黄芩苷含量测定方法学考察-儿科肺炎护理论文
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1 仪器与试剂
1.1 仪器
LC-20AT 型HPLC（岛津公司）；88-1型定时恒温磁力搅拌器；中速自动平衡微型离心机；ZK-82型真空干燥箱；德国Sartorius BS224S电子天平；METTLER AE240电子分析天平（瑞士）及实验过程所需的玻璃仪器。
1.2 试剂壳聚糖（济南海得贝生物公司）；甲醇（色谱纯）；双重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 壳聚糖絮凝剂的配制用1%的乙酸为溶剂，分别配制浓度为0.5%,1.0%，1.5%的壳聚糖溶液，充分溶胀后作为絮凝剂，备用。
2.2 黄芩水提液的制备 筛选合格的黄芩干燥根，蒸透后切片。称取黄芩饮片100 g，分别加10倍，8倍量水煎煮2次，1 h/次，纱布过滤，合并两次滤液，平分4份，待用。
2.3 黄芩苷粗品的制备［3］黄芩水提液→加入壳聚糖→静置过夜→离心→上清液水浴加热至40℃→盐酸调pH1.5→40℃恒温1 h→静置过夜→倾去上清液→沉淀水洗至pH 6→减压抽滤→60℃真空干燥→即得。
2.4 单因素实验分别以体系温度、体系pH、搅拌时间、壳聚糖用量以及壳聚糖的浓度为考察因素，在不同水平下进行单因素实验，以期筛选出影响絮凝效果的主要因素和水平。从而为正交实验设计提供依据。
2.5 黄芩苷含量测定方法学考察
2.5.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm，大连伊利特）；检测器：SPD-20 A （SHIMADZU）；工作站：CS-Light；流动相：甲醇－0.4%磷酸水溶液（47 ∶53）；柱温：35℃ ；流速：1 ml/min；检测波长：278 nm。
2.5.2 对照品溶液的制备取黄芩苷1.67 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加少量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
2.5.3 供试品的制备称取黄芩苷样品适量，精密称定，置于5 ml量瓶内，加少量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
2.5.4 标准曲线的绘制分别取黄芩苷（0.167 mg/ml）标准品溶液2，4，6，8，10，12 μl，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得到黄芩苷回归方程：Y= 565 266.1X+69 456.9，R=0.999 7，说明黄芩苷在0.334 ～2.004 μg范围内线性关系良好。
2.5.5 精密度实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，连续进样5次，记录色谱图。测得各共有峰的相对峰面积RSD小于3％，相对保留时间RSD小于1％。表明仪器精密度良好。
2.5.6 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，8，16，24 h测定，记录色谱图。结果表明供试品溶液在24 h内稳定，RSD小于1.5%。重复性实验取同一样品5份，按供试品溶液制备方法进行制备，分别进样，记录色谱图。测得各共有峰相对峰面积的RSD小于3％，相对保留时间的RSD小于1％。结果表明实验重复性良好。
3 结果
3.1 搅拌时间对絮凝作用的影响黄芩水提液在自身pH和60℃条件下，随机取3份黄芩水提液加入1.0%的壳聚糖溶液25 ml后，继续用搅拌器分别搅拌10，30，50 min。再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：0.967 0，0.847 4， 0.629 7。由测定结果可知，在搅拌10 min后其得重最大。
3.2 体系pH对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液，体系在60℃条件下分别调节pH至5，6，7。加入1.0%的壳聚糖溶液25 ml并搅拌30 min，再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：1.374 6，0.674 7，0.313 0 g。由测定结果可知，当体系pH为5即在自身pH条件下其得重最大，但如果体系pH过低会使黄芩苷大量析出，影响粗品黄芩苷重量。
3.3 絮凝剂浓度对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液，在自身pH和60℃条件下分别加入0.5％，1.0％，1.5％的壳聚糖溶液25 ml并搅拌30 min，再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：1.196 3，0.990 2，0.967 8 g。由测定结果可知，用0.5％的壳聚糖溶液作絮凝剂时其得重最大。
3.4 絮凝剂用量对絮凝作用的影响 随机取3份黄芩水提液，在自身pH和60℃条件下分别加入1.0%的壳聚糖15，25，35 ml并搅拌30 min，再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：1.177 1，1.091 7，1.090 7 g。由测定结果可知，加入15 ml 1.0%的壳聚糖作絮凝剂时其得重最大。但其得重的变化率低于其他因素得重的变化率，相对于上述4个因素而言，壳聚糖用量对絮凝作用的影响可以忽略，可以不作为主要影响因素考察。最佳方案的验证实验以正交表所得出的最佳絮凝条件为工艺条件，取黄芩饮片25 g，按黄芩苷粗品的工艺流程操作。重复两次。由表4 可知，采用优化的最佳工艺对黄芩水提液进行除杂后，其黄芩苷得重显着增高，且工艺条件稳定可靠。
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1 仪器与试剂
1.1 仪器
LC-20AT 型HPLC（岛津公司）；88-1型定时恒温磁力搅拌器；中速自动平衡微型离心机；ZK-82型真空干燥箱；德国Sartorius BS224S电子天平；METTLER AE240电子分析天平（瑞士）及实验过程所需的玻璃仪器。
1.2 试剂壳聚糖（济南海得贝生物公司）；甲醇（色谱纯）；双重蒸馏水；其他试剂均为分析纯。
2 方法
2.1 壳聚糖絮凝剂的配制用1%的乙酸为溶剂，分别配制浓度为0.5%,1.0%，1.5%的壳聚糖溶液，充分溶胀后作为絮凝剂，备用。
2.2 黄芩水提液的制备 筛选合格的黄芩干燥根，蒸透后切片。称取黄芩饮片100 g，分别加10倍，8倍量水煎煮2次，1 h/次，纱布过滤，合并两次滤液，平分4份，待用。
2.3 黄芩苷粗品的制备［3］黄芩水提液→加入壳聚糖→静置过夜→离心→上清液水浴加热至40℃→盐酸调pH1.5→40℃恒温1 h→静置过夜→倾去上清液→沉淀水洗至pH 6→减压抽滤→60℃真空干燥→即得。
2.4 单因素实验分别以体系温度、体系pH、搅拌时间、壳聚糖用量以及壳聚糖的浓度为考察因素，在不同水平下进行单因素实验，以期筛选出影响絮凝效果的主要因素和水平。从而为正交实验设计提供依据。
2.5 黄芩苷含量测定方法学考察
2.5.1 色谱条件色谱柱：Hypersil ODS C18（4.6 mm×250 mm, 5 μm，大连伊利特）；检测器：SPD-20 A （SHIMADZU）；工作站：CS-Light；流动相：甲醇－0.4%磷酸水溶液（47 ∶53）；柱温：35℃ ；流速：1 ml/min；检测波长：278 nm。
2.5.2 对照品溶液的制备取黄芩苷1.67 mg，精密称定，置10 ml量瓶中，加少量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
2.5.3 供试品的制备称取黄芩苷样品适量，精密称定，置于5 ml量瓶内，加少量甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。
2.5.4 标准曲线的绘制分别取黄芩苷（0.167 mg/ml）标准品溶液2，4，6，8，10，12 μl，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得到黄芩苷回归方程：Y= 565 266.1X+69 456.9，R=0.999 7，说明黄芩苷在0.334 ～2.004 μg范围内线性关系良好。
2.5.5 精密度实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，连续进样5次，记录色谱图。测得各共有峰的相对峰面积RSD小于3％，相对保留时间RSD小于1％。表明仪器精密度良好。
2.5.6 稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，8，16，24 h测定，记录色谱图。结果表明供试品溶液在24 h内稳定，RSD小于1.5%。重复性实验取同一样品5份，按供试品溶液制备方法进行制备，分别进样，记录色谱图。测得各共有峰相对峰面积的RSD小于3％，相对保留时间的RSD小于1％。结果表明实验重复性良好。
3 结果
3.1 搅拌时间对絮凝作用的影响黄芩水提液在自身pH和60℃条件下，随机取3份黄芩水提液加入1.0%的壳聚糖溶液25 ml后，继续用搅拌器分别搅拌10，30，50 min。再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：0.967 0，0.847 4， 0.629 7。由测定结果可知，在搅拌10 min后其得重最大。
3.2 体系pH对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液，体系在60℃条件下分别调节pH至5，6，7。加入1.0%的壳聚糖溶液25 ml并搅拌30 min，再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：1.374 6，0.674 7，0.313 0 g。由测定结果可知，当体系pH为5即在自身pH条件下其得重最大，但如果体系pH过低会使黄芩苷大量析出，影响粗品黄芩苷重量。
3.3 絮凝剂浓度对絮凝作用的影响随机取3份黄芩水提液，在自身pH和60℃条件下分别加入0.5％，1.0％，1.5％的壳聚糖溶液25 ml并搅拌30 min，再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：1.196 3，0.990 2，0.967 8 g。由测定结果可知，用0.5％的壳聚糖溶液作絮凝剂时其得重最大。
3.4 絮凝剂用量对絮凝作用的影响 随机取3份黄芩水提液，在自身pH和60℃条件下分别加入1.0%的壳聚糖15，25，35 ml并搅拌30 min，再按黄芩苷粗品的工艺流程操作。测其得重依次为：1.177 1，1.091 7，1.090 7 g。由测定结果可知，加入15 ml 1.0%的壳聚糖作絮凝剂时其得重最大。但其得重的变化率低于其他因素得重的变化率，相对于上述4个因素而言，壳聚糖用量对絮凝作用的影响可以忽略，可以不作为主要影响因素考察。最佳方案的验证实验以正交表所得出的最佳絮凝条件为工艺条件，取黄芩饮片25 g，按黄芩苷粗品的工艺流程操作。重复两次。由表4 可知，采用优化的最佳工艺对黄芩水提液进行除杂后，其黄芩苷得重显着增高，且工艺条件稳定可靠。
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