药食品中黄豆黄苷和黄豆黄素的含量测定实验-护理专业本科毕业论文

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　　1 仪器与试剂
　　Waters Alliance 2690高效液相色谱仪,DAD紫外检测器。黄豆黄苷和黄豆黄素对照品均由中国药品生物制品检定所提供。实验所用乙腈为色谱纯,其他溶剂为分析纯,水为纯净水,过Millipoore 0.22 μm滤膜。含大豆异黄酮中药样品3个(样品1～3),保健食品样品3个(样品4～6)均为市售。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件
　　色谱柱Agilent zorbax SB-C18(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温25 ℃；流动相由0.2%甲酸-乙腈按梯度表组成(见表1),流速1 mL/min；检测波长255 nm；理论塔板数按染料木素计算不低于2 000。色谱图见图1。
　　2.2对照品溶液的制备
　　分别精密称取黄豆黄苷和黄豆黄素对照品适量,加甲醇分别配制成黄豆黄苷0.120 0 mg/mL和黄豆黄素0.020 1 mg/mL的溶液,作为对照品溶液。
　　2.3 供试品溶液的制备
　　分别取样品(市售含大豆异黄酮类保健食品和中药样品)细粉0.4 g,精密称定,精密加入甲醇25 mL,称定重量,超声处理30 min,放至室温,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,过0.45 μm的微孔滤膜,作为供试品溶液。
　　2.4 线性范围的考察
　　分别吸取对照品溶液2.0、4.0、8.0、10.0、15.0 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积。以峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,计算其回归方程。两种大豆异黄酮线性关系分别为：黄豆黄素Y=6 863 452.35X+138 492.58(r=0.999 4),黄豆黄苷Y=5 973 869.46X-24 952.48(r=0.999 7)。黄豆黄素和黄豆黄苷分别在0.040～0.30 μg和0.24～1.82 μg范围内线性关系良好。
　　2.5 稳定性试验
　　精密吸取供试品溶液10 μL,每隔2 h进样1次,共6次,测定峰面积,结果黄豆黄苷和黄豆黄素的RSD分别为1.04%和0.98%,表明12 h内测定结果稳定。分别精密吸取对照品溶液10 μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,结果黄豆黄苷和黄豆黄素的RSD分别为1.29%和1.73% (n=5),表明仪器精密度良好。
　　2.6 重复性试验
　　取同一样品5份,按样品处理方法平行提取并同法测定两种成分的含量,求出测得值的RSD。黄豆黄苷和黄豆黄素的RSD分别为1.13%和0.96%,表明本法重复性良好。本实验建立了中药和保健食品中黄豆黄苷和黄豆黄素的含量测定方法,从样品测定结果可以看出,不同产品所含的以上两种大豆异黄酮成分的含量差别很大,反映出目前市场上该类产品的质量良莠不齐的现状。含量测定方法学实验结果表明,本法操作简单,测定结果准确,具有良好的重复性,可用于含大豆异黄酮类成分中药和保健食品中黄豆黄苷和黄豆黄素的含量测定。
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