补精益肾颗粒中有效药性成分提取工艺的对比-中华预防医学杂志投稿
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1 仪器与试药
Waters515双泵,2487双波长紫外检测器,WDL-95色谱工作站(大连化学物理研究所生产)。淫羊藿苷对照品,淫羊藿等处方中药材购于南京市药材公司,经南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定,符合《中华人民共和国药典》(2005年版)有关规定。乙腈为色谱纯(德国Merck公司生产),水为超纯水,其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 因素水平
对影响提取效果的加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)3个因素分别取3个水平安排实验,因素水平见表1。选用L9(34)表进行试验安排,正交试验设计及结果见表2。注：淫羊霍苷提取率=(提取液中淫羊霍苷含量/投料药材中淫羊霍苷含量)×100%。
2.1.1 吸水率考察[1]
将淫羊藿等处方药材适当粉碎,称取处方一半量药材50 g(3份)混合,加水500 mL浸泡,隔一定时间观察浸透心程度。至全部透心时,吸水率为2%。根据处方量称取淫羊藿、太子参等药材,共9份,每份重100 g,按表2安排试验,煎煮提取,每份提取液减压浓缩至约100 mL,精密移取10 mL置50 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,采用淫羊藿苷的含量测定方法用HPLC法测定。
2.1.2 水浸出物测定
精密量取上述正交试验的提取液20 mL,于干燥至恒重的表面皿(W1)中,在水浴上蒸干后转移至烘箱中,105 ℃干燥4 h后立即放到干燥器中30 min,冷却后,立即称重(W2),由下式计算(W为处方量药材重量,V为各正交试验提取液体积)。
水浸出物得率(%)＝(W2－W1)×V/(W×20)×100%
2.2 淫羊藿苷的含量测定
2.2.1 色谱条件[2-3]
色谱柱：Lichrospher C18(4.6 mm×250 mm)；流动相：乙腈-水(28∶72)；流速：1.0 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；AUFS＝0.5。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取105 ℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品5.06 mg,置于5 mL容量瓶内,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取1 mL置于10 mL量瓶内,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为0.101 2 mg/mL淫羊藿苷对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
按处方比例称取淫羊藿、太子参等处方中的药材共100 g,加水提取2次,每次提取1.5 h,合并2次提取液,提取液经过高速离心之后,精密吸取该提取液1 mL,置于5 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。
2.2.4 阴性对照试验
按处方比例称取除淫羊藿以外的药材,按“2.2.3”项下方法制备阴性样品液及阴性对照溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5 μL,进样,按“2.2.1”项色谱条件测定,结果阴性无干扰。
2.2.5 线性关系考察
精密吸取淫羊藿苷对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL,注入液相色谱器仪中,测定峰面积。以进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,经线性回归,回归方程为：Y＝5 864 392.0X－897.5,r＝0.999 4。由测定结果提示,淫羊藿苷进样量在0.202 4～1.214 4 μg范围内线性关系良好。
2.3 试验结果：浸出物得率方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00。对正交试验所得结果作直观分析和方差分析,以判断各因素对提取效果的影响程度,筛选出在该试验条件下最优的提取条件。由水浸出物得率为考察指标,由表2中极差R值大小分析可知,各因素主次顺序为C>A>B；方差分析结果表明：只有C因素具有显著性意义(P<0.05),A因素和B因素对水提浸出物的得率没有显著性意义(P>0.05),A3B1C3为佳；以淫羊霍苷含量为考察指标,由表2极差R值大小显示,各因素作用主次为B>A>C。方差分析结果表明,A、B、C三因素均对淫羊霍苷含量的影响具有显著性意义(P<0.05),以A2B2C2组合为佳。考虑到淫羊霍苷含量这个指标更为重要,故选择A2B2C2为最佳工艺,提取2次、加水量分别为10倍量和8倍量、提取时间各为1.5 h。验证试验：称取处方量药材按A2B2C2进行验证试验,结果与正交试验结果吻合,说明该工艺稳定可行。
医学影像毕业论文 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试药
Waters515双泵,2487双波长紫外检测器,WDL-95色谱工作站(大连化学物理研究所生产)。淫羊藿苷对照品,淫羊藿等处方中药材购于南京市药材公司,经南京中医药大学鉴定教研室吴启南教授鉴定,符合《中华人民共和国药典》(2005年版)有关规定。乙腈为色谱纯(德国Merck公司生产),水为超纯水,其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 因素水平
对影响提取效果的加水量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)3个因素分别取3个水平安排实验,因素水平见表1。选用L9(34)表进行试验安排,正交试验设计及结果见表2。注：淫羊霍苷提取率=(提取液中淫羊霍苷含量/投料药材中淫羊霍苷含量)×100%。
2.1.1 吸水率考察[1]
将淫羊藿等处方药材适当粉碎,称取处方一半量药材50 g(3份)混合,加水500 mL浸泡,隔一定时间观察浸透心程度。至全部透心时,吸水率为2%。根据处方量称取淫羊藿、太子参等药材,共9份,每份重100 g,按表2安排试验,煎煮提取,每份提取液减压浓缩至约100 mL,精密移取10 mL置50 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,采用淫羊藿苷的含量测定方法用HPLC法测定。
2.1.2 水浸出物测定
精密量取上述正交试验的提取液20 mL,于干燥至恒重的表面皿(W1)中,在水浴上蒸干后转移至烘箱中,105 ℃干燥4 h后立即放到干燥器中30 min,冷却后,立即称重(W2),由下式计算(W为处方量药材重量,V为各正交试验提取液体积)。
水浸出物得率(%)＝(W2－W1)×V/(W×20)×100%
2.2 淫羊藿苷的含量测定
2.2.1 色谱条件[2-3]
色谱柱：Lichrospher C18(4.6 mm×250 mm)；流动相：乙腈-水(28∶72)；流速：1.0 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；AUFS＝0.5。
2.2.2 对照品溶液的制备
精密称取105 ℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品5.06 mg,置于5 mL容量瓶内,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取1 mL置于10 mL量瓶内,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为0.101 2 mg/mL淫羊藿苷对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备
按处方比例称取淫羊藿、太子参等处方中的药材共100 g,加水提取2次,每次提取1.5 h,合并2次提取液,提取液经过高速离心之后,精密吸取该提取液1 mL,置于5 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得供试品溶液。
2.2.4 阴性对照试验
按处方比例称取除淫羊藿以外的药材,按“2.2.3”项下方法制备阴性样品液及阴性对照溶液。分别吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各5 μL,进样,按“2.2.1”项色谱条件测定,结果阴性无干扰。
2.2.5 线性关系考察
精密吸取淫羊藿苷对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL,注入液相色谱器仪中,测定峰面积。以进样量为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,经线性回归,回归方程为：Y＝5 864 392.0X－897.5,r＝0.999 4。由测定结果提示,淫羊藿苷进样量在0.202 4～1.214 4 μg范围内线性关系良好。
2.3 试验结果：浸出物得率方差分析表（略）注：F0.05(2,2)=19.00。对正交试验所得结果作直观分析和方差分析,以判断各因素对提取效果的影响程度,筛选出在该试验条件下最优的提取条件。由水浸出物得率为考察指标,由表2中极差R值大小分析可知,各因素主次顺序为C>A>B；方差分析结果表明：只有C因素具有显著性意义(P<0.05),A因素和B因素对水提浸出物的得率没有显著性意义(P>0.05),A3B1C3为佳；以淫羊霍苷含量为考察指标,由表2极差R值大小显示,各因素作用主次为B>A>C。方差分析结果表明,A、B、C三因素均对淫羊霍苷含量的影响具有显著性意义(P<0.05),以A2B2C2组合为佳。考虑到淫羊霍苷含量这个指标更为重要,故选择A2B2C2为最佳工艺,提取2次、加水量分别为10倍量和8倍量、提取时间各为1.5 h。验证试验：称取处方量药材按A2B2C2进行验证试验,结果与正交试验结果吻合,说明该工艺稳定可行。
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