测定舒筋接骨片中血竭素含量的实验方法-中国生物类核心期刊
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1 仪器与试药
岛津LC-AT高效液相色谱仪,SPD-10A型控制器,紫外检测器,N-2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。十万分之一电子分析天平,超声波处理器。色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×25 mm,5 μm)。
舒筋接骨片(批准文号：鲁药制字Z0720030113,潍坊市中医院制剂中心提供,批号20061201,20061203,20070101, 20070301,20070501)；血竭、鹿茸、乳香(制)、没药(制)、骨碎补、鹿角霜、鸡血藤等中药购于潍坊海王中药饮片有限公司；对照品：血竭素高氯酸盐购于中国药品生物制品检定所(批号110811-200203)；所用试剂为色谱纯或分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
参考2005年版《中华人民共和国药典》(一部)血竭项下含量测定的条件和其他资料中的条件,血竭素的测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱。以440 nm作为检测波长,柱温40 ℃[1-3]。以乙腈-0.1%磷酸(25：75)为流动相；理论塔板数按血竭素峰计算应不低于4 000。
2.2 线性关系的考察
精密称取血竭素高氯酸盐对照品2.11 mg,置10 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液溶解,并稀释至刻度,摇匀,吸取上述对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL,置于10 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液至刻度,摇匀。分别吸取不同浓度的对照品溶液,注入液相色谱仪,如法测定。以对照品浓度对峰面积进行线性回归,得回归方程：Y＝53 682.9X-683.1,r＝0.999 9。
2.3 空白对照试验
供试品溶液的制备：取本品5片(批号20061201),研细,取0.5 g,置具塞锥形瓶中,精密加入3%磷酸甲醇溶液50 mL,称重,超声处理5 min,称重,加3%磷酸甲醇溶液补充减失的重量,摇匀,滤过,续滤液置于棕色瓶中,即得。对照品溶液的制备：精密称取血竭素高氯酸盐对照品1.55 mg,置10 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密吸取1 mL,置25 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液稀释至刻度,混匀,即得(血竭素＝血竭素高氯酸盐/1.377)。阴性对照溶液的制备：取阴性对照品(缺血竭),同供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪,按确定的方法检测。结果供试品溶液在与对照品相同的保留时间处有相同的血竭素峰,而阴性对照品没有,说明测定的专属性好。
2.6 试验
取本品(批号20061203),按确定的方法测定血竭素的含量,共测定5次,结果血竭素的平均含量为0.371 2 mg/g,RSD＝1.8%,证明本法测定的重复性好,变异系数小,符合含量测定的要求。为了观察测定方法能否准确的测定出制剂中血竭素的含量,按确定的方法测定了样品中血竭素的含量,进行加样回收率试验。称取已知含量的制剂(批号20061202, 0.370 4 mg/g),研细,取约0.5 g,精密称定,共6份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品溶液(0.050 6 mg/mL)5.0 mL、3%磷酸甲醇溶液45 mL,如法测定,计算血竭素的回收率,结果见表1。可知本测定方法的回收率高,符合含量测定的要求。取本品3批,每批样品取3份,分别按上述方法制得供试品溶液,按确定的方法测定样品中血竭素的含量,结果见表2。
生物医学核心期刊 http://www.qikanba.com/
1 仪器与试药
岛津LC-AT高效液相色谱仪,SPD-10A型控制器,紫外检测器,N-2000色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所)。十万分之一电子分析天平,超声波处理器。色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×25 mm,5 μm)。
舒筋接骨片(批准文号：鲁药制字Z0720030113,潍坊市中医院制剂中心提供,批号20061201,20061203,20070101, 20070301,20070501)；血竭、鹿茸、乳香(制)、没药(制)、骨碎补、鹿角霜、鸡血藤等中药购于潍坊海王中药饮片有限公司；对照品：血竭素高氯酸盐购于中国药品生物制品检定所(批号110811-200203)；所用试剂为色谱纯或分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
参考2005年版《中华人民共和国药典》(一部)血竭项下含量测定的条件和其他资料中的条件,血竭素的测定以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱。以440 nm作为检测波长,柱温40 ℃[1-3]。以乙腈-0.1%磷酸(25：75)为流动相；理论塔板数按血竭素峰计算应不低于4 000。
2.2 线性关系的考察
精密称取血竭素高氯酸盐对照品2.11 mg,置10 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液溶解,并稀释至刻度,摇匀,吸取上述对照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL,置于10 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液至刻度,摇匀。分别吸取不同浓度的对照品溶液,注入液相色谱仪,如法测定。以对照品浓度对峰面积进行线性回归,得回归方程：Y＝53 682.9X-683.1,r＝0.999 9。
2.3 空白对照试验
供试品溶液的制备：取本品5片(批号20061201),研细,取0.5 g,置具塞锥形瓶中,精密加入3%磷酸甲醇溶液50 mL,称重,超声处理5 min,称重,加3%磷酸甲醇溶液补充减失的重量,摇匀,滤过,续滤液置于棕色瓶中,即得。对照品溶液的制备：精密称取血竭素高氯酸盐对照品1.55 mg,置10 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液溶解并稀释至刻度,摇匀,再精密吸取1 mL,置25 mL棕色量瓶中,加3%磷酸甲醇溶液稀释至刻度,混匀,即得(血竭素＝血竭素高氯酸盐/1.377)。阴性对照溶液的制备：取阴性对照品(缺血竭),同供试品溶液的制法制成阴性对照溶液。吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20 μL,分别注入液相色谱仪,按确定的方法检测。结果供试品溶液在与对照品相同的保留时间处有相同的血竭素峰,而阴性对照品没有,说明测定的专属性好。
2.6 试验
取本品(批号20061203),按确定的方法测定血竭素的含量,共测定5次,结果血竭素的平均含量为0.371 2 mg/g,RSD＝1.8%,证明本法测定的重复性好,变异系数小,符合含量测定的要求。为了观察测定方法能否准确的测定出制剂中血竭素的含量,按确定的方法测定了样品中血竭素的含量,进行加样回收率试验。称取已知含量的制剂(批号20061202, 0.370 4 mg/g),研细,取约0.5 g,精密称定,共6份,置具塞锥形瓶中,分别精密加入血竭素高氯酸盐对照品溶液(0.050 6 mg/mL)5.0 mL、3%磷酸甲醇溶液45 mL,如法测定,计算血竭素的回收率,结果见表1。可知本测定方法的回收率高,符合含量测定的要求。取本品3批,每批样品取3份,分别按上述方法制得供试品溶液,按确定的方法测定样品中血竭素的含量,结果见表2。
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