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免疫胶体金标记技术在实际中的运用-康复治疗技术毕业论文

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免疫胶体金标记技术的逐步发展使其在免疫检测等许多领域已得到越来越多的应用。Wino等[21]分别制备核定位信号NLS1及NLS2抗体,电镜检测两种金标抗体在A流感病毒vRNP结构中的位点,以了解二者运输vRNP中的不同作用。检测结果显示: 71%的vRNPS上检测到NLS1抗体,低于10% vRNPS上检测到NLS2抗体。Jiang等[22]结合微阵列技术与免疫金标记技术检测弓形虫感染、风疹、巨细胞病毒、泡疹(TORCH)对妊娠期妇女及胎儿危害极大的病毒IgM抗体,检出限达0.24 mg/L,操作方便。在肿瘤诊断方面应用胶体金免疫电镜技术结合生物体视学和图像分析技术,探讨良恶性肿瘤和癌前病变病理形态的定量诊断方法,使诊断的正确率明显提高。
  在检测疾病相关蛋白方面,Guo等[25]综合低密度蛋白阵列、银离子增强及双单克隆抗体夹心法对心肌钙蛋白I(cTnI)进行免疫检测,灵敏度接近ELISA,并节省大量时间。Cho等[26]优化固相载体及抗体孵化条件,用5 nm胶体金颗粒标记cTnI单克隆抗体,银离子增强检测效果后比常规快速检测方法灵敏度提高近51倍。Hu等[27]研究了在单纳米颗粒模式下,用电感耦合等离子质谱技术(ICPMS)检测微孔板中15 nm金颗粒标记的甲胎蛋白抗体,检出限达0.016 μg/L。检测寄生虫方面也有报道[28],激素类及血、尿药物浓度等免疫检测项目国内外有商品化胶体金试纸条或试剂盒供应。
  由于胶体金具有肉眼可观测的红色,所以既可用于免疫电镜、光镜检测,又能作为指示物结合固相载体用于体外免疫检测抗原或抗体的存在。在检测病原微生物方面,Kalvatchev[23]最早利用胶体金标记的抗立克次体的多克隆抗体、单克隆抗体及IgY来检测标本中的斑点热群立克次体。Zhou等[24]用胶体金标记的猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)蛋白M及蛋白N单克隆抗体,在硝酸纤维素膜上与二抗构造夹心结构检测PRRSV,检出限可达7.8×103~1.6×104 TCID50/mL。
  早期免疫胶体金标记技术主要应用于光学显微镜观察细胞表面抗原进行组化研究,但因灵敏度低而受到限制。IGSS创立以后免疫金标记技术得到了广泛应用。目前,免疫胶体金标记技术在组化中的应用已日趋普遍,胶体金探针的种类也越来越多。由于胶体金的高电子密度使其在电镜下清晰可辨,因此该技术进一步在电镜上使用,由对组织细胞定位研究,进一步深入到了基因转录水平、基因表达的检测、染色体的基因定位、特定核酸序列在细胞内的空间分布分析及核酸复制过程中的定性与定量分析等。
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