白毛夏枯草的免疫调节作用实验分析-口腔毕业论文范文
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1 材料与仪器
1.1 动物及分组
健康昆明种小鼠120只，体质量（20±2）g,雌雄不分，贵阳医学院实验动物中心提供，合格号为SCXK（黔）2002-0001。随机将小鼠分为4组，即复方白毛夏枯草大剂量组、中剂量组、小剂量和生理盐水对照组，每组30只，雌雄分笼饲养。
1.2 仪器与试剂
USA3131型CO2培养箱（美国热电），EIX808U型全自动酶标仪（美国BioTek）、BSC1800-Ⅱ-A/B3型生物安全柜（上海瑞仰），小鼠IgG、IgM酶联免疫试剂盒；四甲基偶氮唑盐（MTT）（ Phamacia 公司），植物血凝素（PHA）（Sigma 公司），RPMI-1640营养液（Serva 公司），中性红（Amresco 公司） ,兔抗羊红细胞抗体（A）（河南知微生物工程有限公司），10%绵羊红细胞悬液（E）、3%硫乙醇酸钠溶液，Hank，s液，以上试剂均按常规方法配置。
2 方法
2.1 药物及给药方法
将复方白毛夏枯草各药材依验方比例配伍，常规制备水煎剂，按成人临床用药量换成小鼠用药量，调整浓度为大、中、小3个剂量（分别相当于生药1，0.5，0.25 g/ml）备用。各给药组小鼠每次分别按10，5，2.5 g/kg灌服复方白毛夏枯草水煎剂，对照组代以等量生理盐水，2次/ d，连续灌胃7 d。所有动物按常规饲养。
2.2 免疫指标检测
2.2.1 胸腺指数、脾脏指数检测
给药结束次日，各组随机取小鼠10只，摘眼球无菌取血并分离血清备用；同时，脊椎脱臼处死小鼠后，取胸腺、脾脏称湿重并计算胸腺和脾脏指数［胸腺或脾脏质量（g）与每100 g体质量的比值］。
2.2.2 EA花环法测定巨噬细胞FC受体
实验按照文献方法进行［1］。在显微镜下，以周围粘附5个或5个以上EA的巨噬细胞为EA花环阳性，随机计数200个巨噬细胞，算出EA花环阳性百分率。
2.2.3 ELISA测定血清IgG、IgM 含量
使用上述血清0.1 ml,按照ELISA 试剂盒操作说明测定小鼠血清中IgG、IgM量。
2.2.4 中性红比色法检测吞噬细胞吞噬能力
按文献方法［2］。在末次给药后，各组随机取小鼠10只，腹腔注射3%硫代乙醇酸钠0.02 ml/g体质量，6 h后无菌取腹腔液，常规制备小鼠腹腔巨噬细胞，并调整浓度至1×106/ml，加至96孔板中，100 μl/孔，置37℃、5%CO2培养箱贴壁孵育2 h，弃去上清，加0.072%中性红溶液100 μl/孔，继续孵育30 min，弃去上清，以Hank's液洗3次，加入DMSO 100 μl/孔，置4℃冰箱过夜，置酶标仪490 nm处测定各孔OD值。
2.2.5 MTT比色法测定脾脏淋巴细胞增殖能力
参考文献方法［3］。各组剩余小鼠末次给药后2 h, 无菌取脾细胞，常规制备小鼠脾细胞悬液，并调整浓度至2×106/ml，加至96 孔培养板中l00 μl/孔，再加入含3%PHA完全RPMI-1640培养液100 μl/孔，另设对照组加入不含PHA的完全RPMI-1640 培养液100μl/孔，每个样品设3个复孔，置37℃、5%CO2培养箱中贴壁培养72h，吸上清液50μl弃之，加入5 mg/ml的MTT10 μl/孔， 置CO2 培养箱孵育6 h 后，加入DMSO 100 μl/孔，充分振荡后， 静止10 min, 置酶标仪570 nm处测定各孔OD值， 淋巴细胞增殖能力用PHA+与PHA-的OD均值差表示。
口腔护理毕业论文 http://www.qikanba.com/
1 材料与仪器
1.1 动物及分组
健康昆明种小鼠120只，体质量（20±2）g,雌雄不分，贵阳医学院实验动物中心提供，合格号为SCXK（黔）2002-0001。随机将小鼠分为4组，即复方白毛夏枯草大剂量组、中剂量组、小剂量和生理盐水对照组，每组30只，雌雄分笼饲养。
1.2 仪器与试剂
USA3131型CO2培养箱（美国热电），EIX808U型全自动酶标仪（美国BioTek）、BSC1800-Ⅱ-A/B3型生物安全柜（上海瑞仰），小鼠IgG、IgM酶联免疫试剂盒；四甲基偶氮唑盐（MTT）（ Phamacia 公司），植物血凝素（PHA）（Sigma 公司），RPMI-1640营养液（Serva 公司），中性红（Amresco 公司） ,兔抗羊红细胞抗体（A）（河南知微生物工程有限公司），10%绵羊红细胞悬液（E）、3%硫乙醇酸钠溶液，Hank，s液，以上试剂均按常规方法配置。
2 方法
2.1 药物及给药方法
将复方白毛夏枯草各药材依验方比例配伍，常规制备水煎剂，按成人临床用药量换成小鼠用药量，调整浓度为大、中、小3个剂量（分别相当于生药1，0.5，0.25 g/ml）备用。各给药组小鼠每次分别按10，5，2.5 g/kg灌服复方白毛夏枯草水煎剂，对照组代以等量生理盐水，2次/ d，连续灌胃7 d。所有动物按常规饲养。
2.2 免疫指标检测
2.2.1 胸腺指数、脾脏指数检测
给药结束次日，各组随机取小鼠10只，摘眼球无菌取血并分离血清备用；同时，脊椎脱臼处死小鼠后，取胸腺、脾脏称湿重并计算胸腺和脾脏指数［胸腺或脾脏质量（g）与每100 g体质量的比值］。
2.2.2 EA花环法测定巨噬细胞FC受体
实验按照文献方法进行［1］。在显微镜下，以周围粘附5个或5个以上EA的巨噬细胞为EA花环阳性，随机计数200个巨噬细胞，算出EA花环阳性百分率。
2.2.3 ELISA测定血清IgG、IgM 含量
使用上述血清0.1 ml,按照ELISA 试剂盒操作说明测定小鼠血清中IgG、IgM量。
2.2.4 中性红比色法检测吞噬细胞吞噬能力
按文献方法［2］。在末次给药后，各组随机取小鼠10只，腹腔注射3%硫代乙醇酸钠0.02 ml/g体质量，6 h后无菌取腹腔液，常规制备小鼠腹腔巨噬细胞，并调整浓度至1×106/ml，加至96孔板中，100 μl/孔，置37℃、5%CO2培养箱贴壁孵育2 h，弃去上清，加0.072%中性红溶液100 μl/孔，继续孵育30 min，弃去上清，以Hank's液洗3次，加入DMSO 100 μl/孔，置4℃冰箱过夜，置酶标仪490 nm处测定各孔OD值。
2.2.5 MTT比色法测定脾脏淋巴细胞增殖能力
参考文献方法［3］。各组剩余小鼠末次给药后2 h, 无菌取脾细胞，常规制备小鼠脾细胞悬液，并调整浓度至2×106/ml，加至96 孔培养板中l00 μl/孔，再加入含3%PHA完全RPMI-1640培养液100 μl/孔，另设对照组加入不含PHA的完全RPMI-1640 培养液100μl/孔，每个样品设3个复孔，置37℃、5%CO2培养箱中贴壁培养72h，吸上清液50μl弃之，加入5 mg/ml的MTT10 μl/孔， 置CO2 培养箱孵育6 h 后，加入DMSO 100 μl/孔，充分振荡后， 静止10 min, 置酶标仪570 nm处测定各孔OD值， 淋巴细胞增殖能力用PHA+与PHA-的OD均值差表示。
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