植物雌激素活性的实验报告-老年消化疾病论文
老年消化疾病论文 上消化道出血论文 医学护理论文 护理类论文发表
1 材料与仪器
1.1 药物新疆石榴皮Punica granatum L. （购自新疆南疆）；罗勒Ocimun basilicum L. （采自新疆吐鲁番市）；红景天Rhodiola rose L.（购自新疆伊宁霍诚县）；阿里红Fomes officinalis Ames.（购自新疆维吾尔医院）；鹰嘴豆Cicer arietinum L.（购自新疆维吾尔医院）；枸杞Lycium barbarum L. （购自新疆中新药业公司）；肉苁蓉Cistanche salsa.（采自新疆吉木萨盐生肉苁蓉人工栽培基地）；锁阳Cynomorium songaricum Rupr.（购自新疆乌鲁木齐市）；鼠尾草Salvia deserta Schang.（采自乌鲁木齐市近郊）。各药材分别用10倍量水煮提2次，过滤，合并滤液并减压浓缩，真空干燥后配制成1 mg/ml的水提液。
1.2 试剂EMDM培养基、无酚红EMDM培养基、17β-雌二醇、β-半乳糖苷酶、S.cerevisiac酵母菌株、SD培养基、Zymolase试剂（为Sigma公司产品），邻硝基苯-β-D-半乳吡喃糖苷（ONPG，日本和汉药研究所提供），胎牛血清（FBS，日本和汉药研究所提供），其余试剂均为日本产分析纯。
1.3 仪器电子读数分析天平（日本 Shimaduz 公司）；二氧化碳培养箱（日本SANYO公司），倒置显微镜（日本Olympus）；台式高速低温离心机（美国Becton Dickinson公司）；全温振荡培养基（美国Becton Dickinson公司）；BIO-RAD Model 3550-UV紫外分光光度仪（日本SANYO公司）；25 mm2培养瓶、96孔培养板（美国Becton Dickinson）。
2 方法与结果
2.1 细胞株及培养条件
雌激素敏感的MCF-7人乳腺癌细胞由日本和汉药研究所提供。以含5%胎牛血清（Hyclone）的DMEM培养基培养传代。培养条件：37℃，5%CO2，相对湿度95%。
2.2 细胞增殖实验
按E-screen法［3］并稍作修改，普通培养的MCF-7细胞经胰蛋白酶消化后以104个细胞/ml接种于96孔细胞培养板中，每孔100 μl，贴壁24h后去除原培养基，换成实验用培养基：无酚红的DMEM基加10%热灭活的无雌激素人血清，继续培养5 d，此时加入阳性（雌二醇）对照组设10-13～10-9mol/L 5个浓度，不同浓度的受试物和阴性（溶剂）对照组，每个浓度设6个复孔。6d后弃上清液，每孔加5mg/ml的四唑盐（MTT）30 μl，继续培养4 h。吸去孔中的培养液，每孔加入150 μl的DMSO，在540 nm波长测定吸光度并计算增殖率。结果见表1。
阳性对照（雌二醇）从浓度10-13～10-9 mol/L对MCF-7人乳腺癌细胞增殖力与对照组相比均有显着性，并在10-10mol/L组实验对MCF-7细胞增殖力最强，与其它各组相比差异有显着性。说明本次实验结果是可靠的。在此实验条件下，高剂量组鹰嘴豆（P＜0.05）、石榴皮（P＜0.01）、罗勒（P＜0.05）、枸杞（P＜0.05）水提液与正常对照组均有显着性差异；在低剂量组鹰嘴豆（P＜0.01）、石榴皮（P＜0.01）、罗勒（P＜0.01）水提液与正常对照组相比有统计学意义；而鼠尾草、肉苁蓉、锁阳、阿里红、红景天水提液与正常对照组相比无统计学差异（P＞0.05）。
2.3 β-半乳糖苷酶活性的测定
测定并记录培养液的OD595，离心，弃取上清液，加入Zymolase 溶液，置37℃水浴中培养15 min，再加入ONPG溶液，置30℃水浴中培养30 min，加入1 mol/L Na2CO3100 μl终止反应。在450 nm，540 nm波长测定吸光度，并计算β-半乳糖苷酶活性（U）值。溶剂对照组的β-半乳糖苷酶活性为48.5，阳性对照组的酶活性为440.5，与溶剂对照组有显着差异（P＜0.05），说明本实验系统可靠，可用于对含有雌激素的样品进行雌激素活性的测试。在此实验条件下，鹰嘴豆（P＜0.05）、石榴皮（P＜0.05）水提液在高、低剂量组均与溶剂对照均有统计学差异；而枸杞、鼠尾草、肉苁蓉、罗勒、锁阳、阿里红、红景天水提液与溶剂对照组相比无统计学差异（P＞0.05）。
老年高血压护理论文 http://www.qikanba.com/
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1.1 药物新疆石榴皮Punica granatum L. （购自新疆南疆）；罗勒Ocimun basilicum L. （采自新疆吐鲁番市）；红景天Rhodiola rose L.（购自新疆伊宁霍诚县）；阿里红Fomes officinalis Ames.（购自新疆维吾尔医院）；鹰嘴豆Cicer arietinum L.（购自新疆维吾尔医院）；枸杞Lycium barbarum L. （购自新疆中新药业公司）；肉苁蓉Cistanche salsa.（采自新疆吉木萨盐生肉苁蓉人工栽培基地）；锁阳Cynomorium songaricum Rupr.（购自新疆乌鲁木齐市）；鼠尾草Salvia deserta Schang.（采自乌鲁木齐市近郊）。各药材分别用10倍量水煮提2次，过滤，合并滤液并减压浓缩，真空干燥后配制成1 mg/ml的水提液。
1.2 试剂EMDM培养基、无酚红EMDM培养基、17β-雌二醇、β-半乳糖苷酶、S.cerevisiac酵母菌株、SD培养基、Zymolase试剂（为Sigma公司产品），邻硝基苯-β-D-半乳吡喃糖苷（ONPG，日本和汉药研究所提供），胎牛血清（FBS，日本和汉药研究所提供），其余试剂均为日本产分析纯。
1.3 仪器电子读数分析天平（日本 Shimaduz 公司）；二氧化碳培养箱（日本SANYO公司），倒置显微镜（日本Olympus）；台式高速低温离心机（美国Becton Dickinson公司）；全温振荡培养基（美国Becton Dickinson公司）；BIO-RAD Model 3550-UV紫外分光光度仪（日本SANYO公司）；25 mm2培养瓶、96孔培养板（美国Becton Dickinson）。
2 方法与结果
2.1 细胞株及培养条件
雌激素敏感的MCF-7人乳腺癌细胞由日本和汉药研究所提供。以含5%胎牛血清（Hyclone）的DMEM培养基培养传代。培养条件：37℃，5%CO2，相对湿度95%。
2.2 细胞增殖实验
按E-screen法［3］并稍作修改，普通培养的MCF-7细胞经胰蛋白酶消化后以104个细胞/ml接种于96孔细胞培养板中，每孔100 μl，贴壁24h后去除原培养基，换成实验用培养基：无酚红的DMEM基加10%热灭活的无雌激素人血清，继续培养5 d，此时加入阳性（雌二醇）对照组设10-13～10-9mol/L 5个浓度，不同浓度的受试物和阴性（溶剂）对照组，每个浓度设6个复孔。6d后弃上清液，每孔加5mg/ml的四唑盐（MTT）30 μl，继续培养4 h。吸去孔中的培养液，每孔加入150 μl的DMSO，在540 nm波长测定吸光度并计算增殖率。结果见表1。
阳性对照（雌二醇）从浓度10-13～10-9 mol/L对MCF-7人乳腺癌细胞增殖力与对照组相比均有显着性，并在10-10mol/L组实验对MCF-7细胞增殖力最强，与其它各组相比差异有显着性。说明本次实验结果是可靠的。在此实验条件下，高剂量组鹰嘴豆（P＜0.05）、石榴皮（P＜0.01）、罗勒（P＜0.05）、枸杞（P＜0.05）水提液与正常对照组均有显着性差异；在低剂量组鹰嘴豆（P＜0.01）、石榴皮（P＜0.01）、罗勒（P＜0.01）水提液与正常对照组相比有统计学意义；而鼠尾草、肉苁蓉、锁阳、阿里红、红景天水提液与正常对照组相比无统计学差异（P＞0.05）。
2.3 β-半乳糖苷酶活性的测定
测定并记录培养液的OD595，离心，弃取上清液，加入Zymolase 溶液，置37℃水浴中培养15 min，再加入ONPG溶液，置30℃水浴中培养30 min，加入1 mol/L Na2CO3100 μl终止反应。在450 nm，540 nm波长测定吸光度，并计算β-半乳糖苷酶活性（U）值。溶剂对照组的β-半乳糖苷酶活性为48.5，阳性对照组的酶活性为440.5，与溶剂对照组有显着差异（P＜0.05），说明本实验系统可靠，可用于对含有雌激素的样品进行雌激素活性的测试。在此实验条件下，鹰嘴豆（P＜0.05）、石榴皮（P＜0.05）水提液在高、低剂量组均与溶剂对照均有统计学差异；而枸杞、鼠尾草、肉苁蓉、罗勒、锁阳、阿里红、红景天水提液与溶剂对照组相比无统计学差异（P＞0.05）。
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