用高效液相色谱法测定荜茇止痛酊中胡椒碱含量的实验报告-中华围产医学杂志投稿
中华围产医学杂志投稿 医学杂志投稿 中华医学杂志投稿 医学护理论文
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津)LC-6A,包括：SPD-6AV检测器,C-R4A数据处理机。胡椒碱(批号0775-9702,由中国药品生物制品检定所提供,纯度为98.79%)；荜茇止痛酊(批号041212、041216、041220,无锡山禾药业股份有限公司生产)。甲醇、乙腈为色谱醇,无水乙醇为分析醇,水为熏蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：C18 柱(4.6 mm×250 mm,10 μm),大连依科特科学仪器有限公司；流动相：四氢呋喃-甲醇-水(V∶V∶V＝30∶30∶50)；流速：1.0 mL/min；检测波长：343 nm；柱温：室温；分离度：R>1.5；理论板数按胡椒碱峰计算应大于1 500。
2.2 检测波长的选择
对胡椒碱的乙醇溶液进行紫外区扫描,结果胡椒碱在343 nm处有最大吸收,故选用343 nm作为检测波长。
2.3 流动相的选择
曾试验4种流动相：①甲醇-水(77∶23)；②乙腈-水(70∶30)；③乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(70∶30),用磷酸调节pH为3.5、3.1；④四氢呋喃-甲醇-水(30∶30∶50),其中④使胡椒碱峰与杂质峰分离效果好,能基线分离。
2.4 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品10 mg,置50 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5 mL,置50 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL中含胡椒碱20 μg)。供试品溶液的制备：精密量取荜茇止痛酊1 mL,置25 mL棕色量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,于冰箱中冷藏1.5 h,取出,放置至室温,滤过,取续滤液5 mL,置25 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。阴性对照液的制备：按处方中药味的比例自配不含荜茇的群药,按其工艺制成阴性制剂,再按供试品溶液制备方法制成空白溶液,即得。
2.5 阴性液干扰试验
精密吸取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各10 μL注入色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸收,对本品中胡椒碱的含量测定无干扰,色谱图见图1。
2.6 线性关系的考察
精密吸取胡椒碱对照品(10.38 mg→50 mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分别置25 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取10 μL,注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以对照品的含量对峰面积值作图,得到一个通过原点的直线,并绘制标准曲线。结果表明,胡椒碱在8.3～41.5 mg/L范围内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：A＝3 413 186ρ－7 467.7,r＝0.999 8。
2.7 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液(批号041212),重复进样5次,求得RSD＝0.93%。 精密吸取同一供试品溶液(批号041212),分别于配制后0、2、4、8、16、24 h测定色谱峰面积,计算RSD为1.2%,结果表明,其在24 h内基本稳定。
3 结果
本实验采用高效液相色谱法内标法和外标法2种方法进行荜茇药材中胡椒碱含量的对比试验,结果显示,2种方法测定结果基本相同。2005年版《中华人民共和国药典》采用内标法测定含量,结果准确,但鉴于中药复方制剂成分复杂,采用内标法时分离度难以满足要求,因此,本实验研究采用外标法更为实际、可行。
中华老年医学杂志投稿 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津)LC-6A,包括：SPD-6AV检测器,C-R4A数据处理机。胡椒碱(批号0775-9702,由中国药品生物制品检定所提供,纯度为98.79%)；荜茇止痛酊(批号041212、041216、041220,无锡山禾药业股份有限公司生产)。甲醇、乙腈为色谱醇,无水乙醇为分析醇,水为熏蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：C18 柱(4.6 mm×250 mm,10 μm),大连依科特科学仪器有限公司；流动相：四氢呋喃-甲醇-水(V∶V∶V＝30∶30∶50)；流速：1.0 mL/min；检测波长：343 nm；柱温：室温；分离度：R>1.5；理论板数按胡椒碱峰计算应大于1 500。
2.2 检测波长的选择
对胡椒碱的乙醇溶液进行紫外区扫描,结果胡椒碱在343 nm处有最大吸收,故选用343 nm作为检测波长。
2.3 流动相的选择
曾试验4种流动相：①甲醇-水(77∶23)；②乙腈-水(70∶30)；③乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(70∶30),用磷酸调节pH为3.5、3.1；④四氢呋喃-甲醇-水(30∶30∶50),其中④使胡椒碱峰与杂质峰分离效果好,能基线分离。
2.4 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品10 mg,置50 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀。精密量取5 mL,置50 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得(每1 mL中含胡椒碱20 μg)。供试品溶液的制备：精密量取荜茇止痛酊1 mL,置25 mL棕色量瓶中,加无水乙醇稀释至刻度,摇匀,于冰箱中冷藏1.5 h,取出,放置至室温,滤过,取续滤液5 mL,置25 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,即得。阴性对照液的制备：按处方中药味的比例自配不含荜茇的群药,按其工艺制成阴性制剂,再按供试品溶液制备方法制成空白溶液,即得。
2.5 阴性液干扰试验
精密吸取供试品溶液、阴性液和对照品溶液各10 μL注入色谱仪中,由色谱图可知,在与对照品色谱峰保留时间相应的位置上,供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰出现；而阴性液在此峰位无吸收,对本品中胡椒碱的含量测定无干扰,色谱图见图1。
2.6 线性关系的考察
精密吸取胡椒碱对照品(10.38 mg→50 mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL,分别置25 mL棕色量瓶中,加乙醇稀释至刻度,摇匀,分别精密吸取10 μL,注入高效液相色谱仪,记录峰面积。以对照品的含量对峰面积值作图,得到一个通过原点的直线,并绘制标准曲线。结果表明,胡椒碱在8.3～41.5 mg/L范围内峰面积与对照品质量浓度呈良好线性关系,其回归方程为：A＝3 413 186ρ－7 467.7,r＝0.999 8。
2.7 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液(批号041212),重复进样5次,求得RSD＝0.93%。 精密吸取同一供试品溶液(批号041212),分别于配制后0、2、4、8、16、24 h测定色谱峰面积,计算RSD为1.2%,结果表明,其在24 h内基本稳定。
3 结果
本实验采用高效液相色谱法内标法和外标法2种方法进行荜茇药材中胡椒碱含量的对比试验,结果显示,2种方法测定结果基本相同。2005年版《中华人民共和国药典》采用内标法测定含量,结果准确,但鉴于中药复方制剂成分复杂,采用内标法时分离度难以满足要求,因此,本实验研究采用外标法更为实际、可行。
中华老年医学杂志投稿 http://www.qikanba.com/
我要分享到：
最新文章NEWS
- • 高职生道德信仰调查 本文版权由期刊吧所有
- • 医学论文中的统计问题
- • 医学论文投稿秘籍
- • 医学论文写作的程序介绍
- • 医学论文摘要的书写过程中存在的问题
- • 叙述医学研究论文标引用词的选择
- • 医学论文写作五大妙招
- • 如何进行儿科临床科学研究选题
- • 医学论文写作的流程
- • 医学论文统计设计方面存在问题总结
推荐期刊Tui Jian
Chinese Journal of Integrative Medicine
Journal of Genetics and Genomics
Journal of Bionic Engineering
Pedosphere
Chinese Journal of Structural Chemistry