杜鹃花叶片中有效药性成分的提取质量控制-口腔医学本科的论文
口腔医学本科的论文 口腔医学论文 口腔护理论文发表 医学护理论文
杜鹃花叶片中的蛋白质、多糖、多酚等次生物质含量多且复杂，严重影响了其RNA的提取质量，从而给此类植物的基因工程研究带来了诸多阻碍。由于多糖类胶状物质会严重堵塞过滤柱，所以即使使用商业提取试剂盒也不能得到高质量的RNA；另外，这类次生代谢物含量多的材料，市售的RNA提取试剂的针对性也不强，不仅操作麻烦费时，而且很难同时解决RNA的质量和得率问题。虽然目前已建立了很多针对富含多糖多酚材料的RNA提取方法［1～5］，但还没有以杜鹃花为材料提取RNA的报道。
杜鹃花 hsp70基因cDNA 核心片段的扩增采用简并引物C1和C2进行巢式PCR第1轮扩增仅得到模糊的条带，进一步采用内侧锚定简并引物D1和D2进行巢式PCR的第2轮扩增到1条约350 bp的DNA片段，与预计的目的片段相似（见图3）。回收后克隆至pMD18-T载体（TaKaRa），转化感受态DH5α，利用D1、D2引物，将通过菌落PCR反应检测得到阳性克隆进行测序，得到366bp的cDNA片段。测序后通过NCBI上的BLAST工具分析，证实为hsp70基因序列。
RNA plant试剂对于杜鹃花这种多酚，多糖含量都很高的材料，效果一般，可能多糖形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来［7］。本实验所用的药品、试剂都较为常用，采用该方法能在一天内完成RNA的提取工作，并得到质量很高的产品，相比购买市售的RNA提取试剂盒或传统CTAB法，具有花费少、易操作、耗时短、成效高的优点。
近年来已有关于去除植物组织多糖和酚类物质的相关报道，但不同植物或同一植物的不同品种往往因种属差异，材料组织内多糖或多酚的组分和含量有很大不同，所以需要采用不同的RNA提取方法。有研究表明，在高浓度Na+或K+的存在条件下，通过氯仿抽提可以去除一些多糖，经过本实验确定，与高浓度的KAc相比，高浓度的NaCl去除样品中多糖的效果更好，从而建立了有效提取样品RNA的方案。与传统CTAB法相比，本实验减少了用LiCl选择性沉淀RNA过夜的步骤，改为分级去除杂质，节省了试验时间，有利于减少RNA的降解和损耗，提高了样品的质量。
能否有效抑制RNase，去除多糖、酚叶片中含有大量的多酚，多糖，对RNA的提取方法提出了更高的要求。本实验采用CTAB（十六烷基溴化三甲胺）裂解植物材料，与细胞中的核酸形成核酸-CTAB复合体，这类复合物沉淀的时候将蛋白、多糖、色素以及多酚类化合物与核酸分离开来。利用水饱和酚可以部分去除DNA，获得DNA残留极少的RNA，减少DNA污染；同时，由于水饱和酚的加入，提高了去除蛋白质的效率，使得氯仿抽提次数在提取过程中减少，本实验中只需再进行一次氯仿：异戊醇抽提，就能使有机相与水相的界面清亮，彻底去除蛋白，避免了反复操作。
口腔根管治疗论文 http://www.qikanba.com/
杜鹃花叶片中的蛋白质、多糖、多酚等次生物质含量多且复杂，严重影响了其RNA的提取质量，从而给此类植物的基因工程研究带来了诸多阻碍。由于多糖类胶状物质会严重堵塞过滤柱，所以即使使用商业提取试剂盒也不能得到高质量的RNA；另外，这类次生代谢物含量多的材料，市售的RNA提取试剂的针对性也不强，不仅操作麻烦费时，而且很难同时解决RNA的质量和得率问题。虽然目前已建立了很多针对富含多糖多酚材料的RNA提取方法［1～5］，但还没有以杜鹃花为材料提取RNA的报道。
杜鹃花 hsp70基因cDNA 核心片段的扩增采用简并引物C1和C2进行巢式PCR第1轮扩增仅得到模糊的条带，进一步采用内侧锚定简并引物D1和D2进行巢式PCR的第2轮扩增到1条约350 bp的DNA片段，与预计的目的片段相似（见图3）。回收后克隆至pMD18-T载体（TaKaRa），转化感受态DH5α，利用D1、D2引物，将通过菌落PCR反应检测得到阳性克隆进行测序，得到366bp的cDNA片段。测序后通过NCBI上的BLAST工具分析，证实为hsp70基因序列。
RNA plant试剂对于杜鹃花这种多酚，多糖含量都很高的材料，效果一般，可能多糖形成难溶的胶状物，与RNA共沉淀下来［7］。本实验所用的药品、试剂都较为常用，采用该方法能在一天内完成RNA的提取工作，并得到质量很高的产品，相比购买市售的RNA提取试剂盒或传统CTAB法，具有花费少、易操作、耗时短、成效高的优点。
近年来已有关于去除植物组织多糖和酚类物质的相关报道，但不同植物或同一植物的不同品种往往因种属差异，材料组织内多糖或多酚的组分和含量有很大不同，所以需要采用不同的RNA提取方法。有研究表明，在高浓度Na+或K+的存在条件下，通过氯仿抽提可以去除一些多糖，经过本实验确定，与高浓度的KAc相比，高浓度的NaCl去除样品中多糖的效果更好，从而建立了有效提取样品RNA的方案。与传统CTAB法相比，本实验减少了用LiCl选择性沉淀RNA过夜的步骤，改为分级去除杂质，节省了试验时间，有利于减少RNA的降解和损耗，提高了样品的质量。
能否有效抑制RNase，去除多糖、酚叶片中含有大量的多酚，多糖，对RNA的提取方法提出了更高的要求。本实验采用CTAB（十六烷基溴化三甲胺）裂解植物材料，与细胞中的核酸形成核酸-CTAB复合体，这类复合物沉淀的时候将蛋白、多糖、色素以及多酚类化合物与核酸分离开来。利用水饱和酚可以部分去除DNA，获得DNA残留极少的RNA，减少DNA污染；同时，由于水饱和酚的加入，提高了去除蛋白质的效率，使得氯仿抽提次数在提取过程中减少，本实验中只需再进行一次氯仿：异戊醇抽提，就能使有机相与水相的界面清亮，彻底去除蛋白，避免了反复操作。
口腔根管治疗论文 http://www.qikanba.com/
我要分享到：
最新文章NEWS
- • 高职生道德信仰调查 本文版权由期刊吧所有
- • 医学论文中的统计问题
- • 医学论文投稿秘籍
- • 医学论文写作的程序介绍
- • 医学论文摘要的书写过程中存在的问题
- • 叙述医学研究论文标引用词的选择
- • 医学论文写作五大妙招
- • 如何进行儿科临床科学研究选题
- • 医学论文写作的流程
- • 医学论文统计设计方面存在问题总结
推荐期刊Tui Jian
Chinese Journal of Integrative Medicine
Journal of Genetics and Genomics
Journal of Bionic Engineering
Pedosphere
Chinese Journal of Structural Chemistry