鹿蹄草中槲皮素含量的测定实验-四川中医投稿须知
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1 仪器与试药
Agilent1200系列高效液相色谱仪（包括四元泵，自动进样器，脱气机，紫外可见检测器，柱温箱）。鹿蹄草；槲皮素对照品。水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm,5 μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（50∶50）；流速：1.0 mL/min；检测波长：370 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含槲皮素46 μg的溶液，作为对照品溶液。取鹿蹄草粉末适量，取0.5 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-10%盐酸（3∶1）的混合溶液50 mL,称定重量，回流1 h,放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取槲皮素对照品溶液（46 μg/mL）2、4、6、8、10 mL,置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样10 μL,连续进样2次，测定峰面积。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y＝5.328 7×102X－0.200 9,r＝0.999 9,在0.092～0.46 μg范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
取槲皮素对照品溶液，各重复进样6次，测定峰面积，结果槲皮素峰面积RSD＝0.58%。取同一批的样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定鹿蹄草中槲皮素含量，结果RSD＝0.82%。取同一供试品溶液，分别于配制后0、4、8、12 h依法测定峰面积，结果RSD＝0.56%,表明样品溶液在12 h内基本稳定。
鹿蹄草的干燥全草，习称鹿衔草，其性温、味甘苦，具有祛风湿、强筋骨、止血之功效，用于风湿痹痛、腰膝无力、月经过多、久咳劳嗽[1]。现代药理研究表明，该药具有明显的抗菌、抗炎、促进免疫、改善冠心病症状等作用[2]。其主要含有鹿蹄草素、槲皮素等成分。本试验采用HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量。在色谱条件摸索时，发现流动相pH值对色谱峰的峰形及分离度影响很大，比较甲醇与不同浓度的磷酸溶液等多种溶剂系统，确定流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（50∶50），得到的色谱峰峰形及分离度较好，并且基线稳定。
中医杂志投稿须知 http://www.qikanba.com/
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Agilent1200系列高效液相色谱仪（包括四元泵，自动进样器，脱气机，紫外可见检测器，柱温箱）。鹿蹄草；槲皮素对照品。水为重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18（4.6 mm×150 mm,5 μm）；流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（50∶50）；流速：1.0 mL/min；检测波长：370 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含槲皮素46 μg的溶液，作为对照品溶液。取鹿蹄草粉末适量，取0.5 g,精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-10%盐酸（3∶1）的混合溶液50 mL,称定重量，回流1 h,放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.3 线性关系考察
分别精密吸取槲皮素对照品溶液（46 μg/mL）2、4、6、8、10 mL,置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各进样10 μL,连续进样2次，测定峰面积。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y＝5.328 7×102X－0.200 9,r＝0.999 9,在0.092～0.46 μg范围内呈良好的线性关系。
2.4 精密度试验
取槲皮素对照品溶液，各重复进样6次，测定峰面积，结果槲皮素峰面积RSD＝0.58%。取同一批的样品6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定鹿蹄草中槲皮素含量，结果RSD＝0.82%。取同一供试品溶液，分别于配制后0、4、8、12 h依法测定峰面积，结果RSD＝0.56%,表明样品溶液在12 h内基本稳定。
鹿蹄草的干燥全草，习称鹿衔草，其性温、味甘苦，具有祛风湿、强筋骨、止血之功效，用于风湿痹痛、腰膝无力、月经过多、久咳劳嗽[1]。现代药理研究表明，该药具有明显的抗菌、抗炎、促进免疫、改善冠心病症状等作用[2]。其主要含有鹿蹄草素、槲皮素等成分。本试验采用HPLC法测定鹿蹄草中槲皮素的含量。在色谱条件摸索时，发现流动相pH值对色谱峰的峰形及分离度影响很大，比较甲醇与不同浓度的磷酸溶液等多种溶剂系统，确定流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（50∶50），得到的色谱峰峰形及分离度较好，并且基线稳定。
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