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    刺五加为五加科植物刺五加Acanthopanax senticosus (Rupr.et Maxim.)Harms的干燥根及根茎,其茎、叶也可作药用,其主要分布于我国东北、华北及陕西、四川、广西等地。目前对刺五加根及根茎的研究报道较多,而对其叶的研究较少。近年研究表明,刺五加叶中含有丰富的具有广泛药理活性的皂苷类、黄酮类及有机酸类化合物,可进一步开发利用。且目前刺五加野生资源已严重不足,被国家列为三级保护渐危品种。将刺五加叶作为药材深入研究和开发对保护药用刺五加资源具有重要意义。笔者在对不同产地刺五加叶的定性定量试验研究中发现,其中绿原酸和金丝桃苷含量较高,而异嗪皮啶含量较低,且均不含有紫丁香苷。为有效控制不同产地的刺五加叶质量,笔者采用HPLC法同时测定其中绿原酸及金丝桃苷含量。
　　1  仪器与试药
    Agilent-1100型高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司)；Satorious Bp211D精密天平。绿原酸对照品(中国药品生物品检定所,批号110753-200413)；金丝桃苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号111521-200303)。甲醇为色谱纯,水为重蒸水(自制),其他试剂均为分析纯。

    刺五加叶分别采自：辽宁丹东、本溪、凤城、东港、恒仁及黑龙江小兴安岭、江苏南京等地区,共收集8批样品,经南京中医药大学中药鉴定教研室鉴定为五加科植物刺五加的干燥叶。
　　2  方法与结果
　　2.1  色谱条件与系统适用性
    色谱柱为Hedera·ODS-2 C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.4%磷酸(17∶83)；体积流量：1.0 mL/min；检测波长：360 nm；柱温：30 ℃。在此色谱条件下,刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷的保留时间分别为5.3 min和17.9 min,理论塔板数均不低于8 000。色谱峰达到完全分离,绿原酸及金丝桃苷与相邻峰的分离度均大于1.8且峰形对称,见图1。
　　2.2  对照品溶液的制备
    分别精密称取绿原酸和金丝桃苷对照品适量,加50%甲醇制成绿原酸(0.051 8 mg/mL)和金丝桃苷(0.051 mg/mL)的混合对照溶液,即得。
　　2.3  供试品溶液的制备
    取刺五加叶粗粉(过2号筛)0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50%乙醇20 mL,称定质量,超声处理30 min,放冷,再称定质量,用50%乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过,精密移取续滤液1 mL置5 mL棕色容量瓶中,50%甲醇定容,即得。
　　2.4  线性关系考察
    精密称取绿原酸对照品10.2 mg和金丝桃苷对照品10.36 mg,置10 mL棕色容量瓶中,加50%甲醇溶解并定容,摇匀,制成绿原酸(1.02 mg/mL)及金丝桃苷(1.036 mg/mL)的混合储备液。精密吸取此储备液0.1、0.2、0.5、0.8、1.5、3.0 mL,分别置10 mL棕色量瓶中,加50%甲醇定容,摇匀,制得系列对照品溶液。分别吸取10 μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。以对照品溶液浓度(μg/mL)为横坐标,峰面积为纵坐标绘制标准曲线,得绿原酸标准曲线回归方程为：Y＝6 923.6X＋15.995,r＝0.999 5,线性范围为10.2～306 μg/mL；金丝桃苷标准曲线回归方程为：Y＝20 133X－47.864,r＝0.999 8,线性范围为10.4～312 μg/mL。
　　2.5  精密度试验
   精密吸取绿原酸(0.051 mg/mL)和金丝桃苷(0.051 8 mg/mL)的混合对照品溶液,重复进样6次,每次10 μL,分别测定绿原酸和金丝桃苷的峰面积。结果绿原酸的RSD＝1.13%,金丝桃苷的RSD＝1.02%,精密度良好。
　　2.6  稳定性试验
    取同一产地刺五加叶(凤城)粗粉0.5 g,精密称定,按照“2.3”项下方法制备供试品溶液,室温下放置,分别于0、1、2、4、8、12 h进样10 μL,依法测定绿原酸和金丝桃苷的峰面积值。结果绿原酸和金丝桃苷的日内RSD分别为2.21%和1.07%,表明样品在制备供试品溶液后至少12 h内稳定。
　　2.7  重复性试验
    取同一产地刺五加叶(凤城)粗粉5份,每份约0.5 g,精密称定,照“2.3”项下方法制备供试品溶液,依法进行测定。结果绿原酸平均质量分数为3.79%,RSD＝1.93%；金丝桃苷为0.531%,RSD＝1.12%,表明本测定方法的重复性良好。
　　2.8  回收率试验
    精密称取同一产地已知含量的刺五加叶(凤城)粗粉6份,每份约0.25 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入含绿原酸4.8 mg/mL、金丝桃苷0.7 mg/mL的混合对照品溶液2 mL,制备供试品溶液,按上述高效液相色谱条件测定,计算。结果绿原酸和金丝桃苷的平均回收率分别为97.14%和98.21%,RSD分别为2.65%和1.89%。
　　2.9  样品测定
    分别精密称取8个产地刺五加叶粗粉各0.5 g,按上述方法测定,测定结果见表1。所测样品绿原酸含量为0.207%～4.600%,平均2.551%(n＝8)；金丝桃苷含量为0.206%～0.780%,平均0.499%(n＝8)。其中采自丹东刺五加基地的样品所含绿原酸及金丝桃苷均较高。表1  不同产地刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷含量测定结果（略）
 　　3  讨论
　　3.1  流动相的优化
    比较了不同系统和流动相比例,如乙腈(A)-0.1%磷酸(B)梯度洗脱(0～50 min,A的体积分数为10%～20%；50～86 min,A的体积分数为20%～48%；86～135 min,A的体积分数为48%～100%)[1]、甲醇-0.4%磷酸(38∶62)[2]、磷酸溶液的比例经调试磷酸溶液(13∶87)[3],效果均不够理想。结果甲醇-0.4%磷酸(17∶83)系统绿原酸和金丝桃苷得到较好分离,且保留时间合适。
　　3.2  检测波长的选择
    文献报道绿原酸在327 nm处有最大吸收[2],金丝桃苷在257 nm和360 nm波长处有最大吸收[4]。通过试验比较,在360 nm处绿原酸和金丝桃苷的峰面积值较理想,故选择360 nm为2个成分的同一检测波长。
　　3.3  供试品提取条件的考察
　　3.3.1  溶剂的选择
　　有文献报道,采用甲醇超声法提取刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷[5-6],笔者取供试品(凤城)适量,分别采用水、25%乙醇、50%乙醇、75%乙醇、95%乙醇及25%甲醇、50%甲醇、75%甲醇、100%甲醇为提取溶剂进行超声处理,结果以50%乙醇超声时绿原酸和金丝桃苷的提取率均为最高,质量分数分别为3.220%和0.486%；而甲醇超声仅为0.851%和0.351%。
　　3.3.2  提取时间的选择
　　以50%乙醇作为提取溶剂,按15、30、45 min不同时间超声处理,药材中绿原酸和金丝桃苷质量分数分别为3.48%、3.83%、3.77%和0.45%、0.54%、0.49%,结果表明超声30 min即能提取完全。
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