毛葡萄叶提取物对血栓形成的影响分析-精神科护士论文
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1 材料与仪器
1.1 动物SD大鼠，♀♂各半， 体质量（250±20）g，苏州大学实验动物中心供应，SPF级，实验动物生产许可证号：XCYK（苏）2002-0008,实验动物使用许可证号：SYXK（苏）2002-0037。
1.2 仪器
电子精密天平（上海奥豪斯公司）；DK-600型电热恒温水槽；TDL80-2B型台式离心机；LEICARM2126RT石蜡切片机（上海徕卡仪器有限公司）；OLYMPUS CX31显微镜（日本OLYMPUS公司） ；TYXN-96多功能智能血液凝聚仪 ；γ放免计数仪 FJ-2003/50A。
1.3 药品及试剂
毛葡萄叶水提物制备：取500 g干毛葡萄叶（来源：江西，苏州大学生药研究所鉴定），浸泡于水中，加热提取3次，45 min/次，合并提取液用蒸发浓缩至1 000 ml，再用终浓度为50%乙醇沉去杂质，过滤后用旋转蒸发除去乙醇，浓缩后的溶液经冷冻干燥后得到粉末状提取物150 g（批号为：KXSH-T1），主要成分为黄酮（25% ），还含有酚类、氨基酸等。实验时配成30%（约含生药1g·ml-1）；血栓素B2（thromboxane B2,TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-prostaglandinF1α， 6-keto-PGF1α）放射免疫测定试剂盒购自苏州大学江苏省血液学研究所，复方丹参滴丸（compound dan shen dripping pills, CDDP ），天津天士力制药股份有限公司产品，规格为每粒27mg，批号：20060802，批准文号：国药准字Z10950111。 盐酸肾上腺素注射液 1mg/ml上海禾丰制药有限公司 批号 070902,其它试剂均为市售国产分析纯。
2 方法
2.1 动静脉旁路血栓模型与给药分组
SD大鼠50只，♀♂各半， 体质量（250±20）g，分为对照组，中药（VRE）大、中、小剂量组和丹参（CDDP）组各10只，各组动物分养。大剂量中药组每天灌中药4 ml（4g·kg-1）；中剂量中药组每天灌中药4 ml（2g·kg-1）；小剂量中药组每天灌中药4 ml（1 g·kg-1）；对照组灌生理盐水4 ml每只；丹参组（70 mg· kg-1）。连续灌胃9 d；第10天于灌胃1 h后按血栓模型过程行动静脉旁路术2.2 动静脉旁路模型的建立
3.6%水合氯醛1ml·100 g-1麻醉后固定于解剖台上，准备好一根塑料管（d=0.3 mm）两端拉细，管中放置一根6 cm的4号线，并灌满50 U·ml-1肝素。分离右侧的颈总动脉和左侧的颈外静脉。静脉端先结扎静脉远心端，剪开一个小口，将管向近心端插入并结扎固定。动脉端先用血管夹夹住近心端，剪开一个小口，将管向近心端插入并结扎固定。然后放开血管夹，保证血流通畅，计时20 min后将线取出［2］。分别称量栓线的湿重和干重，将形成的血栓固定、包埋，切片、HE染色，观察血栓成分。并腹主动脉取血，离心2 000 r/min，取血清，-20℃保存待测TXB2和6-keto-PGF1α含量。
2.3 血栓重量测定取下栓线后在滤纸上吸干后，用电子分析天平测定其重量。然后置60 ℃烘箱烘干至恒重称其重量为干重。
2.4 血栓素B2（TXB2）、6-keto-PGF1α检测
用放射免疫法测定血清中的TXB2和6-keto-PGF1α的含量并计算出TXB2与6-keto-PGF1α比值。
2.5 血淤血流变学模型与给药分组
SD大鼠40只，大鼠，♀♂各半， 体质量（250±20） g，将大鼠分为4组，每组10只，即对照组、血瘀模型组、丹参组、中药模型组，各组动物分养。对照组：每天生理盐水灌胃5 ml/只，连续7 d。第7天停食，次晨取血检测。② 造模组： 每日丹参组（70 mg·kg-1），中药中剂量组（2 g·kg-1） 灌胃，分灌不同药物连续7d，于第7天皮下注射肾上腺素0.08 ml·100 g-1，共2次，2次相隔4 h，于第1次注射后2 h，将大鼠浸入冰水中5 min，处置后停食，次晨取血检测［4，5］。
2.6 全血血粘度的检测
腹主动脉抽血5 ml，EDTA-2Na抗凝，TYXN-96多功能智能血液凝聚仪测定全血高切，中切，低切血粘度。
3 结果
血栓HE染色显示，对照组线栓形成的血栓，血栓体是以血小板、红细胞和少量白细胞的混合型血栓，其中血小板形成的结构最明显（见图 1a）；给药组中的大、中、小剂量组血栓形成明显小于对照组，并且血栓体较疏松，血栓体中血小板形成的结构明显小于对照组（见图1b～d）。丹参组与对照组对比，血栓有不同程度的减小，但与药物组比较，其血栓明显大于药物组。血栓重量测定结果也与形态学观察一致。药物组有明显降低血栓重量（P<0.05,P<0.01 ,P<0.01），见表1，其中中药中剂量组作用最显着。
儿科中医辨证护理论文 http://www.qikanba.com/
1 材料与仪器
1.1 动物SD大鼠，♀♂各半， 体质量（250±20）g，苏州大学实验动物中心供应，SPF级，实验动物生产许可证号：XCYK（苏）2002-0008,实验动物使用许可证号：SYXK（苏）2002-0037。
1.2 仪器
电子精密天平（上海奥豪斯公司）；DK-600型电热恒温水槽；TDL80-2B型台式离心机；LEICARM2126RT石蜡切片机（上海徕卡仪器有限公司）；OLYMPUS CX31显微镜（日本OLYMPUS公司） ；TYXN-96多功能智能血液凝聚仪 ；γ放免计数仪 FJ-2003/50A。
1.3 药品及试剂
毛葡萄叶水提物制备：取500 g干毛葡萄叶（来源：江西，苏州大学生药研究所鉴定），浸泡于水中，加热提取3次，45 min/次，合并提取液用蒸发浓缩至1 000 ml，再用终浓度为50%乙醇沉去杂质，过滤后用旋转蒸发除去乙醇，浓缩后的溶液经冷冻干燥后得到粉末状提取物150 g（批号为：KXSH-T1），主要成分为黄酮（25% ），还含有酚类、氨基酸等。实验时配成30%（约含生药1g·ml-1）；血栓素B2（thromboxane B2,TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-prostaglandinF1α， 6-keto-PGF1α）放射免疫测定试剂盒购自苏州大学江苏省血液学研究所，复方丹参滴丸（compound dan shen dripping pills, CDDP ），天津天士力制药股份有限公司产品，规格为每粒27mg，批号：20060802，批准文号：国药准字Z10950111。 盐酸肾上腺素注射液 1mg/ml上海禾丰制药有限公司 批号 070902,其它试剂均为市售国产分析纯。
2 方法
2.1 动静脉旁路血栓模型与给药分组
SD大鼠50只，♀♂各半， 体质量（250±20）g，分为对照组，中药（VRE）大、中、小剂量组和丹参（CDDP）组各10只，各组动物分养。大剂量中药组每天灌中药4 ml（4g·kg-1）；中剂量中药组每天灌中药4 ml（2g·kg-1）；小剂量中药组每天灌中药4 ml（1 g·kg-1）；对照组灌生理盐水4 ml每只；丹参组（70 mg· kg-1）。连续灌胃9 d；第10天于灌胃1 h后按血栓模型过程行动静脉旁路术2.2 动静脉旁路模型的建立
3.6%水合氯醛1ml·100 g-1麻醉后固定于解剖台上，准备好一根塑料管（d=0.3 mm）两端拉细，管中放置一根6 cm的4号线，并灌满50 U·ml-1肝素。分离右侧的颈总动脉和左侧的颈外静脉。静脉端先结扎静脉远心端，剪开一个小口，将管向近心端插入并结扎固定。动脉端先用血管夹夹住近心端，剪开一个小口，将管向近心端插入并结扎固定。然后放开血管夹，保证血流通畅，计时20 min后将线取出［2］。分别称量栓线的湿重和干重，将形成的血栓固定、包埋，切片、HE染色，观察血栓成分。并腹主动脉取血，离心2 000 r/min，取血清，-20℃保存待测TXB2和6-keto-PGF1α含量。
2.3 血栓重量测定取下栓线后在滤纸上吸干后，用电子分析天平测定其重量。然后置60 ℃烘箱烘干至恒重称其重量为干重。
2.4 血栓素B2（TXB2）、6-keto-PGF1α检测
用放射免疫法测定血清中的TXB2和6-keto-PGF1α的含量并计算出TXB2与6-keto-PGF1α比值。
2.5 血淤血流变学模型与给药分组
SD大鼠40只，大鼠，♀♂各半， 体质量（250±20） g，将大鼠分为4组，每组10只，即对照组、血瘀模型组、丹参组、中药模型组，各组动物分养。对照组：每天生理盐水灌胃5 ml/只，连续7 d。第7天停食，次晨取血检测。② 造模组： 每日丹参组（70 mg·kg-1），中药中剂量组（2 g·kg-1） 灌胃，分灌不同药物连续7d，于第7天皮下注射肾上腺素0.08 ml·100 g-1，共2次，2次相隔4 h，于第1次注射后2 h，将大鼠浸入冰水中5 min，处置后停食，次晨取血检测［4，5］。
2.6 全血血粘度的检测
腹主动脉抽血5 ml，EDTA-2Na抗凝，TYXN-96多功能智能血液凝聚仪测定全血高切，中切，低切血粘度。
3 结果
血栓HE染色显示，对照组线栓形成的血栓，血栓体是以血小板、红细胞和少量白细胞的混合型血栓，其中血小板形成的结构最明显（见图 1a）；给药组中的大、中、小剂量组血栓形成明显小于对照组，并且血栓体较疏松，血栓体中血小板形成的结构明显小于对照组（见图1b～d）。丹参组与对照组对比，血栓有不同程度的减小，但与药物组比较，其血栓明显大于药物组。血栓重量测定结果也与形态学观察一致。药物组有明显降低血栓重量（P<0.05,P<0.01 ,P<0.01），见表1，其中中药中剂量组作用最显着。
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