玉郎伞抗小鼠抑郁作用的实验观察-护理学专升本毕业论文
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1 材料与仪器
1. 1 动物昆明种小鼠，SPF级，♂，体重18～22 g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（桂）2003-0003。动物分笼饲养，自由饮水和取食。
1. 2 实验药物YLSPS由本室自行提取；盐酸氟西汀胶囊（fluoxetine，FLU，批号：071201，上海中西制药有限公司）。实验前将各试药用蒸馏水配成所需浓度，4℃冷藏备用。
1. 3 仪器与试剂TGL-16G-A冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；MK3酶标仪（Thermo Electron Corporation）；FJ-200高速均质分散机（上海标本模型厂）；HH-W21-Cr600电热恒温水温箱（北京长安科学仪器厂）；开场实验箱（高50 cm，长80 cm，宽80 cm，底面平均划分为16格面积相等的格子）自制；悬尾实验观察箱（高35 cm，长25 cm，宽25 cm）自制；秒表；去甲肾上腺素试剂盒（美国ADL公司，批号：RT110371）；多巴胺试剂盒（美国ADL公司，批号：RT110371）；五羟色胺试剂盒（美国ADL公司，批号：RT110371）。
2 方法
2.1 小鼠悬尾实验小鼠随机分成5组：空白组，FLU （20 mg/kg） 组，YLSPS低、中、高剂量（150，300，600 mg/kg）组。每日上午8时灌胃给药，1次/d，连续7 d。末次给药30 min后将小鼠尾末端2cm处固定倒悬于自制悬尾箱内，头部离箱底约5cm，观察6 min，记录后4 min内的累计不动时间。判定不动标准：小鼠在空中停止挣扎，身体呈垂直倒悬状，静止不动。
2.2 小鼠强迫游泳实验分组和给药同悬尾实验。末次给药30 min后将小鼠单独置于高20 cm，直径14 cm，水深10 cm，水温25℃的圆形玻璃缸内，玻璃缸之间放一个不透明隔板，以防小鼠彼此看到，观察6 min，记录后4 min内的累计不动时间。判定不动标准：小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面。
2.3 开场实验分组和给药同悬尾实验。末次给药30 min后将小鼠放入自制开场实验箱中，适应1 min后，记录动物5 min内由底面中心开始走动的穿越格数。
2.4 酶联免疫吸附实验检测脑中单胺类神经递质水平 “小鼠强迫游泳实验”测试结束后立即将小鼠断头，在冰台上迅速取全脑，称重，脑组织加入5倍量（重量/体积）预冷生理盐水，低温均浆，14 000 r/min冷冻高速离心15 min，取上清，置-86℃冰箱保存，以供单胺类神经递质含量测定。50μl上清液和10 μl生物素标记液加入预先包被一抗的96孔酶标板，加入100 μl 酶标记液，（36±2）℃孵育反应60 min，甩尽反应液，洗板6次，每孔加入底物A、B液各50 μl，37℃避光孵育反应15 min，加入50 μl终止液，终止反应。用酶标仪测定450 nm处各孔的OD值。同时测定标准品OD值，以OD值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。从坐标曲线查得各样本浓度。
2.5 数据统计处理 数据用以±s的形式表示，采用SPSS13.0统计软件，选用单因素方差分析（ANOVA）来检验各组数据之间的差异性。
3 结果
YLSPS对小鼠悬尾实验、强迫游泳实验中不动时间的影响与空白组相比， 600 mg/kg YLSPS能明显缩短小鼠TST、FST的不动时间（P<0.01）。300mg/kgYLSPS能明显缩短小鼠FST的不动时间（P<0.05），提示YLSPS具有一定的抗抑郁作用。YLSPS对小鼠自主活动的影响YLSPS各剂量组小鼠的自主活动与空白组比较无明显差异，表明该药对小鼠自主活动无显着影响。FLU可以显着增加脑中5-HT的含量，而对NE和DA没有显着影响。300，600 mg/kg YLSPS可以显着提高脑中NE、DA和5-HT的水平。
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1 材料与仪器
1. 1 动物昆明种小鼠，SPF级，♂，体重18～22 g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（桂）2003-0003。动物分笼饲养，自由饮水和取食。
1. 2 实验药物YLSPS由本室自行提取；盐酸氟西汀胶囊（fluoxetine，FLU，批号：071201，上海中西制药有限公司）。实验前将各试药用蒸馏水配成所需浓度，4℃冷藏备用。
1. 3 仪器与试剂TGL-16G-A冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；MK3酶标仪（Thermo Electron Corporation）；FJ-200高速均质分散机（上海标本模型厂）；HH-W21-Cr600电热恒温水温箱（北京长安科学仪器厂）；开场实验箱（高50 cm，长80 cm，宽80 cm，底面平均划分为16格面积相等的格子）自制；悬尾实验观察箱（高35 cm，长25 cm，宽25 cm）自制；秒表；去甲肾上腺素试剂盒（美国ADL公司，批号：RT110371）；多巴胺试剂盒（美国ADL公司，批号：RT110371）；五羟色胺试剂盒（美国ADL公司，批号：RT110371）。
2 方法
2.1 小鼠悬尾实验小鼠随机分成5组：空白组，FLU （20 mg/kg） 组，YLSPS低、中、高剂量（150，300，600 mg/kg）组。每日上午8时灌胃给药，1次/d，连续7 d。末次给药30 min后将小鼠尾末端2cm处固定倒悬于自制悬尾箱内，头部离箱底约5cm，观察6 min，记录后4 min内的累计不动时间。判定不动标准：小鼠在空中停止挣扎，身体呈垂直倒悬状，静止不动。
2.2 小鼠强迫游泳实验分组和给药同悬尾实验。末次给药30 min后将小鼠单独置于高20 cm，直径14 cm，水深10 cm，水温25℃的圆形玻璃缸内，玻璃缸之间放一个不透明隔板，以防小鼠彼此看到，观察6 min，记录后4 min内的累计不动时间。判定不动标准：小鼠在水中停止挣扎，或呈漂浮状态，仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面。
2.3 开场实验分组和给药同悬尾实验。末次给药30 min后将小鼠放入自制开场实验箱中，适应1 min后，记录动物5 min内由底面中心开始走动的穿越格数。
2.4 酶联免疫吸附实验检测脑中单胺类神经递质水平 “小鼠强迫游泳实验”测试结束后立即将小鼠断头，在冰台上迅速取全脑，称重，脑组织加入5倍量（重量/体积）预冷生理盐水，低温均浆，14 000 r/min冷冻高速离心15 min，取上清，置-86℃冰箱保存，以供单胺类神经递质含量测定。50μl上清液和10 μl生物素标记液加入预先包被一抗的96孔酶标板，加入100 μl 酶标记液，（36±2）℃孵育反应60 min，甩尽反应液，洗板6次，每孔加入底物A、B液各50 μl，37℃避光孵育反应15 min，加入50 μl终止液，终止反应。用酶标仪测定450 nm处各孔的OD值。同时测定标准品OD值，以OD值为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。从坐标曲线查得各样本浓度。
2.5 数据统计处理 数据用以±s的形式表示，采用SPSS13.0统计软件，选用单因素方差分析（ANOVA）来检验各组数据之间的差异性。
3 结果
YLSPS对小鼠悬尾实验、强迫游泳实验中不动时间的影响与空白组相比， 600 mg/kg YLSPS能明显缩短小鼠TST、FST的不动时间（P<0.01）。300mg/kgYLSPS能明显缩短小鼠FST的不动时间（P<0.05），提示YLSPS具有一定的抗抑郁作用。YLSPS对小鼠自主活动的影响YLSPS各剂量组小鼠的自主活动与空白组比较无明显差异，表明该药对小鼠自主活动无显着影响。FLU可以显着增加脑中5-HT的含量，而对NE和DA没有显着影响。300，600 mg/kg YLSPS可以显着提高脑中NE、DA和5-HT的水平。
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