黄连及香连丸中盐酸小檗碱含量的测定实验分析-医学北大核心期刊
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1 仪器与试药
RF-5000荧光分光光度计(日本岛津),UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂),AG135(四川时运成套仪器有限公司),80-2离心沉淀器(上海手术器械厂),CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号0713-9906)；黄连(贵州,批号20060424；四川,批号20060827、20070422)。药材经本校资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为黄连Coptis chinensis Franch.；香连丸(湖北诺得胜制药有限公司,批号061001、070101；湖北瑞华制药有限责任公司,批号060117)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司,批号050428)；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液和供试品溶液的制备
精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73 mg,置于10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.473 mg/mL的对照品溶液。取黄连药材粗粉约0.1 g,精密称定,置100 mL容量瓶中,加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约95 mL,60 ℃水浴加热15 min,取出,超声处理30 min,室温放置过夜,加甲醇至刻度,滤过,滤液作为黄连供试品溶液[1]。精密称取香连丸约0.4 g,加适量盐酸-甲醇(1∶100)溶液,索式回流提取至无色,提取液置水浴上蒸至约20 mL,定量转移至50 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为香连丸供试品溶液[2]。
2.2 薄层分析条件[3]
用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板,取对照品溶液适量,点样后用氨水饱和30 min,以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,展距10 cm,晾干后置紫外光(365 nm)下检视,盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点(Rf＝0.40)。
2.3 荧光条件的确定
取对照品溶液,用荧光分光光度计扫描,结果显示,盐酸小檗碱最大激发波长Ex＝365 nm,最大发射波长Em＝409 nm。取对照品溶液1 mL,分别加入不同体积的1 mol/L NaOH溶液,并用甲醇定容至2 mL,在Ex＝365 nm、Em＝409 nm处测定其荧光强度。结果表明,随着NaOH量的增加,其荧光强度不断增大,当加入50 μL时荧光强度最大,此后继续增加NaOH用量时其荧光强度变化不大。故试验中确定NaOH加入量为50 μL。
2.4 线性关系考察
分别吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0 μL,间隔1.5 cm依次点于同一硅胶G板上,按“2.2”项下条件展开,将相应斑点刮入离心管中,同行空白。各斑点用甲醇洗脱并将洗脱液依次转移至2 mL容量瓶中,加入1 mol/L NaOH溶液50 μL,甲醇定容,摇匀,在Ex＝365 nm、Em＝409 nm处测定荧光强度,以荧光强度为纵坐标,盐酸小檗碱含量为横坐标,得回归方程为：Y＝10.337X－1.897,r＝0.999 3,表明盐酸小檗碱在0.473～3.784 μg范围内荧光强度与其含量线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μL,点于同一硅胶G板上,呈等距离的6个点,按“2.4”项下方法测定,结果RSD＝1.34%。精密吸取对照品溶液10 μL,点于6个不同的硅胶G板上,按“2.4”项下方法测定,结果RSD＝2.55%。取同一份对照品洗脱液,每隔20 min测定一次荧光强度,连续测定7次,结果RSD＝1.50%,表明盐酸小檗碱在该条件下2 h内稳定性良好。精密吸取对照品溶液及黄连、香连丸提取液各10、20、10 μL,分别点于同一硅胶板上,按“2.2”项下条件展开,将相应斑点刮入离心管中,加入甲醇1.5 mL,振摇5 min,超声15 min, 3 000 r/min离心10 min,取上清液,置2 mL容量瓶中,加入1 mol/L NaOH溶液50 μL,甲醇定容,摇匀,测定其荧光强度,平行测定3次。
北大版医学核心期刊 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试药
RF-5000荧光分光光度计(日本岛津),UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂),AG135(四川时运成套仪器有限公司),80-2离心沉淀器(上海手术器械厂),CQ-250超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所,批号0713-9906)；黄连(贵州,批号20060424；四川,批号20060827、20070422)。药材经本校资源鉴定教研室姚振生教授鉴定为黄连Coptis chinensis Franch.；香连丸(湖北诺得胜制药有限公司,批号061001、070101；湖北瑞华制药有限责任公司,批号060117)。硅胶G(青岛海洋化工有限公司,批号050428)；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液和供试品溶液的制备
精密称定干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品4.73 mg,置于10 mL容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得浓度为0.473 mg/mL的对照品溶液。取黄连药材粗粉约0.1 g,精密称定,置100 mL容量瓶中,加盐酸-甲醇(1∶100)溶液约95 mL,60 ℃水浴加热15 min,取出,超声处理30 min,室温放置过夜,加甲醇至刻度,滤过,滤液作为黄连供试品溶液[1]。精密称取香连丸约0.4 g,加适量盐酸-甲醇(1∶100)溶液,索式回流提取至无色,提取液置水浴上蒸至约20 mL,定量转移至50 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为香连丸供试品溶液[2]。
2.2 薄层分析条件[3]
用0.3%CMC-Na为粘合剂自制硅胶G板,取对照品溶液适量,点样后用氨水饱和30 min,以苯-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-氨水(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂,展距10 cm,晾干后置紫外光(365 nm)下检视,盐酸小檗碱呈黄绿色荧光斑点(Rf＝0.40)。
2.3 荧光条件的确定
取对照品溶液,用荧光分光光度计扫描,结果显示,盐酸小檗碱最大激发波长Ex＝365 nm,最大发射波长Em＝409 nm。取对照品溶液1 mL,分别加入不同体积的1 mol/L NaOH溶液,并用甲醇定容至2 mL,在Ex＝365 nm、Em＝409 nm处测定其荧光强度。结果表明,随着NaOH量的增加,其荧光强度不断增大,当加入50 μL时荧光强度最大,此后继续增加NaOH用量时其荧光强度变化不大。故试验中确定NaOH加入量为50 μL。
2.4 线性关系考察
分别吸取对照品溶液1.0、2.0、4.0、5.0、6.0、8.0 μL,间隔1.5 cm依次点于同一硅胶G板上,按“2.2”项下条件展开,将相应斑点刮入离心管中,同行空白。各斑点用甲醇洗脱并将洗脱液依次转移至2 mL容量瓶中,加入1 mol/L NaOH溶液50 μL,甲醇定容,摇匀,在Ex＝365 nm、Em＝409 nm处测定荧光强度,以荧光强度为纵坐标,盐酸小檗碱含量为横坐标,得回归方程为：Y＝10.337X－1.897,r＝0.999 3,表明盐酸小檗碱在0.473～3.784 μg范围内荧光强度与其含量线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μL,点于同一硅胶G板上,呈等距离的6个点,按“2.4”项下方法测定,结果RSD＝1.34%。精密吸取对照品溶液10 μL,点于6个不同的硅胶G板上,按“2.4”项下方法测定,结果RSD＝2.55%。取同一份对照品洗脱液,每隔20 min测定一次荧光强度,连续测定7次,结果RSD＝1.50%,表明盐酸小檗碱在该条件下2 h内稳定性良好。精密吸取对照品溶液及黄连、香连丸提取液各10、20、10 μL,分别点于同一硅胶板上,按“2.2”项下条件展开,将相应斑点刮入离心管中,加入甲醇1.5 mL,振摇5 min,超声15 min, 3 000 r/min离心10 min,取上清液,置2 mL容量瓶中,加入1 mol/L NaOH溶液50 μL,甲醇定容,摇匀,测定其荧光强度,平行测定3次。
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