502 μL,加甲醇定容至1 mL,摇匀,进样量为20 μL,以对照品峰面积Y为纵坐标,以进样浓度X(μg/mL)为横坐标进行线性回归,得回归方程为：Y＝416 126X－23.959,相关系数r＝0.999 8。表明阿魏酸在0.93～4.67 μg/mL浓度范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取上述对照品溶液20 μL,重复进样5次,测得阿魏酸峰面积积分值分别为933.6、940.2、964.6、965.6、953.1,RSD＝1.51%,表明仪器精密度良好。
2.6 加样回收率试验
采用加样回收法。精密称取已知含量(1.276 μg/mL)的样品,分别精密加入一定量的阿魏酸(1.556 μg/mL)对照品,按正文样品溶液的制备方法及上述的色谱条件,依法测定峰面积,计算回收率,结果平均回收率为99.98%,RSD＝1.63%。结果见表1。精密称取干燥愈伤组织粉碎品1.0 g,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,吸取20 μL注入高效液相色谱仪,测定含量,共测定3代。结果见表2,高效液相色谱图见图1。表2 样品中阿魏酸含量测定结果(略)
护理研究论文 http://www.qikanba.com/
本试验表明,川芎愈伤组织中确实含有阿魏酸,但是相比于对照药材中的含量较低。我们可以通过选择不同的外植体、筛选高产细胞系、调控物理因子和化学因子及改变培养方法等刺激代谢产物的合成与积累。本研究为利用川芎组织培养进行阿魏酸的工业化生产提供了理论空间和试验依据。
我们在试验中发现,药材和愈伤组织中的成分虽然不能逐一确定,但是通过比较愈伤组织与药材的HPLC图谱(见图1),发现愈伤组织和药材中的化学成分并不完全一致。即药材中不存在的成分,培养物中有可能存在；而药材中存在的成分,培养物中不一定产生。我们推测,可能不同药用成分基因的启动时间有差异,同时也可能是在植物生长发育过程的不同时间(愈伤组织、植株生长、药材成熟期)有效成分的生成及其累积量不同而造成的。
1 实验材料
Agilent 1100 series 高效液相色谱仪。川芎愈伤组织为本研究室自培养,继代次数分别为第8代、第9代、第10代；阿魏酸对照品。试剂：甲醇、乙腈均为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
ZORBAX 300SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-1%三乙胺溶液(用磷酸将pH值调至3.0,15∶85)；检测波长：320 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：27 ℃；进样20 μL。
2.2 阿魏酸对照品溶液的配制
精密称取阿魏酸对照品0.93 mg于100 mL容量瓶中,以甲醇溶解并定容,摇匀,配成9.3 μg/mL的溶液。川芎愈伤组织供试品溶液制备：取川芎经粉碎的干燥愈伤组织0.5 g,精密称取,加甲醇-甲酸(95∶5)溶液20 mL,超声处理(功率250 W,频率50 kHz)50 min,取出,放冷,过滤,收上清液,水浴蒸干,残渣用3 mL甲醇溶解,用0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液,备用。另取川芎对照药材0.5 g,同法制成对照药材溶液。
2.3 检测波长的选择
取阿魏酸对照品溶液,置于紫外分光光度计中,在200～400 nm范围内进行扫描,结果在320 nm处有较大吸收峰,吸收度较强且不受溶剂峰的干扰,故选择320 nm处测定吸收波长。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品溶液100、126、167、251、502 μL,加甲醇定容至1 mL,摇匀,进样量为20 μL,以对照品峰面积Y为纵坐标,以进样浓度X(μg/mL)为横坐标进行线性回归,得回归方程为：Y＝416 126X－23.959,相关系数r＝0.999 8。表明阿魏酸在0.93～4.67 μg/mL浓度范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取上述对照品溶液20 μL,重复进样5次,测得阿魏酸峰面积积分值分别为933.6、940.2、964.6、965.6、953.1,RSD＝1.51%,表明仪器精密度良好。
2.6 加样回收率试验
采用加样回收法。精密称取已知含量(1.276 μg/mL)的样品,分别精密加入一定量的阿魏酸(1.556 μg/mL)对照品,按正文样品溶液的制备方法及上述的色谱条件,依法测定峰面积,计算回收率,结果平均回收率为99.98%,RSD＝1.63%。结果见表1。精密称取干燥愈伤组织粉碎品1.0 g,按“2.3”项下方法制备供试品溶液,吸取20 μL注入高效液相色谱仪,测定含量,共测定3代。结果见表2,高效液相色谱图见图1。表2 样品中阿魏酸含量测定结果(略)
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