温胆汤提高免疫力的作用机理实验研究-护理专业毕业论文
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1 材料
1.1 动物与分组清洁级SD大鼠，雌性，（200±20）g，30只，由江西中医学院实验动物中心提供，饲养环境温度（25±1）℃，自然光照，给予充足的饮水和摄食，适应5 d后开始实验。随机分为3组：正常组、模型组、温胆汤组，每组10只。
1.2 药物与试剂
1.2.1 中药汤剂制备温胆汤组方（剂量以我们前期临床、实验研究剂量为依据）：半夏10 g，茯苓30 g，竹茹10 g，枳实10 g，陈皮10 g，甘草6 g，每剂含生药76 g，由江西省中医院中药房提供。经鉴定合格，各药物先加水浸泡30 min，一煎加药材量的8倍的水，沸腾后煎40 min，过滤取汁，二煎加药材量的6倍的水，沸腾后煎30 min，过滤两煎所得滤液混合后浓缩成1∶1，4℃冰箱保存备用。
1.2.2 试剂盐酸阿朴吗啡（APO），美国SIGMA 公司生产。异硫氰酸荧光素标记的单克隆抗体（FITC）标记小鼠抗大鼠CD3单克隆抗体，藻红蛋白（PE）标记小鼠抗大鼠CD4单克隆抗体，多藻叶绿素蛋白（PercCP）标记小鼠抗大鼠CD8 单克隆抗体，红细胞裂解液，均为美国Caltag公司产品；白介素-2试剂盒（ELISA法），美国原装进口，上海天呈科技有限公司提供；PBS缓冲液。
1.3 仪器流式细胞仪：美国BD公司FACSCalibur型，氰离子激光器，激发光波长488 nm，分析软件为CELL Quest软件；高速离心机（TDL-40B），上海安亭科学仪器厂生产；MK3酶标仪：LABSYSTEM产品。
2 方法
2.1 给药方法［3］温胆汤组于造模前采用连续灌胃给药，每次给药20 ml·kg-1（相当于灌胃20 mg·kg-1）；正常组和模型组用等容量生理盐水灌胃。灌胃1次/d，共21 d。
2.2 动物模型的建立［4］动物适应饲养环境5 d后进行实验，给药21 d，除正常组外，其它两组大鼠最后3 d给药1 h后，左侧腹腔注射40％的APO，按5 ml·kg-1体重的剂量注射，诱发SD大鼠精神分裂症模型。正常组予以生理盐水腹腔注射。
2.3 观察指标
2.3.1 一般情况实验期间观察记录动物行为活动、外观体征、粪便性状等。
2.3.2 刻板行为评分［5］每组大鼠均于末次给药1 h后腹腔注射APO后观察刻板行为，每隔10 min评分1次，共观察60 min。其评分级别见表1。
2.3.3 血液指标测定最后1次造模1 h后处死大鼠，股动脉剪开取全血和血清测定T细胞亚群数和IL-2的含量。选用流式细胞仪检测，应用CELL Quest分析软件，阳性峰细胞荧光强度作为T淋巴细胞表面分子CD3，CD4和CD8 的表达量。 采用双抗体夹心ELISA法，按说明书操作测定IL-2含量。
2.4 统计学处理实验数据以±s表示，应用SPSS13.0统计软件先进行正态性检验和方差齐性检验，呈正态分布且方差齐同则应用单因素方差分析（One-Way ANOVA）及两两q检验；呈偏态分布或方差不齐则作多组样本秩和h检验，进而作秩和q检验。
3 结果
一般情况整个给药期间未见动物死亡，造模前大鼠行为活动未见异常，外观体征、粪便性状均正常。刻板行为评分结果模型组10只大鼠造模后均出现了闻、咬、舔等刻板行为，活动十分明显，而正常组大鼠无此运动，比较后差异有统计学意义（P<0.05），说明造模成功。与模型组比较，温胆汤组大鼠刻板行为在20 min后受到抑制（P<0.05）。说明温胆汤具有对抗APO引起的刻板行为的作用。T细胞亚群检测从表3可见，模型组全血中CD3+,CD4+T细胞数及CD4+/ CD8+比例显着比正常组和温胆汤组低，各组间CD8+的差异不大；使用温胆汤组大鼠的CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/ CD8+比例比模型组显着升高。 IL-2检测表4显示，模型组大鼠血清IL-2含量较正常组和温胆汤组降低，而温胆汤组IL-2含量较模行组升高，提示温胆汤可通过提高IL-2含量来增强机体的免疫功能。提示温胆汤的作用机理可能是促使某一特定的T细胞群体的克隆性扩增，通过Th细胞数目及功能的提高来增强整体的免疫功能。
护理专业论文 http://www.qikanba.com/
1 材料
1.1 动物与分组清洁级SD大鼠，雌性，（200±20）g，30只，由江西中医学院实验动物中心提供，饲养环境温度（25±1）℃，自然光照，给予充足的饮水和摄食，适应5 d后开始实验。随机分为3组：正常组、模型组、温胆汤组，每组10只。
1.2 药物与试剂
1.2.1 中药汤剂制备温胆汤组方（剂量以我们前期临床、实验研究剂量为依据）：半夏10 g，茯苓30 g，竹茹10 g，枳实10 g，陈皮10 g，甘草6 g，每剂含生药76 g，由江西省中医院中药房提供。经鉴定合格，各药物先加水浸泡30 min，一煎加药材量的8倍的水，沸腾后煎40 min，过滤取汁，二煎加药材量的6倍的水，沸腾后煎30 min，过滤两煎所得滤液混合后浓缩成1∶1，4℃冰箱保存备用。
1.2.2 试剂盐酸阿朴吗啡（APO），美国SIGMA 公司生产。异硫氰酸荧光素标记的单克隆抗体（FITC）标记小鼠抗大鼠CD3单克隆抗体，藻红蛋白（PE）标记小鼠抗大鼠CD4单克隆抗体，多藻叶绿素蛋白（PercCP）标记小鼠抗大鼠CD8 单克隆抗体，红细胞裂解液，均为美国Caltag公司产品；白介素-2试剂盒（ELISA法），美国原装进口，上海天呈科技有限公司提供；PBS缓冲液。
1.3 仪器流式细胞仪：美国BD公司FACSCalibur型，氰离子激光器，激发光波长488 nm，分析软件为CELL Quest软件；高速离心机（TDL-40B），上海安亭科学仪器厂生产；MK3酶标仪：LABSYSTEM产品。
2 方法
2.1 给药方法［3］温胆汤组于造模前采用连续灌胃给药，每次给药20 ml·kg-1（相当于灌胃20 mg·kg-1）；正常组和模型组用等容量生理盐水灌胃。灌胃1次/d，共21 d。
2.2 动物模型的建立［4］动物适应饲养环境5 d后进行实验，给药21 d，除正常组外，其它两组大鼠最后3 d给药1 h后，左侧腹腔注射40％的APO，按5 ml·kg-1体重的剂量注射，诱发SD大鼠精神分裂症模型。正常组予以生理盐水腹腔注射。
2.3 观察指标
2.3.1 一般情况实验期间观察记录动物行为活动、外观体征、粪便性状等。
2.3.2 刻板行为评分［5］每组大鼠均于末次给药1 h后腹腔注射APO后观察刻板行为，每隔10 min评分1次，共观察60 min。其评分级别见表1。
2.3.3 血液指标测定最后1次造模1 h后处死大鼠，股动脉剪开取全血和血清测定T细胞亚群数和IL-2的含量。选用流式细胞仪检测，应用CELL Quest分析软件，阳性峰细胞荧光强度作为T淋巴细胞表面分子CD3，CD4和CD8 的表达量。 采用双抗体夹心ELISA法，按说明书操作测定IL-2含量。
2.4 统计学处理实验数据以±s表示，应用SPSS13.0统计软件先进行正态性检验和方差齐性检验，呈正态分布且方差齐同则应用单因素方差分析（One-Way ANOVA）及两两q检验；呈偏态分布或方差不齐则作多组样本秩和h检验，进而作秩和q检验。
3 结果
一般情况整个给药期间未见动物死亡，造模前大鼠行为活动未见异常，外观体征、粪便性状均正常。刻板行为评分结果模型组10只大鼠造模后均出现了闻、咬、舔等刻板行为，活动十分明显，而正常组大鼠无此运动，比较后差异有统计学意义（P<0.05），说明造模成功。与模型组比较，温胆汤组大鼠刻板行为在20 min后受到抑制（P<0.05）。说明温胆汤具有对抗APO引起的刻板行为的作用。T细胞亚群检测从表3可见，模型组全血中CD3+,CD4+T细胞数及CD4+/ CD8+比例显着比正常组和温胆汤组低，各组间CD8+的差异不大；使用温胆汤组大鼠的CD3+，CD4+T细胞数及CD4+/ CD8+比例比模型组显着升高。 IL-2检测表4显示，模型组大鼠血清IL-2含量较正常组和温胆汤组降低，而温胆汤组IL-2含量较模行组升高，提示温胆汤可通过提高IL-2含量来增强机体的免疫功能。提示温胆汤的作用机理可能是促使某一特定的T细胞群体的克隆性扩增，通过Th细胞数目及功能的提高来增强整体的免疫功能。
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