对五倍子抗菌作用机制的实验观察-护理学核心期刊
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抗菌药物的作用机制之一就是干扰细菌细胞壁的合成,多数青霉素类和头孢菌素类等β-内酰胺类抗生素,主要与青霉素结合蛋白[PBP1和(或)PBP3]结合,形成丝状体和球形体,然后细菌变形萎缩,逐步溶解死亡[5]。而万古霉素的作用位点处于β-内酰胺类抗生素作用位点的上游,它抑制细胞壁合成的第二阶段(类脂结合)中的一个关键的转化反应,即当万古霉素与在UDP-五肽末端的D-丙氨酰-D-丙氨酸末端游离羧基紧密结合,就抑制了有功能的肽聚糖形成过程中所需的转糖苷作用和转肽作用的最后步骤,导致细菌细胞的溶解[6]。五倍子乙醇提取物对43株耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE)和81株甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)的MIC90分别为0.288、0.144 mg/mL；在显微镜下,经五倍子处理的表皮葡萄球菌菌细胞逐渐膨胀、增大,可能是五倍子进入菌细胞后,其抗菌物质与菌细胞发挥杀菌作用所致。膨胀到一定大小时细胞内含物逐渐消失。
1 实验材料
1.1 菌种准备
从本院临床患者的血液、尿液、脓汁、痰等标本分离的表皮葡萄球菌共236株,均经API系统(法国生物梅里埃公司生产)及参照Manual for clinical Microbiology等进行鉴定[2]。鉴定后按NCCLS(2002年版)标准确定耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE)和甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)。质控菌株为金葡萄球菌ATCC 25923,各菌株制成0.5麦氏单位的菌悬液。
1.2 仪器
微量多点接种仪,北京医科大学昆仑药物发展研究所生产。
1.3 培养基
Mueller-Hinton琼脂(美国BD公司生产),BBL,简称M-H琼脂,批号775661501。
1.4 药物
五倍子,购自河北省药材公司,先将五倍子按常法做成煎液,即50 g五倍子用文火煎后做成200 mL煎液(为25%五倍子水煎液),置4～8 ℃冰箱中过夜,过滤后按文献[3]制成五倍子乙醇提取物。
2 实验方法
将表皮葡萄球菌划线接种M-H琼脂平板,经35 ℃培养18～24 h,取单个菌落接种3 mL牛心汤培养基,经35 ℃培养6～8 h后,以无菌操作涂片,进行革兰染色,观察表皮葡萄球菌的形态,如正常则作为对照。将上述6～8 h培养的牛心汤培养物,立即加入五倍子水煎剂1 mL,混匀,于35 ℃培养。并分别于0.5、1、2、4、8、10、24 h以无菌操作涂片,行革兰染色,用光学显微镜观察表皮葡萄球菌的形态变化。
3 结果
用显微镜观察表皮葡萄球菌形态。先用低倍镜和高倍镜观察,找到适当视野时,再用油镜仔细观察细菌形态变化。正常表皮葡萄球菌在油镜下,其形态为大小相等、染色一致的革兰阳性球菌(见图1)。表皮葡萄球菌的牛心汤培养液加入五倍子提取物后,菌细胞由小变大,即逐渐膨胀、增大(见图2、图3),可能是五倍子进入菌细胞后,其抗菌物质与菌细胞发挥抑菌作用所致,实际上菌细胞已经死亡。菌细胞膨胀到一定大小时,细胞内含物包括细胞壁和细胞质逐渐消失(见图4、图5),最后菌细胞的内含物全部消失,只剩下菌细胞的影子(见图6)。
2012年医药核心期刊 http://www.qikanba.com/
抗菌药物的作用机制之一就是干扰细菌细胞壁的合成,多数青霉素类和头孢菌素类等β-内酰胺类抗生素,主要与青霉素结合蛋白[PBP1和(或)PBP3]结合,形成丝状体和球形体,然后细菌变形萎缩,逐步溶解死亡[5]。而万古霉素的作用位点处于β-内酰胺类抗生素作用位点的上游,它抑制细胞壁合成的第二阶段(类脂结合)中的一个关键的转化反应,即当万古霉素与在UDP-五肽末端的D-丙氨酰-D-丙氨酸末端游离羧基紧密结合,就抑制了有功能的肽聚糖形成过程中所需的转糖苷作用和转肽作用的最后步骤,导致细菌细胞的溶解[6]。五倍子乙醇提取物对43株耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE)和81株甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)的MIC90分别为0.288、0.144 mg/mL；在显微镜下,经五倍子处理的表皮葡萄球菌菌细胞逐渐膨胀、增大,可能是五倍子进入菌细胞后,其抗菌物质与菌细胞发挥杀菌作用所致。膨胀到一定大小时细胞内含物逐渐消失。
1 实验材料
1.1 菌种准备
从本院临床患者的血液、尿液、脓汁、痰等标本分离的表皮葡萄球菌共236株,均经API系统(法国生物梅里埃公司生产)及参照Manual for clinical Microbiology等进行鉴定[2]。鉴定后按NCCLS(2002年版)标准确定耐甲氧西林的表皮葡萄球菌(MRSE)和甲氧西林敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)。质控菌株为金葡萄球菌ATCC 25923,各菌株制成0.5麦氏单位的菌悬液。
1.2 仪器
微量多点接种仪,北京医科大学昆仑药物发展研究所生产。
1.3 培养基
Mueller-Hinton琼脂(美国BD公司生产),BBL,简称M-H琼脂,批号775661501。
1.4 药物
五倍子,购自河北省药材公司,先将五倍子按常法做成煎液,即50 g五倍子用文火煎后做成200 mL煎液(为25%五倍子水煎液),置4～8 ℃冰箱中过夜,过滤后按文献[3]制成五倍子乙醇提取物。
2 实验方法
将表皮葡萄球菌划线接种M-H琼脂平板,经35 ℃培养18～24 h,取单个菌落接种3 mL牛心汤培养基,经35 ℃培养6～8 h后,以无菌操作涂片,进行革兰染色,观察表皮葡萄球菌的形态,如正常则作为对照。将上述6～8 h培养的牛心汤培养物,立即加入五倍子水煎剂1 mL,混匀,于35 ℃培养。并分别于0.5、1、2、4、8、10、24 h以无菌操作涂片,行革兰染色,用光学显微镜观察表皮葡萄球菌的形态变化。
3 结果
用显微镜观察表皮葡萄球菌形态。先用低倍镜和高倍镜观察,找到适当视野时,再用油镜仔细观察细菌形态变化。正常表皮葡萄球菌在油镜下,其形态为大小相等、染色一致的革兰阳性球菌(见图1)。表皮葡萄球菌的牛心汤培养液加入五倍子提取物后,菌细胞由小变大,即逐渐膨胀、增大(见图2、图3),可能是五倍子进入菌细胞后,其抗菌物质与菌细胞发挥抑菌作用所致,实际上菌细胞已经死亡。菌细胞膨胀到一定大小时,细胞内含物包括细胞壁和细胞质逐渐消失(见图4、图5),最后菌细胞的内含物全部消失,只剩下菌细胞的影子(见图6)。
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