不同时期连翘中连翘酯苷和连翘苷的含量不同-儿科医学论文
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1 材料
1.1 仪器与试剂
美国BECKMAN高效液相色谱仪,125型泵,168型PDA检测器,32Karat色谱工作站；HAMILTON微量进样器(HAMILTON公司)；微孔滤膜φ＝13 mm,0.45 μm(天津市色谱科学技术公司)；YCQ-300型超声波清洗器(上海凯波超声设备有限公司)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水并经0.45 μm水系滤膜过滤。
1.2 样品
连翘酯苷、连翘苷对照品均为自行分离精制,并经UV、IR、NMR鉴定结构,HPLC检测,面积归一化法计算纯度,均大于99%。选西安医学院种植的连翘和金钟花为样株 Vahl和F.viridissima Lindl.,果实具体采收时间见表1。50 ℃干燥至恒重后,研成粉末,过2O目筛,备用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Diamonsil-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)。流动相：A-水,B-甲醇；B相洗脱梯度：0～14 min,34.6%；14～15 min, 34.6%～43.5%；15～23 min,43.5%；23～24 min,43.5%～45%；24～34 min,45%；34～36 min,45%～80%；36～40 min,80%；流速：1 mL/min。柱温：室温28 ℃；灵敏度0.02 AUFS；检测波长270 nm。理论塔板数以连翘酯苷计应不低于3 300,以连翘苷计应不低于7 600。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取连翘酯苷和连翘苷对照品9.86、4.40 mg置于10 mL量瓶中,用60%甲醇定容至刻度,置于冰箱中(4 ℃)保存备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取不同采收期连翘、金钟花果实的干燥粉末各约1.000 g置于具塞三角瓶中,精确加入甲醇30 mL,精密称质量,超声提取30 min后,用甲醇补足质量,加20 mL双蒸水,混匀,用微孔滤膜(4.5 μm)过滤,作为供试品溶液。
2.4 标准曲线及线性范围的考察
精密吸取上述混合对照品溶液3、5、10、20、40、50 μL,进样测定,按上述色谱条件测定峰面积,按外标法以进样量X(μg)对峰面积Y进行回归,得连翘酯苷和连翘苷的回归方程,分别为：Y＝582 121X－816 019,r＝0.999 7；Y＝580 793X－33 182,r＝0.999 8。结果表明,连翘酯苷进样量在2.96～49.30 μg、连翘苷进样量在1.32～22.00 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 检测限和定量限测定
连翘酯苷的检测限(S/N＝3)为18.72 ng/mg,定量限(S/N＝10)为62.41 ng/mL；连翘苷的检测限(S/N＝3)为13.74 ng/mL,定量限(S/N＝10)为45.79 ng/mL。
2.6 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液20 μL,连续进样6次,测定峰面积,结果连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1.20%、1.04%。。取同一连翘果实(LQ-1)样品6份,制备供试品溶液,各取20 μL进样,测定峰面积,计算,连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为2.00%、0.68%。精密吸取混合对照品溶液20 μL分别于配制后的0、4、8、16、24、48 h内进样,测定峰面积。计算连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1.61%、1.96%。结果表明,对照品溶液在48 h内稳定。
2.7 样品中连翘酯苷、连翘苷的含量测定
取连翘各部位的干燥粉末,按供试品溶液制备方法操作,按照色谱条件测定峰面积,以外标法计算含量,采用二极管阵列检测器对检测波长进行了考察,分别提取并观察230、254、270、280、324、365 nm波长处的色谱图[4]。结果发现230、254、280 nm处其他物质的吸收较强,干扰较大,324、365 nm波长处干扰较小,但连翘苷无吸收,而270 nm处4个待检测物质的吸收峰峰形较好且其他物质的吸收较弱,干扰较少,结果较为准确。故本试验中选择了270 nm作为检测波长。
英文医学论文 http://www.qikanba.com/
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1.1 仪器与试剂
美国BECKMAN高效液相色谱仪,125型泵,168型PDA检测器,32Karat色谱工作站；HAMILTON微量进样器(HAMILTON公司)；微孔滤膜φ＝13 mm,0.45 μm(天津市色谱科学技术公司)；YCQ-300型超声波清洗器(上海凯波超声设备有限公司)。甲醇为色谱纯,水为双蒸水并经0.45 μm水系滤膜过滤。
1.2 样品
连翘酯苷、连翘苷对照品均为自行分离精制,并经UV、IR、NMR鉴定结构,HPLC检测,面积归一化法计算纯度,均大于99%。选西安医学院种植的连翘和金钟花为样株 Vahl和F.viridissima Lindl.,果实具体采收时间见表1。50 ℃干燥至恒重后,研成粉末,过2O目筛,备用。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱：Diamonsil-C18(5 μm,4.6 mm×250 mm)。流动相：A-水,B-甲醇；B相洗脱梯度：0～14 min,34.6%；14～15 min, 34.6%～43.5%；15～23 min,43.5%；23～24 min,43.5%～45%；24～34 min,45%；34～36 min,45%～80%；36～40 min,80%；流速：1 mL/min。柱温：室温28 ℃；灵敏度0.02 AUFS；检测波长270 nm。理论塔板数以连翘酯苷计应不低于3 300,以连翘苷计应不低于7 600。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取连翘酯苷和连翘苷对照品9.86、4.40 mg置于10 mL量瓶中,用60%甲醇定容至刻度,置于冰箱中(4 ℃)保存备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取不同采收期连翘、金钟花果实的干燥粉末各约1.000 g置于具塞三角瓶中,精确加入甲醇30 mL,精密称质量,超声提取30 min后,用甲醇补足质量,加20 mL双蒸水,混匀,用微孔滤膜(4.5 μm)过滤,作为供试品溶液。
2.4 标准曲线及线性范围的考察
精密吸取上述混合对照品溶液3、5、10、20、40、50 μL,进样测定,按上述色谱条件测定峰面积,按外标法以进样量X(μg)对峰面积Y进行回归,得连翘酯苷和连翘苷的回归方程,分别为：Y＝582 121X－816 019,r＝0.999 7；Y＝580 793X－33 182,r＝0.999 8。结果表明,连翘酯苷进样量在2.96～49.30 μg、连翘苷进样量在1.32～22.00 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 检测限和定量限测定
连翘酯苷的检测限(S/N＝3)为18.72 ng/mg,定量限(S/N＝10)为62.41 ng/mL；连翘苷的检测限(S/N＝3)为13.74 ng/mL,定量限(S/N＝10)为45.79 ng/mL。
2.6 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液20 μL,连续进样6次,测定峰面积,结果连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1.20%、1.04%。。取同一连翘果实(LQ-1)样品6份,制备供试品溶液,各取20 μL进样,测定峰面积,计算,连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为2.00%、0.68%。精密吸取混合对照品溶液20 μL分别于配制后的0、4、8、16、24、48 h内进样,测定峰面积。计算连翘酯苷、连翘苷的RSD分别为1.61%、1.96%。结果表明,对照品溶液在48 h内稳定。
2.7 样品中连翘酯苷、连翘苷的含量测定
取连翘各部位的干燥粉末,按供试品溶液制备方法操作,按照色谱条件测定峰面积,以外标法计算含量,采用二极管阵列检测器对检测波长进行了考察,分别提取并观察230、254、270、280、324、365 nm波长处的色谱图[4]。结果发现230、254、280 nm处其他物质的吸收较强,干扰较大,324、365 nm波长处干扰较小,但连翘苷无吸收,而270 nm处4个待检测物质的吸收峰峰形较好且其他物质的吸收较弱,干扰较少,结果较为准确。故本试验中选择了270 nm作为检测波长。
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