原发性高血压病不同证型PPARγ基因表达研究-本科护理毕业论文
本科护理毕业论文 医学护理论文 医学核心期刊 护理学本科毕业论文
1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 病例选择2008～2009年在石家庄市中医院门诊或病房首次确诊为EH阴虚阳亢型25例（设为阴虚阳亢组），痰湿壅盛型25例（设为痰湿壅盛组），健康体检者（设为正常组）25例。各组病例资料见表1。
1.1.2 诊断标准西医诊断标准按照2005年《中国高血压防治指南》修订版中EH的诊断标准。中医证候诊断标准参照中华人民共和国国家药品监督管理局2002年制定颁布的《中药新药临床研究指导原则·中药新药治疗高血压病的临床研究指导原则》中阴虚阳亢型或痰湿壅盛型的诊断标准。
1.1.3 纳入标准西医诊断为EH；中医诊断为阴虚阳亢型或痰湿壅盛型。
1.1.4 排除标准年龄在 45岁以下或 70岁以上；继发性高血压；感染性疾病患者。
1.2 试剂及仪器人淋巴细胞分离液（晶美公司）、Trizol（MRC公司）、半定量逆转录多聚酶链式反应试剂盒（Fermentas公司）、PCR试剂盒（Fermentas公司）、DNA marker（Fermentas公司）、PPARγ引物（上游引物：5'-CAAGACAACCTGCTACAAGC-3' 下游引物：5'-TCCTTGTAGATCTCCTGCAG-3‘， 上海生工工程技术服务有限公司）、β-actin引物（上游引物：5'- TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3' 下游引物：5'-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3' ，上海生工工程技术服务有限公司）、琼脂糖（Amresco公司）、EB（Sigma公司）。低温离心机（Journ公司）、PCR仪（PXE0.2，Thermo公司）、电泳仪（DYY-8C型，北京市八一仪器厂）、凝胶成像分析系统（Vilber lourmat公司）、彩色多普勒超声诊断仪（PowerVision6000，日本东芝） 。
1.3 RT-PCR法检测外周血淋巴细胞PPAPγ mRNA表达［3］抽清晨空腹肘静脉肝素抗凝血，1 000 r/min离心1 min，弃上清；盐水与血等体积混匀稀释；1 ml淋巴细胞分离液面上，用滴管沿壁缓慢加2 ml稀释血；2 000 r/min离心20 min；管内分为4层，吸出云雾层（淋巴细胞）；用5×生理盐水稀释，1 500 r/min离心10min，重复1次，分离淋巴细胞。提取细胞总RNA，总RNA逆转录成cDNA，PCR扩增，反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30s，58℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35个循环，72℃延伸5 min。PCR产物琼脂糖凝胶电泳，凝胶摄像系统采集电泳图像，用PPARγ条带灰度与β-actin标准条带的比值进行半定量分析。
1.4 彩色多普勒超声测量颈总动脉内膜-中膜厚度由专人操作将探头置于颈部纵横扫查，观察颈总动脉，颈内动脉、颈外动脉，测量颈总动脉内膜-中膜厚度（IMT）。
1.5 统计处理计量资料数据均用±s表示，采用SPSS12.0软件进行分析，组间比较用单因素方差分析，以P<0.05具有统计学意义。
2 结果
各组PPARγ mRNA表达与正常对照组（0.77±0.11）比较，阴虚阳亢型组（0.35±0.10）及痰湿壅盛型（0.22±0.11）患者PPARγ mRNA表达减弱，组间比较具有显着性差异（P<0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛组PPARγ mRNA表达下调明显（P<0.05）。各组颈动脉血管病变与正常对照组比较，阴虚阳亢型和痰湿壅盛型高血压患者IMT增厚，组间比较具有显着性差异（P<0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛型IMT增厚明显（P<0.05）。
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1 资料与方法
1.1 研究对象
1.1.1 病例选择2008～2009年在石家庄市中医院门诊或病房首次确诊为EH阴虚阳亢型25例（设为阴虚阳亢组），痰湿壅盛型25例（设为痰湿壅盛组），健康体检者（设为正常组）25例。各组病例资料见表1。
1.1.2 诊断标准西医诊断标准按照2005年《中国高血压防治指南》修订版中EH的诊断标准。中医证候诊断标准参照中华人民共和国国家药品监督管理局2002年制定颁布的《中药新药临床研究指导原则·中药新药治疗高血压病的临床研究指导原则》中阴虚阳亢型或痰湿壅盛型的诊断标准。
1.1.3 纳入标准西医诊断为EH；中医诊断为阴虚阳亢型或痰湿壅盛型。
1.1.4 排除标准年龄在 45岁以下或 70岁以上；继发性高血压；感染性疾病患者。
1.2 试剂及仪器人淋巴细胞分离液（晶美公司）、Trizol（MRC公司）、半定量逆转录多聚酶链式反应试剂盒（Fermentas公司）、PCR试剂盒（Fermentas公司）、DNA marker（Fermentas公司）、PPARγ引物（上游引物：5'-CAAGACAACCTGCTACAAGC-3' 下游引物：5'-TCCTTGTAGATCTCCTGCAG-3‘， 上海生工工程技术服务有限公司）、β-actin引物（上游引物：5'- TAAAGACCTCTATGCCAACACAGT-3' 下游引物：5'-CACGATGGAGGGGCCGGACTCATC-3' ，上海生工工程技术服务有限公司）、琼脂糖（Amresco公司）、EB（Sigma公司）。低温离心机（Journ公司）、PCR仪（PXE0.2，Thermo公司）、电泳仪（DYY-8C型，北京市八一仪器厂）、凝胶成像分析系统（Vilber lourmat公司）、彩色多普勒超声诊断仪（PowerVision6000，日本东芝） 。
1.3 RT-PCR法检测外周血淋巴细胞PPAPγ mRNA表达［3］抽清晨空腹肘静脉肝素抗凝血，1 000 r/min离心1 min，弃上清；盐水与血等体积混匀稀释；1 ml淋巴细胞分离液面上，用滴管沿壁缓慢加2 ml稀释血；2 000 r/min离心20 min；管内分为4层，吸出云雾层（淋巴细胞）；用5×生理盐水稀释，1 500 r/min离心10min，重复1次，分离淋巴细胞。提取细胞总RNA，总RNA逆转录成cDNA，PCR扩增，反应条件：94℃预变性5 min，94℃变性30s，58℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35个循环，72℃延伸5 min。PCR产物琼脂糖凝胶电泳，凝胶摄像系统采集电泳图像，用PPARγ条带灰度与β-actin标准条带的比值进行半定量分析。
1.4 彩色多普勒超声测量颈总动脉内膜-中膜厚度由专人操作将探头置于颈部纵横扫查，观察颈总动脉，颈内动脉、颈外动脉，测量颈总动脉内膜-中膜厚度（IMT）。
1.5 统计处理计量资料数据均用±s表示，采用SPSS12.0软件进行分析，组间比较用单因素方差分析，以P<0.05具有统计学意义。
2 结果
各组PPARγ mRNA表达与正常对照组（0.77±0.11）比较，阴虚阳亢型组（0.35±0.10）及痰湿壅盛型（0.22±0.11）患者PPARγ mRNA表达减弱，组间比较具有显着性差异（P<0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛组PPARγ mRNA表达下调明显（P<0.05）。各组颈动脉血管病变与正常对照组比较，阴虚阳亢型和痰湿壅盛型高血压患者IMT增厚，组间比较具有显着性差异（P<0.05）。与阴虚阳亢型组比较，痰湿壅盛型IMT增厚明显（P<0.05）。
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