红毛五加叶的薄层鉴别实验-口腔内科学论文
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红毛五加传统以茎皮入药，为四川地区五加皮的习用品种和羌族特色药材，具祛风湿、强筋骨之功效，主治风寒湿痹、足膝无力等证。红毛五加叶目前已受到关注，四川省阿坝州地区将其开发为保健茶推向市场，具有进一步开发成新药材的前景。关于红毛五加叶的研究甚少［1，2］，结合文献及预实验，红毛五加叶中存在以常春藤皂苷为代表的多种三萜皂苷。
1 仪器与试药
1.1 仪器高效液相色谱仪（DionexP680 美国戴安），旋转蒸发器（buchi 瑞士），超纯水器（Millipore美国），超声清洗器（AS5150A 天津，功率：180W，频率：40KHz），电子天平（Sartorius BS224S 北京）。
1.2 试药与试剂常春藤皂苷元（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号111733-200501），齐墩果酸（中国药品生物制品检定所，批号110709-200505），甲醇（色谱纯，Fisher），水为超纯水及重蒸水，其余试剂均为分析纯。
1.3 样品采自阿坝州，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为红毛五加Acaothopanax giraldii Harms 的干燥叶。
2 方法与结果
2.1 红毛五加叶的薄层鉴别文献报道，红毛五加中含有常春藤皂苷及齐墩果酸皂苷［2］，因此，本研究对常春藤皂苷元和齐墩果酸进行了定性鉴别。
取常春藤皂苷元对照品、齐墩果酸对照品，加甲醇制成每毫升各含0.4 mg的混合溶液，作为对照品溶液。取本品粉末（过4号筛）约2 g，精密称定，加甲醇50 ml，超声处理30 min，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加水10 ml溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，20 ml/次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20 ml，盐酸1 ml，加热水解4 h，水解物加水10 ml，用三氯甲烷振摇提取2次，20 ml/次，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇2 ml溶解，即得供试品溶液。吸取供试品溶液、对照品溶液各2～5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（6∶4∶0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与常春藤皂苷元对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的深蓝色斑点；在与齐墩果酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝紫色斑点。见图1。
红毛五加叶水解后常春藤皂苷元含量较高，而齐墩果酸含量较低且色谱峰存在干扰。因此本试验对红毛五加叶中的常春藤皂苷元进行了定性定量鉴别，对齐墩果酸进行了定性鉴别。流动相条件参照《中国药典》［3］木通项下规定，略作调整。《中国药典》流动相条件为：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（87∶13∶0.04∶0.02），考察发现该条件下常春藤皂苷元分离不理想。遂降低甲醇比例，比较了甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85∶15∶0.04∶0.02）；甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（83∶17∶0.04∶0.02），前者出峰时间合适且分离良好，选择作为流动相条件。
对样品提取方法进行了考察。分别比较了超声和回流提取；盐酸和硫酸的水解效果；水解时加入的不同酸体积。结果表明，回流提取常春藤皂苷元含量较高；盐酸的水解效果较好；盐酸与甲醇比例为（1∶20）时水解效果最好。常春藤皂苷元为红毛五加叶中三萜皂苷元的主要类型，含量较高。常春藤皂苷已证实具抗炎、溶血、细胞毒性、诱导细胞凋亡等生物活性［4，5］，常春藤皂苷元可作为红毛五加叶含量测定的主要指标。
口腔颌面外科教学论文 http://www.qikanba.com/
红毛五加传统以茎皮入药，为四川地区五加皮的习用品种和羌族特色药材，具祛风湿、强筋骨之功效，主治风寒湿痹、足膝无力等证。红毛五加叶目前已受到关注，四川省阿坝州地区将其开发为保健茶推向市场，具有进一步开发成新药材的前景。关于红毛五加叶的研究甚少［1，2］，结合文献及预实验，红毛五加叶中存在以常春藤皂苷为代表的多种三萜皂苷。
1 仪器与试药
1.1 仪器高效液相色谱仪（DionexP680 美国戴安），旋转蒸发器（buchi 瑞士），超纯水器（Millipore美国），超声清洗器（AS5150A 天津，功率：180W，频率：40KHz），电子天平（Sartorius BS224S 北京）。
1.2 试药与试剂常春藤皂苷元（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号111733-200501），齐墩果酸（中国药品生物制品检定所，批号110709-200505），甲醇（色谱纯，Fisher），水为超纯水及重蒸水，其余试剂均为分析纯。
1.3 样品采自阿坝州，经成都中医药大学卫莹芳教授鉴定为红毛五加Acaothopanax giraldii Harms 的干燥叶。
2 方法与结果
2.1 红毛五加叶的薄层鉴别文献报道，红毛五加中含有常春藤皂苷及齐墩果酸皂苷［2］，因此，本研究对常春藤皂苷元和齐墩果酸进行了定性鉴别。
取常春藤皂苷元对照品、齐墩果酸对照品，加甲醇制成每毫升各含0.4 mg的混合溶液，作为对照品溶液。取本品粉末（过4号筛）约2 g，精密称定，加甲醇50 ml，超声处理30 min，滤过，残渣用甲醇适量洗涤，合并滤液与洗液，回收溶剂至干，残渣加水10 ml溶解，用水饱和正丁醇振摇提取3次，20 ml/次，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇20 ml，盐酸1 ml，加热水解4 h，水解物加水10 ml，用三氯甲烷振摇提取2次，20 ml/次，合并提取液，回收溶剂至干，残渣加甲醇2 ml溶解，即得供试品溶液。吸取供试品溶液、对照品溶液各2～5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-醋酸乙酯-冰醋酸（6∶4∶0.25）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中，在与常春藤皂苷元对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的深蓝色斑点；在与齐墩果酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝紫色斑点。见图1。
红毛五加叶水解后常春藤皂苷元含量较高，而齐墩果酸含量较低且色谱峰存在干扰。因此本试验对红毛五加叶中的常春藤皂苷元进行了定性定量鉴别，对齐墩果酸进行了定性鉴别。流动相条件参照《中国药典》［3］木通项下规定，略作调整。《中国药典》流动相条件为：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（87∶13∶0.04∶0.02），考察发现该条件下常春藤皂苷元分离不理想。遂降低甲醇比例，比较了甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85∶15∶0.04∶0.02）；甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（83∶17∶0.04∶0.02），前者出峰时间合适且分离良好，选择作为流动相条件。
对样品提取方法进行了考察。分别比较了超声和回流提取；盐酸和硫酸的水解效果；水解时加入的不同酸体积。结果表明，回流提取常春藤皂苷元含量较高；盐酸的水解效果较好；盐酸与甲醇比例为（1∶20）时水解效果最好。常春藤皂苷元为红毛五加叶中三萜皂苷元的主要类型，含量较高。常春藤皂苷已证实具抗炎、溶血、细胞毒性、诱导细胞凋亡等生物活性［4，5］，常春藤皂苷元可作为红毛五加叶含量测定的主要指标。
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