1HPLC法测定醇提物中姜黄素含量实验分析-动物医学本科毕业论文
动物医学本科毕业论文 医学本科论文 医学毕业论文 护理学论文发表
1材料
1.1药物
姜黄（批号080401D510，四川）与生姜（购自农贸市场）经广州中医药大学青蒿研究中心朱宇同教授鉴定，分别为姜科植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎与姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鲜根茎；姜黄素对照品（自制），经HPLC法测定纯度为98.6%;己烯雌酚注射液（2 mg/mL，批号080605，上海通用药业股份有限公司）。
1.2动物
SD大鼠，雄性，体质量45～55 g，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供。实验动物质量合格证号0046490，许可证号：SCXK（粤）2008-0002，粤监证字2008A020。
1.3仪器
LC-10A高效液相色谱仪，SPD-M10Avp光二极管阵列检测器（日本岛津公司）；Olympus全自动生化分析仪（AU5421，日本奥林巴斯公司），由南方医院检验科提供；Startorius（BS224S）万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.4实验方法
1.4.1醇提物的制备及含量测定参考文献[5-9]制备姜黄生姜提取物。取姜黄、生姜各500 g粉碎，混合均匀，加生药3倍量的70%（φ）乙醇回流2次，时间分别为1.5 h、1.0 h，过滤，合并滤液，回收，浓缩制成干膏（每克干膏相当于姜黄或生姜均为5 4 g），以HPLC法对有效成分姜黄素进行定量。
2结果
2.1HPLC法测定醇提物中姜黄素的含量
2.1.2流动相的选择
取姜黄素对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以不同比例的流动相进样，最终确定乙腈-4%（φ）冰醋酸溶液比例为60∶40，在该条件下姜黄素的峰形较佳。
2.1.3λmax的选择
利用二极管阵列检测器在190～370 nm范围内对姜黄素对照品溶液进行扫描，结果在263 nm处具有最大吸收，故以263 nm为检测波长。精密量取姜黄素对照品溶液（0.100 9 mg/mL）3、6、9、12、15、18 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以姜黄素色谱峰峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制曲线，得回归方程为：Y=2575560X-51928.7，相关系数r2为0.999 909，表明姜黄素在0.3～1.8 μg范围内线性关系良好。
2.1.5精密度试验
精密量取上述对照品溶液（0.100 9 mg/mL），连续进样5次，每次10 μL，记录色谱图，计算得姜黄素峰面积的平均值为2486170，RSD=0.5%（n=5），表明测定的精密度良好。
2.1.6稳定性试验取姜黄素对照品加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，以0.45 μm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液；另取醇提物约0.03 g，精密称定，置25 mL量瓶，加甲醇适量超声溶解，放冷、定容、滤过，再以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取上述供试品溶液各10 μL分别在0、3、6、9、12 h注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各时间点的含量及RSD（%），结果得姜黄素平均含量为7.4%，RSD=1.9%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.1.7回收试验取姜黄素对照品适量，加甲醇制成约1.25 mg/mL的溶液，作为姜黄素对照品贮备液。取贮备液适量加甲醇稀释成含姜黄素0.1 mg/mL的溶液，以0.45 μm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液；另取醇提物约0.02 g，共5份，精密称定，置25 mL容量瓶， 分别精密加入上述对照品贮备液1 mL，加甲醇适量，超声溶解，放冷、定容、滤过，滤液再以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取对照品溶液及供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算各供试品溶液中姜黄素的回收率（%）及RSD（%），结果得平均回收率为100.7%，RSD为1.1%。
2.1.8重复性试验取醇提物约0.03 g，精密称定，置25 mL量瓶，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，吸取滤液适量以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算姜黄素的含量。结果RSD为1.4%，表明测定的重复性良好。
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1.1药物
姜黄（批号080401D510，四川）与生姜（购自农贸市场）经广州中医药大学青蒿研究中心朱宇同教授鉴定，分别为姜科植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎与姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.的新鲜根茎；姜黄素对照品（自制），经HPLC法测定纯度为98.6%;己烯雌酚注射液（2 mg/mL，批号080605，上海通用药业股份有限公司）。
1.2动物
SD大鼠，雄性，体质量45～55 g，SPF级，由广东省医学实验动物中心提供。实验动物质量合格证号0046490，许可证号：SCXK（粤）2008-0002，粤监证字2008A020。
1.3仪器
LC-10A高效液相色谱仪，SPD-M10Avp光二极管阵列检测器（日本岛津公司）；Olympus全自动生化分析仪（AU5421，日本奥林巴斯公司），由南方医院检验科提供；Startorius（BS224S）万分之一电子天平（德国赛多利斯公司）。
1.4实验方法
1.4.1醇提物的制备及含量测定参考文献[5-9]制备姜黄生姜提取物。取姜黄、生姜各500 g粉碎，混合均匀，加生药3倍量的70%（φ）乙醇回流2次，时间分别为1.5 h、1.0 h，过滤，合并滤液，回收，浓缩制成干膏（每克干膏相当于姜黄或生姜均为5 4 g），以HPLC法对有效成分姜黄素进行定量。
2结果
2.1HPLC法测定醇提物中姜黄素的含量
2.1.2流动相的选择
取姜黄素对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以不同比例的流动相进样，最终确定乙腈-4%（φ）冰醋酸溶液比例为60∶40，在该条件下姜黄素的峰形较佳。
2.1.3λmax的选择
利用二极管阵列检测器在190～370 nm范围内对姜黄素对照品溶液进行扫描，结果在263 nm处具有最大吸收，故以263 nm为检测波长。精密量取姜黄素对照品溶液（0.100 9 mg/mL）3、6、9、12、15、18 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以姜黄素色谱峰峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制曲线，得回归方程为：Y=2575560X-51928.7，相关系数r2为0.999 909，表明姜黄素在0.3～1.8 μg范围内线性关系良好。
2.1.5精密度试验
精密量取上述对照品溶液（0.100 9 mg/mL），连续进样5次，每次10 μL，记录色谱图，计算得姜黄素峰面积的平均值为2486170，RSD=0.5%（n=5），表明测定的精密度良好。
2.1.6稳定性试验取姜黄素对照品加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，以0.45 μm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液；另取醇提物约0.03 g，精密称定，置25 mL量瓶，加甲醇适量超声溶解，放冷、定容、滤过，再以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取上述供试品溶液各10 μL分别在0、3、6、9、12 h注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各时间点的含量及RSD（%），结果得姜黄素平均含量为7.4%，RSD=1.9%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.1.7回收试验取姜黄素对照品适量，加甲醇制成约1.25 mg/mL的溶液，作为姜黄素对照品贮备液。取贮备液适量加甲醇稀释成含姜黄素0.1 mg/mL的溶液，以0.45 μm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液；另取醇提物约0.02 g，共5份，精密称定，置25 mL容量瓶， 分别精密加入上述对照品贮备液1 mL，加甲醇适量，超声溶解，放冷、定容、滤过，滤液再以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取对照品溶液及供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算各供试品溶液中姜黄素的回收率（%）及RSD（%），结果得平均回收率为100.7%，RSD为1.1%。
2.1.8重复性试验取醇提物约0.03 g，精密称定，置25 mL量瓶，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，吸取滤液适量以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取上述对照品溶液和供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算姜黄素的含量。结果RSD为1.4%，表明测定的重复性良好。
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