探究黄芩苷对黑质部位注射铁剂所造成损毁的保护作用-口腔医学导论的论文
口腔医学导论的论文 口腔医学论文 口腔护理论文发表 护理学论文发表
1 材料与方法
1.1 实验动物分组、给药及处理健康雄性Wistar大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）2007 0001］26只，体质量250～300 g，随机分为3组，模型组13只，黄芩苷组11只， 该组手术前灌胃黄芩苷（78mg·kg-1·d-1［7］，四川广汉市本草植化有限公司产品，批号：030812）1周。2只为假手术对照。模型组和黄芩苷组均施予FeCl3脑内定位注射，假手术组除注射外均与其他组相同处理。各组手术后饲养5周，期间记录大鼠行为学变化并拍摄摄像，实验结束时各组取2只做病理的动物麻醉后开胸，行多聚甲醛心脏灌注固定，24 h内制作中脑黑质部位冰冻切片（片厚50μm），以备做免疫组化分析和铁染色。其余动物断头处死，迅速冰盘上分离纹状体、中脑黑质、海马、大脑皮层及其余脑组织置-80℃保存。
1.2 黑质内定向注射FeCl3［2］大鼠用10%水合氯醛麻醉（0.35 ml/100 g）后固定于立体定位仪上，按照下列坐标将无菌FeCl3 溶液（20 mg/ml），分为两点（每点1μl）缓慢注射至左侧黑质中：作标为①门齿棒上2.4 mm，前囟下4.4 mm，中线旁开1.1 mm，颅骨下7.9mm；②门齿棒下3.4 mm，前囟下4.0 mm，中线旁开0.8 mm，颅骨下8.1 mm。大鼠铁剂总量为40 μg。
1.3 黑质酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化染色各组做病理的大鼠脑切片在0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；室温入1N盐酸抗原修复30 min，蒸馏水浸洗3 min×3次；再入3%H2O2消除内源性过氧化物酶的活性10 min，蒸馏水浸洗3次， 0.01mol/L PBST浸洗0.5min×2 次；入5%正常羊血清封闭30 min，倾去血清后直入适当稀释的Ⅰ抗（大鼠单克隆TH抗体 ,sigma）室温过夜；0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；入1：300生物素标记的Ⅱ抗（羊抗小鼠IgG，北京中山金桥生物技术有限公司）室温2 3h，0.01 M PBS液中浸洗2 min×3次。入1:300辣根酶标记的链霉卵白素（Ⅲ抗）2～3h，再入0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次，每次；DAB显色10～30min。然后入水充分浸洗。裱片，自然干燥。
1.4 铁染色［7］脑切片置于含4%多聚甲醛的PB液中5 min，蒸馏水冲洗30s，新鲜配置的2% HCl与2%亚铁氰化钾等体积混合液30 min，PBS冲洗5 min×2次， 1% H2O2 甲醇溶液20 min，PBS冲洗5 min×2次，DAB显色，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。
2 结果
铁染色结果模型组注射侧中脑见到明显的铁沉积，针孔周围脑组织损毁严重（见图4与图6比较） ,黑质部位注射侧铁染色阳性细胞数明显高于对侧（见表1），甚至有些部位可见注射侧中脑结构塌陷（见图1），应是铁的毒性所造成的脑组织破坏所致。而黄芩苷组未见到中脑铁的沉积，也未见到组织损毁（见图5）， 黑质部位注射侧铁染色阳性细胞数明显高于对侧（见表1）。提示黄芩苷能够通过某种途径对抗、阻止注射的铁在中脑的沉积及所造成的损伤。 TH染色结果有些切片见注射侧黑质多巴胺能神经细胞明显出现缺失（见图1），对侧较注射侧明显减轻（图2与图3比较），但各组多张切片的图象分析结果显示注射侧TH染色阳性细胞与未注射侧没有明显差别。
有关医学美学的论文 http://www.qikanba.com/
1 材料与方法
1.1 实验动物分组、给药及处理健康雄性Wistar大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK（京）2007 0001］26只，体质量250～300 g，随机分为3组，模型组13只，黄芩苷组11只， 该组手术前灌胃黄芩苷（78mg·kg-1·d-1［7］，四川广汉市本草植化有限公司产品，批号：030812）1周。2只为假手术对照。模型组和黄芩苷组均施予FeCl3脑内定位注射，假手术组除注射外均与其他组相同处理。各组手术后饲养5周，期间记录大鼠行为学变化并拍摄摄像，实验结束时各组取2只做病理的动物麻醉后开胸，行多聚甲醛心脏灌注固定，24 h内制作中脑黑质部位冰冻切片（片厚50μm），以备做免疫组化分析和铁染色。其余动物断头处死，迅速冰盘上分离纹状体、中脑黑质、海马、大脑皮层及其余脑组织置-80℃保存。
1.2 黑质内定向注射FeCl3［2］大鼠用10%水合氯醛麻醉（0.35 ml/100 g）后固定于立体定位仪上，按照下列坐标将无菌FeCl3 溶液（20 mg/ml），分为两点（每点1μl）缓慢注射至左侧黑质中：作标为①门齿棒上2.4 mm，前囟下4.4 mm，中线旁开1.1 mm，颅骨下7.9mm；②门齿棒下3.4 mm，前囟下4.0 mm，中线旁开0.8 mm，颅骨下8.1 mm。大鼠铁剂总量为40 μg。
1.3 黑质酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化染色各组做病理的大鼠脑切片在0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；室温入1N盐酸抗原修复30 min，蒸馏水浸洗3 min×3次；再入3%H2O2消除内源性过氧化物酶的活性10 min，蒸馏水浸洗3次， 0.01mol/L PBST浸洗0.5min×2 次；入5%正常羊血清封闭30 min，倾去血清后直入适当稀释的Ⅰ抗（大鼠单克隆TH抗体 ,sigma）室温过夜；0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次；入1：300生物素标记的Ⅱ抗（羊抗小鼠IgG，北京中山金桥生物技术有限公司）室温2 3h，0.01 M PBS液中浸洗2 min×3次。入1:300辣根酶标记的链霉卵白素（Ⅲ抗）2～3h，再入0.01 mol/L PBS液中浸洗2 min×3次，每次；DAB显色10～30min。然后入水充分浸洗。裱片，自然干燥。
1.4 铁染色［7］脑切片置于含4%多聚甲醛的PB液中5 min，蒸馏水冲洗30s，新鲜配置的2% HCl与2%亚铁氰化钾等体积混合液30 min，PBS冲洗5 min×2次， 1% H2O2 甲醇溶液20 min，PBS冲洗5 min×2次，DAB显色，二甲苯透明，中性树胶封片，镜检。
2 结果
铁染色结果模型组注射侧中脑见到明显的铁沉积，针孔周围脑组织损毁严重（见图4与图6比较） ,黑质部位注射侧铁染色阳性细胞数明显高于对侧（见表1），甚至有些部位可见注射侧中脑结构塌陷（见图1），应是铁的毒性所造成的脑组织破坏所致。而黄芩苷组未见到中脑铁的沉积，也未见到组织损毁（见图5）， 黑质部位注射侧铁染色阳性细胞数明显高于对侧（见表1）。提示黄芩苷能够通过某种途径对抗、阻止注射的铁在中脑的沉积及所造成的损伤。 TH染色结果有些切片见注射侧黑质多巴胺能神经细胞明显出现缺失（见图1），对侧较注射侧明显减轻（图2与图3比较），但各组多张切片的图象分析结果显示注射侧TH染色阳性细胞与未注射侧没有明显差别。
有关医学美学的论文 http://www.qikanba.com/
我要分享到：
最新文章NEWS
- • 高职生道德信仰调查 本文版权由期刊吧所有
- • 医学论文中的统计问题
- • 医学论文投稿秘籍
- • 医学论文写作的程序介绍
- • 医学论文摘要的书写过程中存在的问题
- • 叙述医学研究论文标引用词的选择
- • 医学论文写作五大妙招
- • 如何进行儿科临床科学研究选题
- • 医学论文写作的流程
- • 医学论文统计设计方面存在问题总结
推荐期刊Tui Jian
Chinese Journal of Integrative Medicine
Journal of Genetics and Genomics
Journal of Bionic Engineering
Chinese Journal of Structural Chemistry
Pedosphere