人参与五灵脂配伍的作用反应研究-精神科药过敏论文
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1 仪器和材料
Waters 600 HPLC系统， Alltech 2000型蒸发光检测器（ELSD）， 检测器条件为Temp：92℃；Gasflow：2.7 L/min；Gain：1；Impactor：off. Agilent 1100 Series 自动进样器；日本资生堂Shiseido-CAPCELL,C18-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流动相A为甲醇，流动相B为0.2%醋酸水溶液。时间程序为0～50 min：25％～50％A，75%～50%B。进样量10 μl 。甲醇为色谱纯试剂（美国Fisher公司）， 水位超纯水（18.2ΩPa）， 0.45 μm微孔滤膜（安捷伦公司）。 Varian紫外可见分光光度计；KQ2500E 型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；甲醇，冰醋酸，香草醛试剂为分析纯（北京化工厂）；人参药材购自吉林抚松，五灵脂购自吉林大药房，人参皂苷标准品Re 购于中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 样品的制备
2.1.1 人参单煎对照液的制备取人参药材粉末3 g，精密称定，加100 ml水浸渍45 min，加热回流提取2次，2 h/次，合并两次提取液，离心10 min，取上清液浓缩至20 ml，加95%乙醇使溶液中乙醇含量达到75%，静置过夜，滤过，滤液浓缩至干，甲醇定容至10 ml量瓶中，备用。
2.1.2 人参与五灵脂共煎液的制备［1］精密称取五灵脂1，2，3，4.5，6 g，分别加入3 g人参粉末，加150 ml水中浸渍45 min，加热回流提取2次， 2 h/次，合并两次提取液，离心10 min，合并上清液，浓缩至20 ml，加95%乙醇使溶液中乙醇含量达到75%，静置过夜，滤过， 滤液浓缩至干，甲醇定容至10 ml量瓶中，备用。
2.1.3 样品残渣溶液的制备将人参与五灵脂不同剂量配伍煎煮水提液残渣分别用50 ml甲醇超声波提取1 h，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇定容至10 ml量瓶中，备用。
2.2 不同剂量五灵脂对人参化学成分影响的研究［2，3］将人参单煎液与不同剂量五灵脂配伍提取溶液分别注入高效液相色谱仪，按实验条件测得各色谱图见图1～2。
由图1和图2可以看出，人参中的皂苷类化合物得到了很好的分离，并且在梯度洗脱条件下基线平稳。通过高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术可知图中1～11号色谱峰分别为人参皂苷Re，Rg1，Rb1，Rg2，M-Rb1，Rc，M-Rd，Rb2，Rb3，Rd，Ro（另文发表）。可以明显看出，随着配伍五灵脂剂量的增加，人参皂苷色谱峰面积依次减少，在人参与五灵脂配伍比例为2∶6的情况下只能看到Re+Rg1，Rb1，Rc，Rb2，Rd，Ro人参中最为常见的单体皂苷。对以上7 种人参皂苷进行峰面积积分结果见表1和图3。
2.3 样品残渣溶液中人参总皂苷的测定［4］
2.3.1 标准曲线的制备精密称取人参皂苷Re标准品10.01 mg，用甲醇定容于10 ml量瓶中，制成每毫升含1.001 mg的对照品溶液。分别精密移取对照品溶液30，60，90，120，150 μl分别加入干燥具塞的试管中，水浴挥干溶剂，各加入新配制的香草醛-冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，于60℃恒温水浴加热15 min，取出，流水冷却2 min，加冰醋酸5 ml，摇匀，随行试剂作空白。于550 nm处测定吸光度，得出标准曲线为：Y=0.116 93X - 0.036 04，r=0.999 8，样品在0.01～0.30 mg 范围内线性关系良好。实验结果表明，人参中加入五灵脂水提取液中人参皂苷的含降低，并且随着五灵脂配伍剂量的增加人参皂苷逐渐减少。相反，人参与五灵脂水提后的残渣中人参皂苷含量随着五灵脂加入量的增加逐渐增多，说明五灵脂可以抑制人参皂苷在水溶液中的溶出，推测可能是五灵脂中某种成分与人参皂苷在水溶液中发生络合不溶于水而沉淀于残渣中，而甲醇能够使络合物解离，使人参皂苷溶解在甲醇中。
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1 仪器和材料
Waters 600 HPLC系统， Alltech 2000型蒸发光检测器（ELSD）， 检测器条件为Temp：92℃；Gasflow：2.7 L/min；Gain：1；Impactor：off. Agilent 1100 Series 自动进样器；日本资生堂Shiseido-CAPCELL,C18-ODS（4.6 mm×250 mm，5 μm）。流动相A为甲醇，流动相B为0.2%醋酸水溶液。时间程序为0～50 min：25％～50％A，75%～50%B。进样量10 μl 。甲醇为色谱纯试剂（美国Fisher公司）， 水位超纯水（18.2ΩPa）， 0.45 μm微孔滤膜（安捷伦公司）。 Varian紫外可见分光光度计；KQ2500E 型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；甲醇，冰醋酸，香草醛试剂为分析纯（北京化工厂）；人参药材购自吉林抚松，五灵脂购自吉林大药房，人参皂苷标准品Re 购于中国药品生物制品检定所。
2 方法与结果
2.1 样品的制备
2.1.1 人参单煎对照液的制备取人参药材粉末3 g，精密称定，加100 ml水浸渍45 min，加热回流提取2次，2 h/次，合并两次提取液，离心10 min，取上清液浓缩至20 ml，加95%乙醇使溶液中乙醇含量达到75%，静置过夜，滤过，滤液浓缩至干，甲醇定容至10 ml量瓶中，备用。
2.1.2 人参与五灵脂共煎液的制备［1］精密称取五灵脂1，2，3，4.5，6 g，分别加入3 g人参粉末，加150 ml水中浸渍45 min，加热回流提取2次， 2 h/次，合并两次提取液，离心10 min，合并上清液，浓缩至20 ml，加95%乙醇使溶液中乙醇含量达到75%，静置过夜，滤过， 滤液浓缩至干，甲醇定容至10 ml量瓶中，备用。
2.1.3 样品残渣溶液的制备将人参与五灵脂不同剂量配伍煎煮水提液残渣分别用50 ml甲醇超声波提取1 h，滤过，滤液浓缩至干，用甲醇定容至10 ml量瓶中，备用。
2.2 不同剂量五灵脂对人参化学成分影响的研究［2，3］将人参单煎液与不同剂量五灵脂配伍提取溶液分别注入高效液相色谱仪，按实验条件测得各色谱图见图1～2。
由图1和图2可以看出，人参中的皂苷类化合物得到了很好的分离，并且在梯度洗脱条件下基线平稳。通过高效液相色谱与电喷雾质谱联用技术可知图中1～11号色谱峰分别为人参皂苷Re，Rg1，Rb1，Rg2，M-Rb1，Rc，M-Rd，Rb2，Rb3，Rd，Ro（另文发表）。可以明显看出，随着配伍五灵脂剂量的增加，人参皂苷色谱峰面积依次减少，在人参与五灵脂配伍比例为2∶6的情况下只能看到Re+Rg1，Rb1，Rc，Rb2，Rd，Ro人参中最为常见的单体皂苷。对以上7 种人参皂苷进行峰面积积分结果见表1和图3。
2.3 样品残渣溶液中人参总皂苷的测定［4］
2.3.1 标准曲线的制备精密称取人参皂苷Re标准品10.01 mg，用甲醇定容于10 ml量瓶中，制成每毫升含1.001 mg的对照品溶液。分别精密移取对照品溶液30，60，90，120，150 μl分别加入干燥具塞的试管中，水浴挥干溶剂，各加入新配制的香草醛-冰醋酸溶液0.2 ml，高氯酸0.8 ml，于60℃恒温水浴加热15 min，取出，流水冷却2 min，加冰醋酸5 ml，摇匀，随行试剂作空白。于550 nm处测定吸光度，得出标准曲线为：Y=0.116 93X - 0.036 04，r=0.999 8，样品在0.01～0.30 mg 范围内线性关系良好。实验结果表明，人参中加入五灵脂水提取液中人参皂苷的含降低，并且随着五灵脂配伍剂量的增加人参皂苷逐渐减少。相反，人参与五灵脂水提后的残渣中人参皂苷含量随着五灵脂加入量的增加逐渐增多，说明五灵脂可以抑制人参皂苷在水溶液中的溶出，推测可能是五灵脂中某种成分与人参皂苷在水溶液中发生络合不溶于水而沉淀于残渣中，而甲醇能够使络合物解离，使人参皂苷溶解在甲醇中。
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