香豆素、基原秦皮抗菌作用的机制原理论述-当代护士杂志在线投稿
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1 实验材料
1.1 药物
4种基原秦皮：苦枥白蜡树、尖叶白蜡树、白蜡树、宿柱白蜡树树皮提取物；5种香豆素单体：秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素、6,7-二甲基-8-羟基香豆素(均为自制,纯度＞98%)；以苦枥白蜡树为代表的秦皮提取物,5种香豆素单体混合物(按苦枥白蜡树提取物中各单体含量：秦皮甲素2.08%、秦皮乙素0.14%、秦皮苷0.84%、秦皮素0.37%、6,7-二甲基-8-羟基香豆素0.03%混合而成)；苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品,未知成分指纹区样品。上述样品以DMSO溶解,实验前配制。
1.2 试剂及培养基
注射用硫酸链霉素(批号050312)、注射用青霉素钠(批号U204063),均为华北制药股份有限公司。营养肉汤(批号980110)、营养琼脂(批号990330),北京海淀区微生物培养基制品厂。
1.3 菌种
标准株：金黄色葡萄球菌(26112)、乙型(B)溶血性链球菌(32310)、绿脓杆菌(10211)、大肠杆菌(4413)、沙门氏杆菌(50094-14)，由北京生物制品检定所提供。临床分离株：表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性链球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、卡他菌由中国中医科学院中药所提供。
2 方法
2.1 菌液制备
每种菌以接种环挑取同类型菌落2～3个,接种于营养肉汤内,35 ℃孵育16～18 h后,以无菌营养肉汤校正浓度达3.0 亿/mL左右,再以营养肉汤稀释,使菌浓度为300～3 000个/mL。
2.2 最小抑菌浓度测定
参考文献[3]方法,受试样品加入96孔圆底培养板中,每孔0.1 mL。每个样品设8个浓度,苦枥白蜡树树皮、尖叶白蜡树树皮、白蜡树树皮、宿柱白蜡树树皮、苦枥白蜡树树皮提取物、5种香豆素单体混合物、苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品及未知成分指纹区样品终浓度分别为250、100、40、16、6.4、2.56、1.02、0.409 mg原药材/mL；秦皮中5种香豆素类单体终浓度分别为5 000、2 000、800、320、128、51.2、20.48、8.19 μg/mL,然后接种稀释菌液0.1 mL/孔。同时设定溶剂对照、细菌对照、培养基对照,设定青霉素或链霉素为阳性对照,以微量振荡器混匀后,置37 ℃温孵24 h,在黑色背景下观察判断结果。有细菌生长孔呈现混浊,未见混浊则为无细菌生长,以无细菌生长的药物最小浓度作为该药对该试验菌的最小抑菌浓度(MIC)。
2.3 最低杀菌浓度测定
从以上无细菌生长培养板各孔中,分别取出0.1 mL药液移种于无菌琼脂平板上,均匀涂布,置37 ℃孵育箱中孵育24 h,结果,以菌落数＜5 CFU/mL的最低含药浓度为最低杀菌浓度(MBC)。
2.4 体外抑菌、杀菌活性强度评价方法
以MIC/MBC值＞250 mg原药材/mL或5 000 μg/mL为0分, MIC/MBC值＝250 mg原药材/mL或5 000 μg/mL为1分,MIC/MBC值＝100 mg原药材/mL或2 000 μg/mL为2分,MIC/MBC值＝40 mg原药材/mL或800 μg/mL为3分,MIC/MBC值＝16 mg原药材/mL或320 μg/mL为4分,MIC/MBC值＝6.4 mg原药材/mL或128 μg/mL为5分,MIC/MBC值＝2.56 mg原药材/mL或51.2 μg/mL为6分, MIC/MBC值＝1.02 mg原药材/mL或20.48 μg/mL为7分, MIC/MBC值＝0.409 6 mg原药材/mL或8.19 μg/mL为8分。抑菌总积分＝各菌株MIC/MBC积分之和。
3 结果
5种香豆素单体抗菌作用的对比,资料报道秦皮乙素为其抗菌主要有效成分,对金黄色葡萄球菌、卡他球菌、大肠杆菌等均有抑菌作用,秦皮甲素对金黄色葡萄球菌等也有一定抑菌作用[3]。本试验结果表明,秦皮素、秦皮乙素抑菌杀菌活性最强,秦皮甲素、秦皮苷、6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素有一定抑菌作用,其抑菌谱为：金黄色葡萄球菌、乙型(B)溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌、表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性链球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、卡他球菌。5种香豆素单体抑菌活性大小排序为：秦皮素＞秦皮乙素＞秦皮苷＞秦皮甲素＞6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素。总的看来,秦皮中苷元的抑菌作用优于苷,抑菌谱较广。
4种基原秦皮抗菌作用的对比,秦皮煎剂对多种致病菌均有不同程度的抑制效果[3]。本试验结果表明,4种基原秦皮苦枥白蜡树树皮、尖叶白蜡树树皮、白蜡树树皮、宿柱白蜡树树皮提取物对所试菌株均有较强的抑菌、杀菌作用,抑菌谱为：金黄色葡萄球菌、乙型(B)溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌、表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性链球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、卡他球菌。按照抑菌总积分,抑菌强度由大到小排序依次为：宿柱白腊树＞苦枥白腊树＞尖叶白腊树＞白腊树。抑菌强弱顺序与香豆素总和基本相同,表明秦皮的抑菌强弱与已知香豆素成分含量基本成正比。但各品种已知香豆素的含量随产地、采集时间是有变化的,所以不能说秦皮哪一个品种一定比其他品种好,只能说已知香豆素含量高的抑菌效果更好。由此得出结论,秦皮中香豆素含量越高,抑菌效果更好。
当代护士投稿邮箱 http://www.qikanba.com/
1 实验材料
1.1 药物
4种基原秦皮：苦枥白蜡树、尖叶白蜡树、白蜡树、宿柱白蜡树树皮提取物；5种香豆素单体：秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷、秦皮素、6,7-二甲基-8-羟基香豆素(均为自制,纯度＞98%)；以苦枥白蜡树为代表的秦皮提取物,5种香豆素单体混合物(按苦枥白蜡树提取物中各单体含量：秦皮甲素2.08%、秦皮乙素0.14%、秦皮苷0.84%、秦皮素0.37%、6,7-二甲基-8-羟基香豆素0.03%混合而成)；苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品,未知成分指纹区样品。上述样品以DMSO溶解,实验前配制。
1.2 试剂及培养基
注射用硫酸链霉素(批号050312)、注射用青霉素钠(批号U204063),均为华北制药股份有限公司。营养肉汤(批号980110)、营养琼脂(批号990330),北京海淀区微生物培养基制品厂。
1.3 菌种
标准株：金黄色葡萄球菌(26112)、乙型(B)溶血性链球菌(32310)、绿脓杆菌(10211)、大肠杆菌(4413)、沙门氏杆菌(50094-14)，由北京生物制品检定所提供。临床分离株：表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性链球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、卡他菌由中国中医科学院中药所提供。
2 方法
2.1 菌液制备
每种菌以接种环挑取同类型菌落2～3个,接种于营养肉汤内,35 ℃孵育16～18 h后,以无菌营养肉汤校正浓度达3.0 亿/mL左右,再以营养肉汤稀释,使菌浓度为300～3 000个/mL。
2.2 最小抑菌浓度测定
参考文献[3]方法,受试样品加入96孔圆底培养板中,每孔0.1 mL。每个样品设8个浓度,苦枥白蜡树树皮、尖叶白蜡树树皮、白蜡树树皮、宿柱白蜡树树皮、苦枥白蜡树树皮提取物、5种香豆素单体混合物、苦枥白蜡树已知香豆素指纹区样品及未知成分指纹区样品终浓度分别为250、100、40、16、6.4、2.56、1.02、0.409 mg原药材/mL；秦皮中5种香豆素类单体终浓度分别为5 000、2 000、800、320、128、51.2、20.48、8.19 μg/mL,然后接种稀释菌液0.1 mL/孔。同时设定溶剂对照、细菌对照、培养基对照,设定青霉素或链霉素为阳性对照,以微量振荡器混匀后,置37 ℃温孵24 h,在黑色背景下观察判断结果。有细菌生长孔呈现混浊,未见混浊则为无细菌生长,以无细菌生长的药物最小浓度作为该药对该试验菌的最小抑菌浓度(MIC)。
2.3 最低杀菌浓度测定
从以上无细菌生长培养板各孔中,分别取出0.1 mL药液移种于无菌琼脂平板上,均匀涂布,置37 ℃孵育箱中孵育24 h,结果,以菌落数＜5 CFU/mL的最低含药浓度为最低杀菌浓度(MBC)。
2.4 体外抑菌、杀菌活性强度评价方法
以MIC/MBC值＞250 mg原药材/mL或5 000 μg/mL为0分, MIC/MBC值＝250 mg原药材/mL或5 000 μg/mL为1分,MIC/MBC值＝100 mg原药材/mL或2 000 μg/mL为2分,MIC/MBC值＝40 mg原药材/mL或800 μg/mL为3分,MIC/MBC值＝16 mg原药材/mL或320 μg/mL为4分,MIC/MBC值＝6.4 mg原药材/mL或128 μg/mL为5分,MIC/MBC值＝2.56 mg原药材/mL或51.2 μg/mL为6分, MIC/MBC值＝1.02 mg原药材/mL或20.48 μg/mL为7分, MIC/MBC值＝0.409 6 mg原药材/mL或8.19 μg/mL为8分。抑菌总积分＝各菌株MIC/MBC积分之和。
3 结果
5种香豆素单体抗菌作用的对比,资料报道秦皮乙素为其抗菌主要有效成分,对金黄色葡萄球菌、卡他球菌、大肠杆菌等均有抑菌作用,秦皮甲素对金黄色葡萄球菌等也有一定抑菌作用[3]。本试验结果表明,秦皮素、秦皮乙素抑菌杀菌活性最强,秦皮甲素、秦皮苷、6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素有一定抑菌作用,其抑菌谱为：金黄色葡萄球菌、乙型(B)溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌、表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性链球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、卡他球菌。5种香豆素单体抑菌活性大小排序为：秦皮素＞秦皮乙素＞秦皮苷＞秦皮甲素＞6,7-二甲氧基-8-羟基香豆素。总的看来,秦皮中苷元的抑菌作用优于苷,抑菌谱较广。
4种基原秦皮抗菌作用的对比,秦皮煎剂对多种致病菌均有不同程度的抑制效果[3]。本试验结果表明,4种基原秦皮苦枥白蜡树树皮、尖叶白蜡树树皮、白蜡树树皮、宿柱白蜡树树皮提取物对所试菌株均有较强的抑菌、杀菌作用,抑菌谱为：金黄色葡萄球菌、乙型(B)溶血性链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌、表皮葡萄球菌、甲型(A)溶血性链球菌、肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种、卡他球菌。按照抑菌总积分,抑菌强度由大到小排序依次为：宿柱白腊树＞苦枥白腊树＞尖叶白腊树＞白腊树。抑菌强弱顺序与香豆素总和基本相同,表明秦皮的抑菌强弱与已知香豆素成分含量基本成正比。但各品种已知香豆素的含量随产地、采集时间是有变化的,所以不能说秦皮哪一个品种一定比其他品种好,只能说已知香豆素含量高的抑菌效果更好。由此得出结论,秦皮中香豆素含量越高,抑菌效果更好。
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