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甘草桂枝汤的药性成分实验测试-临床血液学杂志投稿

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  1  仪器与试药
  LC-10A型高效液相色谱仪(日本岛津公司);754紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);PHS-3C型精密PH计(上海雷磁仪器厂);FA1004型电子分析天平(上海第二分析仪器厂);LXV-Ⅱ型离心沉淀机(上海第二分析仪器厂);KQ-250E型医用超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);色谱柱:phenomenex ODS3(5 μm,4.6 mm×150mm);SPD-10Avp紫外检测器;RE-52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)。
  药材经鉴定,桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝,甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的干燥根及根茎。炙甘草:取炼蜜,加适量开水稀释后,淋入净甘草片中拌匀,闷润,置炒制容器内,用文火加热,炒至老黄色,不粘手时取出,放凉(每100 kg甘草用炼蜜25 kg)。
  甘草次酸、肉桂酸、柚皮苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号分别为723-200109、710-200011、722-200107);甲醇为色谱纯;水为三蒸水;其余试剂均为分析纯。
  2  方法与结果
  2.1  药材的组合方式
  将桂枝、甘草排列组合成2组,即单煎混合组和混煎组。混煎组为桂枝、甘草合煎;单煎混合组为桂枝、甘草分别单煎后合并2种浓缩液。
  2.5  甘草次酸含量测定
  2.5.1  色谱条件
  检测波长250 nm;柱温:35 ℃;灵敏度:1.0AUFS;流动相:甲醇-水(84∶16);流速:1.00 mL/min;进样量:20 μL。在上述色谱条件下,甘草次酸与其他成分可达到基线分离,分离度大于1.5,理论塔板数1 981。
  2.5.2  线性关系考察
  精取甘草次酸对照液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL,分别用无水乙醇定容至1 mL,各取20 μL进样,按“2.5.1”项下条件依法测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果甘草次酸在0.68~6.8 μg范围内,其质量(μg)与峰面积呈良好的线性关系,回归方程:Y=1.008 434×106X+104 180,r=0.999 2。
  2.6  肉桂酸含量测定
  2.6.1  色谱条件
  检测波长267 nm;柱温:35 ℃;灵敏度:1.0 AFUS;流动相:甲醇-0.1%磷酸(52∶48);流速:1.00 mL/min;进样量:20 μL。在上述色谱条件下,肉桂酸与甘草次酸均可达到基线分离,分离度大于1.5,理论塔板数2 778。
  2.6.2  线性关系考察
  精取肉桂酸对照液0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.0 mL,分别加甲醇定容至1 mL,各取20 μL进样,测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,结果肉桂酸在0.11~0.44 μg范围内,其质量(μg)与峰面积呈良好的线性关系,回归方程:Y=7.467 7×106X+123 315.29,r=0.999 8。
  2.7  总黄酮含量测定
  2.7.1  线性关系考察
  精取柚皮苷对照液0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mL,加入甲醇1 mL,再加入10%KOH溶液0.5 mL,室温放置5 min,用甲醇稀释并定容至10 mL,以甲醇作空白对照,在412 nm处测定吸收度。以浓度C(μg/mL)为横坐标,吸光度(A)为纵坐标,绘制标准曲线,结果总黄酮的线性范围为20~100 μg/mL,回归方程:A=0.052 17C-0.019 7,r=0.996 4。
  2.8  干浸膏得量测定
  精取“2.2”项下提取液各10 mL,分别置恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,烘至恒重,计算干浸膏得量,结果见表4。
  2.9  挥发油的含量测定
  按2005年版《中华人民共和国药典》(二部)附录XD挥发油测定法(甲法)[3]测定,结果见表5。
  2.10  HPLC指纹图谱比较
  2.10.1  色谱条件
  检测波长254 nm;柱温:35 ℃;灵敏度:1.0 AFUS;流动相:甲醇-0.1%磷酸;甲醇(5%)4 min,甲醇(28%)→甲醇(52%)11 min,甲醇(52%)→甲醇(84%)10 min,甲醇(84%)→甲醇(100%)10 min;流速:1.00 mL/min;进样量:20 μL。
临床外科杂志投稿     http://www.qikanba.com/
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