石韦醇提取物不同极性部位的抑菌试验观察-大专护理毕业论文
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1 仪器与材料
1.1 仪器与材料
超净工作台、手提式灭菌锅、恒温控制箱、冰箱、游标卡尺、镊子、接种针、三角瓶等；石油醚、醋酸乙酯、乙醇、正丁醇等试剂均为分析纯。实验材料于2007 11 采自广西武鸣大明山国家级水源林保护区海拔1 200 m的沿路石壁上或乱石堆环境中，经广西大学植物分类学黎桦副教授鉴定为石韦P. lingua，将地上部洗净，自然风干后磨成粉末，过40目筛备用。
1.2 供试菌种
供试细菌：大肠杆菌Escherichia coli，普通变形杆菌Proteus vulgaris，金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，藤黄八叠球菌Sarcina lutea。供试真菌：黄曲霉Aspergillus flavas，青霉Penicillium sp.，黑曲霉Aspergillus niger。
以上菌种均由广西大学农学院植物保护系微生物学实验室提供。
1.3 培养基细菌用营养琼脂培养基培养，真菌用马铃薯培养基［5］培养。
2 方法
2.1 菌悬液或孢子悬液制备采用平板菌落计数法［5］。将受试菌在斜面培养基活化2～3代后，用接种环从斜面上刮菌苔两环，分别收集到内盛有100 ml无菌水的250 ml的三角瓶中，将受试菌配成终浓度0.1×107个/ml的菌悬液，备用。
2.2 样液制备石韦地上部醇提取物不同极性部位的制备：称取粉碎好的石韦样品4 kg，用体积分数90%乙醇将样品浸泡3次（料液比 1∶15），每次7 d ，提取液在40°C下减压蒸馏，回收溶剂，得乙醇浸膏。将乙醇浸膏悬浮于蒸馏水，先后用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和蒸馏水萃取，分别得石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和水4部分萃取物，同前浓缩，即得各极性部位。
2.3 石韦抗菌作用的检测方法采用纸片扩散法进行抑菌试验［6］。在超净工作台上将灭菌后的牛肉蛋白胨培养基倒入培养皿中，每皿15 ml，放置冷却。用无菌移液管取0.1 ml细菌液加于平皿中均匀涂布于平板（内径 90 mm）表面后。取经灭菌的标准滤纸（直径 6 mm），分别蘸取石韦醇提物的不同极性部位并贴于平板表面，每个培养皿放3片滤纸，以蒸馏水、石油醚为对照液。细菌于37℃培养24 h 、真菌于28℃培养48 h后，检测抑菌环的有无并测量抑菌环直径，每种提取液对8种供试菌重复测定3次，结果取平均值。出现抑菌环的菌株才作MIC检测。最小抑菌质量浓度的检测采用纸片扩散法方法同“2.3”，将各溶液稀释成100，50，25，12.5，6.25，3.125 mg/ml 的质量浓度梯度，以未见抑菌环的最高质量浓度为MIC。
3 结果
最小抑菌浓度比较由表2可知，石韦醇提取物不同极性部位对受试菌的抑菌效果显示量效关系。在低浓度时，无抑菌活性，抑制环基本上随药液质量浓度的增加而提高，抑菌活性渐显出来，由此可看出石韦提取物不同极性部位的最小抑菌浓度。只有正丁醇相对大肠杆菌有抑菌效果，对大肠杆菌的最小抑菌浓度为50 mg/ml。醋酸乙酯相、正丁醇相和蒸馏水相对普通变形杆菌的最小抑菌浓度分别为50，25 mg/ml和12.5 mg/ml，这三相对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为50，25 mg/ml和12.5 mg/ml，对八叠球菌最小抑菌浓度分别为25，25.00，12.5mg/ ml（见表3），可见，水相的最小抑菌质量浓度最小，其次是正丁醇。石韦地上部醇提物抗菌具有广谱性，对 5 种细菌均有不同程度的抑杀活性。
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1 仪器与材料
1.1 仪器与材料
超净工作台、手提式灭菌锅、恒温控制箱、冰箱、游标卡尺、镊子、接种针、三角瓶等；石油醚、醋酸乙酯、乙醇、正丁醇等试剂均为分析纯。实验材料于2007 11 采自广西武鸣大明山国家级水源林保护区海拔1 200 m的沿路石壁上或乱石堆环境中，经广西大学植物分类学黎桦副教授鉴定为石韦P. lingua，将地上部洗净，自然风干后磨成粉末，过40目筛备用。
1.2 供试菌种
供试细菌：大肠杆菌Escherichia coli，普通变形杆菌Proteus vulgaris，金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，藤黄八叠球菌Sarcina lutea。供试真菌：黄曲霉Aspergillus flavas，青霉Penicillium sp.，黑曲霉Aspergillus niger。
以上菌种均由广西大学农学院植物保护系微生物学实验室提供。
1.3 培养基细菌用营养琼脂培养基培养，真菌用马铃薯培养基［5］培养。
2 方法
2.1 菌悬液或孢子悬液制备采用平板菌落计数法［5］。将受试菌在斜面培养基活化2～3代后，用接种环从斜面上刮菌苔两环，分别收集到内盛有100 ml无菌水的250 ml的三角瓶中，将受试菌配成终浓度0.1×107个/ml的菌悬液，备用。
2.2 样液制备石韦地上部醇提取物不同极性部位的制备：称取粉碎好的石韦样品4 kg，用体积分数90%乙醇将样品浸泡3次（料液比 1∶15），每次7 d ，提取液在40°C下减压蒸馏，回收溶剂，得乙醇浸膏。将乙醇浸膏悬浮于蒸馏水，先后用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和蒸馏水萃取，分别得石油醚、醋酸乙酯、正丁醇和水4部分萃取物，同前浓缩，即得各极性部位。
2.3 石韦抗菌作用的检测方法采用纸片扩散法进行抑菌试验［6］。在超净工作台上将灭菌后的牛肉蛋白胨培养基倒入培养皿中，每皿15 ml，放置冷却。用无菌移液管取0.1 ml细菌液加于平皿中均匀涂布于平板（内径 90 mm）表面后。取经灭菌的标准滤纸（直径 6 mm），分别蘸取石韦醇提物的不同极性部位并贴于平板表面，每个培养皿放3片滤纸，以蒸馏水、石油醚为对照液。细菌于37℃培养24 h 、真菌于28℃培养48 h后，检测抑菌环的有无并测量抑菌环直径，每种提取液对8种供试菌重复测定3次，结果取平均值。出现抑菌环的菌株才作MIC检测。最小抑菌质量浓度的检测采用纸片扩散法方法同“2.3”，将各溶液稀释成100，50，25，12.5，6.25，3.125 mg/ml 的质量浓度梯度，以未见抑菌环的最高质量浓度为MIC。
3 结果
最小抑菌浓度比较由表2可知，石韦醇提取物不同极性部位对受试菌的抑菌效果显示量效关系。在低浓度时，无抑菌活性，抑制环基本上随药液质量浓度的增加而提高，抑菌活性渐显出来，由此可看出石韦提取物不同极性部位的最小抑菌浓度。只有正丁醇相对大肠杆菌有抑菌效果，对大肠杆菌的最小抑菌浓度为50 mg/ml。醋酸乙酯相、正丁醇相和蒸馏水相对普通变形杆菌的最小抑菌浓度分别为50，25 mg/ml和12.5 mg/ml，这三相对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为50，25 mg/ml和12.5 mg/ml，对八叠球菌最小抑菌浓度分别为25，25.00，12.5mg/ ml（见表3），可见，水相的最小抑菌质量浓度最小，其次是正丁醇。石韦地上部醇提物抗菌具有广谱性，对 5 种细菌均有不同程度的抑杀活性。
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