复方鳖甲软肝片对酒精性肝纤维化的治疗作用实验报告-陕西中医杂志投稿邮箱
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1 实验材料
1.1 动物
清洁级雄性Wistar大鼠40只,体重(200±10)g,购于北京维通利华公司,许可证号：SCXK2004～2005。
1.2主要药物及试剂
复方鳖甲软肝片由鳖甲、赤芍、冬虫夏草、三七、紫河车、连翘、当归、莪术、党参、黄芪和板蓝根组成,,用前以生理盐水溶解；安珐特。透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)及层粘连蛋白(LN)放免试剂盒购自北京北方生物技术研究所。TGF-β1兔抗多克隆抗体(Santa Cruz),辣根酶标记的羊抗兔二抗,DAB显色系统,均购自北京中山生物技术公司。
2 实验方法
2.1 分组及造模
将大鼠随机分成正常组、模型组、中药组和西药组,每组10只。模型组、中药组、西药组采用“白酒-吡唑-植物油”混合液灌胃法复制动物模型[1],每只大鼠灌胃白酒4.8 g/(kg·d)、吡唑24 mg/(kg·d)、玉米油2 mL/(kg·d)的混合液,灌胃16周。在灌胃白酒混合物的同时饲喂高脂饲料(基础饲料-胆固醇-猪大油＝79∶1∶20)。正常组每日用生理盐水灌胃,普通饲料喂养。
2.2 给药
中药组灌胃鳖甲软肝片,给药量0.54 g/(kg·d),西药组灌胃安珐特,给药量21.6 mg/(kg·d),2组均相当于人临床用量的5.4倍,均治疗4周。正常组及模型组每日灌胃2 mL生理盐水。
2.3 观测指标
造模16周后,正常组和模型组大鼠尾静脉采血,分离血清,用放免分析法测定血清中HA、LN及CⅣ含量。治疗4周后,正常组、模型组、中药组和西药组大鼠尾静脉采血,分离血清,测定血清中HA、LN及CⅣ含量。治疗4周后,取各组大鼠肝组织,常规石蜡包埋、切片、HE染色、光镜观察,TGF-β1免疫组化染色实验也采用该套石蜡块。
3 结果
本实验采用免疫组织化学染色方法检测了正常组、模型组、中药组及西药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白的表达情况,结果显示,正常组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白仅有少数散在肝细胞阳性表达；模型组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白肝细胞弥漫强阳性表达；中药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白部分肝细胞阳性表达；西药组中央静脉周围及肝小叶内较多肝细胞阳性表达。大鼠TGF-β1肝组织免疫组化染色结果初步显示,复方鳖甲软肝片和安珐特均能显著下调大鼠肝组织中TGF-β1蛋白含量,且复方鳖甲软肝片优于安珐特。
肝组织中的胶原经Mallory染色,光镜下呈蓝色。正常组大鼠肝组织中仅有少量胶原表达,肝细胞及汇管区、中央静脉及窦周围几乎不见胶原纤维；模型组大鼠肝组织内胶原水平显著提高,中央静脉及汇管区轻度纤维化；中药组及西药组大鼠肝血窦周围胶原明显减少,相邻血窦间的纤维联络基本消失。Mallory染色初步表明,复方鳖甲软肝片在降低肝组织胶原含量上疗效接近安珐特。
福建中医药杂志投稿 http://www.qikanba.com/
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1.1 动物
清洁级雄性Wistar大鼠40只,体重(200±10)g,购于北京维通利华公司,许可证号：SCXK2004～2005。
1.2主要药物及试剂
复方鳖甲软肝片由鳖甲、赤芍、冬虫夏草、三七、紫河车、连翘、当归、莪术、党参、黄芪和板蓝根组成,,用前以生理盐水溶解；安珐特。透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(CⅣ)及层粘连蛋白(LN)放免试剂盒购自北京北方生物技术研究所。TGF-β1兔抗多克隆抗体(Santa Cruz),辣根酶标记的羊抗兔二抗,DAB显色系统,均购自北京中山生物技术公司。
2 实验方法
2.1 分组及造模
将大鼠随机分成正常组、模型组、中药组和西药组,每组10只。模型组、中药组、西药组采用“白酒-吡唑-植物油”混合液灌胃法复制动物模型[1],每只大鼠灌胃白酒4.8 g/(kg·d)、吡唑24 mg/(kg·d)、玉米油2 mL/(kg·d)的混合液,灌胃16周。在灌胃白酒混合物的同时饲喂高脂饲料(基础饲料-胆固醇-猪大油＝79∶1∶20)。正常组每日用生理盐水灌胃,普通饲料喂养。
2.2 给药
中药组灌胃鳖甲软肝片,给药量0.54 g/(kg·d),西药组灌胃安珐特,给药量21.6 mg/(kg·d),2组均相当于人临床用量的5.4倍,均治疗4周。正常组及模型组每日灌胃2 mL生理盐水。
2.3 观测指标
造模16周后,正常组和模型组大鼠尾静脉采血,分离血清,用放免分析法测定血清中HA、LN及CⅣ含量。治疗4周后,正常组、模型组、中药组和西药组大鼠尾静脉采血,分离血清,测定血清中HA、LN及CⅣ含量。治疗4周后,取各组大鼠肝组织,常规石蜡包埋、切片、HE染色、光镜观察,TGF-β1免疫组化染色实验也采用该套石蜡块。
3 结果
本实验采用免疫组织化学染色方法检测了正常组、模型组、中药组及西药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白的表达情况,结果显示,正常组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白仅有少数散在肝细胞阳性表达；模型组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白肝细胞弥漫强阳性表达；中药组大鼠肝组织中TGF-β1蛋白部分肝细胞阳性表达；西药组中央静脉周围及肝小叶内较多肝细胞阳性表达。大鼠TGF-β1肝组织免疫组化染色结果初步显示,复方鳖甲软肝片和安珐特均能显著下调大鼠肝组织中TGF-β1蛋白含量,且复方鳖甲软肝片优于安珐特。
肝组织中的胶原经Mallory染色,光镜下呈蓝色。正常组大鼠肝组织中仅有少量胶原表达,肝细胞及汇管区、中央静脉及窦周围几乎不见胶原纤维；模型组大鼠肝组织内胶原水平显著提高,中央静脉及汇管区轻度纤维化；中药组及西药组大鼠肝血窦周围胶原明显减少,相邻血窦间的纤维联络基本消失。Mallory染色初步表明,复方鳖甲软肝片在降低肝组织胶原含量上疗效接近安珐特。
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