香附提取液对兔离体肠平滑肌抑制作用的研究-老年科护理论文
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1 材料
1.1 仪器与药品
pHS-3C型精密pH计 （上海雷磁仪器厂），LXJ-Ⅱ型离心沉淀机（上海医疗器械三厂），FA-1104型电子天平（上海精密仪器厂），BL-420E+型生物机能实验系统（四川成都泰盟电子公司），恒温平滑肌浴槽（张家港市南港医疗器械厂），FT-100生物张力传感器（成都泰盟电子有限公司）。氯化乙酰胆碱（国药集团化学试剂有限公司，批号：6900282），氯化钠（青岛化学试剂厂，批号：050616），氯化钾（河南焦作市化工三厂，批号：990911），无水氯化钙（天津市广成化学试剂有限公司，批号：20020504），碳酸氢钠（山东省化工研究院，批号：990902），葡萄糖（青岛化学试剂厂，批号：040716），MgSO4·7H2O（开原化学试剂厂，批号：990201），NaH2PO4·2H2O（天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：030828），皆为分析纯。香附饮片系莎草科植物莎草Cyperus rotundas L.的干燥根茎，在安徽沪谯中药饮片厂，经炮制规范化研究加工成的规范饮片，用SFE-CO2萃取后药渣备用。
1.2 动物新西兰大白兔，雌雄不限，体质量（2.2±0.5）kg，由山东中医药大学动物室提供，合格证号：SCXK（鲁）20050015。
1.3 供试液的制备
1.3.1 半仿生提取液的制备准确称取超临界提取后的香附药渣100 g，加水提取3次，加水量依次为香附的10倍，6倍，6倍；水的pH依次为2.0，6.5，9.0；煎煮时间依次为2，1，1 h；3煎液分别离心，合并上清液，浓缩并定容至200 ml，即得SBE液（香附药渣的质量浓度为0.5g·L-1）。水提取液的制备按“1.3.1”项下方法，只将3煎用水改为常水（pH=7.0），依法操作，即得WE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。 醇提取液的制备按“1.3.1”项下方法，只将3煎用水改用55%乙醇，提取3次，依法操作，即得AE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。
1.3.4 半仿生醇沉液的制备取“1.3.1”项下SBE液100 ml，加入计算量的乙醇，使含醇量达55%，边加边振摇，4℃静置24 h，离心（2000 r·min-1，30 min），取上清液，浓缩并定容至100 ml，即得SBAE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。水提醇沉液的制备取“1.3.2”项下WE液100 ml，加入计算量的乙醇，使含醇量达55%，边加边振摇，4℃静置24 h，离心（2000 r·min-1，30 min），取上清液，浓缩并定容至100 ml，即得WAE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。台氏液的配制准确称取NaCl 8g，KCl 0.2g，MgSO4·7H2O 0.26g，NaH2PO4·2H2O 0.065g，NaHCO3 1g，CaCl2 0.2g，葡萄糖 1g，先将CaCl2用蒸馏水溶解完全，再加入其余6种物质溶解，转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至1000 ml。
2 方法与结果
2.1 对正常兔离体肠运动的影响［4，5］取禁食24 h家兔，用槌猛击其后枕部，使其暴死，迅速打开腹腔，找出胃和十二指肠交界处，用线结扎，在结扎线近胃侧剪断小肠，去除肠壁周围肠系膜，分离出长约20～30 cm的肠管，立刻置于4℃的台氏液中，剪成2～3 cm的肠段，并用台氏液把肠内容物冲洗干净，以备用。
打开BL-420E+生物机能实验系统，调零，定标，安装拉力换能器，设置参数为：增益调节G=50，时间常数T DC，滤波调节F 30 Hz，扫描速度S 16.00 s/div。取标本，两端对角穿线，将其放在盛有50ml台氏液的恒温浴管（温度保持为37℃）中，上端连接拉力换能器，下端系于L型钩上固定，同时每分钟通入混合气60～80个气泡。标本负荷1～2 g，平衡30 min，待实验系统稳定后，描记肠段自发性舒缩稳定后的肠管正常运动曲线。在实验过程中，描记正常舒缩曲线后，向浴槽中加入各种药液，给药量1 ml，描记舒缩曲线。完成后，立即用新鲜台氏液冲洗2～3次，待肠段舒缩恢复正常后才可进行下一次给药，无法恢复正常舒缩的肠段弃去；用区间测量法测量给药前1 min及给药后第5 min的频率、幅度及张力，按公式①～③计算频率抑制率、幅度抑制率、张力抑制率，求平均值。用统计软件SPSS17.0作组内配对t检验，组间方差分析比较。
频率抑制率（%）=给药前频率-给药后频率给药前频率×100%①
幅度抑制率（%）=给药前幅度-给药后幅度给药前幅度×100%②
张力抑制率（%）=给药前张力-给药后张力给药前张力×100%③
2.2 对Ach所致兔离体肠痉挛的影响标本制备方法及仪器调试同“2.1”下项。描记一段正常肠平滑肌自律曲线后，向浴槽中加入0.01％乙酰胆碱0.1 ml，然后加入各种提取液，给药量1ml，描记舒缩曲线。计算其频率、幅度及张力的抑制率后，组内配对t检验，组间方差分析比较。本实验结果表明，香附经SFE-CO2后药渣的5种方法提取液对兔离体肠平滑肌均具有抑制作用，其中SBE液的作用最强，这与其5种方法提取液的成分指标比较结果相吻合。
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1 材料
1.1 仪器与药品
pHS-3C型精密pH计 （上海雷磁仪器厂），LXJ-Ⅱ型离心沉淀机（上海医疗器械三厂），FA-1104型电子天平（上海精密仪器厂），BL-420E+型生物机能实验系统（四川成都泰盟电子公司），恒温平滑肌浴槽（张家港市南港医疗器械厂），FT-100生物张力传感器（成都泰盟电子有限公司）。氯化乙酰胆碱（国药集团化学试剂有限公司，批号：6900282），氯化钠（青岛化学试剂厂，批号：050616），氯化钾（河南焦作市化工三厂，批号：990911），无水氯化钙（天津市广成化学试剂有限公司，批号：20020504），碳酸氢钠（山东省化工研究院，批号：990902），葡萄糖（青岛化学试剂厂，批号：040716），MgSO4·7H2O（开原化学试剂厂，批号：990201），NaH2PO4·2H2O（天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：030828），皆为分析纯。香附饮片系莎草科植物莎草Cyperus rotundas L.的干燥根茎，在安徽沪谯中药饮片厂，经炮制规范化研究加工成的规范饮片，用SFE-CO2萃取后药渣备用。
1.2 动物新西兰大白兔，雌雄不限，体质量（2.2±0.5）kg，由山东中医药大学动物室提供，合格证号：SCXK（鲁）20050015。
1.3 供试液的制备
1.3.1 半仿生提取液的制备准确称取超临界提取后的香附药渣100 g，加水提取3次，加水量依次为香附的10倍，6倍，6倍；水的pH依次为2.0，6.5，9.0；煎煮时间依次为2，1，1 h；3煎液分别离心，合并上清液，浓缩并定容至200 ml，即得SBE液（香附药渣的质量浓度为0.5g·L-1）。水提取液的制备按“1.3.1”项下方法，只将3煎用水改为常水（pH=7.0），依法操作，即得WE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。 醇提取液的制备按“1.3.1”项下方法，只将3煎用水改用55%乙醇，提取3次，依法操作，即得AE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。
1.3.4 半仿生醇沉液的制备取“1.3.1”项下SBE液100 ml，加入计算量的乙醇，使含醇量达55%，边加边振摇，4℃静置24 h，离心（2000 r·min-1，30 min），取上清液，浓缩并定容至100 ml，即得SBAE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。水提醇沉液的制备取“1.3.2”项下WE液100 ml，加入计算量的乙醇，使含醇量达55%，边加边振摇，4℃静置24 h，离心（2000 r·min-1，30 min），取上清液，浓缩并定容至100 ml，即得WAE液（香附药渣的质量浓度为0.5 g·L-1）。台氏液的配制准确称取NaCl 8g，KCl 0.2g，MgSO4·7H2O 0.26g，NaH2PO4·2H2O 0.065g，NaHCO3 1g，CaCl2 0.2g，葡萄糖 1g，先将CaCl2用蒸馏水溶解完全，再加入其余6种物质溶解，转移至容量瓶中，用蒸馏水定容至1000 ml。
2 方法与结果
2.1 对正常兔离体肠运动的影响［4，5］取禁食24 h家兔，用槌猛击其后枕部，使其暴死，迅速打开腹腔，找出胃和十二指肠交界处，用线结扎，在结扎线近胃侧剪断小肠，去除肠壁周围肠系膜，分离出长约20～30 cm的肠管，立刻置于4℃的台氏液中，剪成2～3 cm的肠段，并用台氏液把肠内容物冲洗干净，以备用。
打开BL-420E+生物机能实验系统，调零，定标，安装拉力换能器，设置参数为：增益调节G=50，时间常数T DC，滤波调节F 30 Hz，扫描速度S 16.00 s/div。取标本，两端对角穿线，将其放在盛有50ml台氏液的恒温浴管（温度保持为37℃）中，上端连接拉力换能器，下端系于L型钩上固定，同时每分钟通入混合气60～80个气泡。标本负荷1～2 g，平衡30 min，待实验系统稳定后，描记肠段自发性舒缩稳定后的肠管正常运动曲线。在实验过程中，描记正常舒缩曲线后，向浴槽中加入各种药液，给药量1 ml，描记舒缩曲线。完成后，立即用新鲜台氏液冲洗2～3次，待肠段舒缩恢复正常后才可进行下一次给药，无法恢复正常舒缩的肠段弃去；用区间测量法测量给药前1 min及给药后第5 min的频率、幅度及张力，按公式①～③计算频率抑制率、幅度抑制率、张力抑制率，求平均值。用统计软件SPSS17.0作组内配对t检验，组间方差分析比较。
频率抑制率（%）=给药前频率-给药后频率给药前频率×100%①
幅度抑制率（%）=给药前幅度-给药后幅度给药前幅度×100%②
张力抑制率（%）=给药前张力-给药后张力给药前张力×100%③
2.2 对Ach所致兔离体肠痉挛的影响标本制备方法及仪器调试同“2.1”下项。描记一段正常肠平滑肌自律曲线后，向浴槽中加入0.01％乙酰胆碱0.1 ml，然后加入各种提取液，给药量1ml，描记舒缩曲线。计算其频率、幅度及张力的抑制率后，组内配对t检验，组间方差分析比较。本实验结果表明，香附经SFE-CO2后药渣的5种方法提取液对兔离体肠平滑肌均具有抑制作用，其中SBE液的作用最强，这与其5种方法提取液的成分指标比较结果相吻合。
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