蜘蛛毒素的提取优化方法研究-高血压的医学论文
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1 仪器与材料
1.1 仪器
上海精密A1004电子天平，Olympus CX41显微摄像系统，上海新苗DNP-9052BS-Ⅲ电热恒温培养箱和DHG-9073BS-Ⅲ恒温鼓风干燥箱，湖南星科TGL-16B台式高速离心机，江苏昆山KQ-50DB数控超声波清洗器，北京泰克0610-403体式显微镜，日本三丰560-108 NK20游标卡尺，上海光学显微镜测微尺和上海亚荣真空抽气泵与干燥器等。
1.2 悦目金蛛的采集
悦目金蛛采自于江西省贵溪市冷水林场，共28头，其中雄性3头，雌性25头。悦目金蛛主要分布于山区丘陵地带，布圆网于向阳面，以捕食较大型昆虫为主，喜结网于人居区周边灌丛，尤以牛棚猪圈旁为多。悦目金蛛脆弱，附肢较长，极易损伤，在采集过程当中应格外小心；可以用捕虫网将蜘蛛捕获，装入盒内，放入一些树叶，以保持湿度和良好通风性，避免振荡和过度高温。采集完毕返回后，应将蜘蛛及时放在灌木上实行半开放式生态放养。
2 结果与方法
2.1 悦目金蛛毒腺形态与体量相关性分析
悦目金蛛的毒腺最细端位于螯基前端，并向头部延伸，多位于头胸部前段内，覆盖在神经团上，且左右两两相对趋向于蛛体的纵中轴。为了快速、准确而高效地获得蜘蛛毒腺，避免造成材料的损失，我们对悦目金蛛毒腺进行了形态解剖，明确毒腺的结构和具体位置，然后对毒腺进行形态描述。解剖之前先用电子天平称出蜘蛛的体重， 对大型个体用游标卡尺分别量出其头胸部和腹部的长和宽， 而对小型蜘蛛个体则用显微测微尺量出其头胸部和腹部的长和宽，随后测量取出的毒腺长和宽，并称重。
具体测量结果见表1～2，对数据进行回归分析表明：悦目金蛛在性别相同、生境一致、个体大小不同时，蜘蛛毒腺的位置和形态与蜘蛛的种群演化、生活方式和形态体积有一定关系，其中，成蛛的毒腺重量与其体质量之间呈正相关，相关显着；成体的毒腺长度与其头胸长之间也为正相关，显着性检验为极显着。
2.2 悦目金蛛粗毒提取和制备方法的优化
由于悦目金蛛与特大型虎纹捕鸟蛛、敬钊缨毛蛛等相比，成体相对较小，含毒量不多，且附肢长，给采毒带来困难；我们在尝试过活体诱导取毒、电刺激取毒和解剖分离毒腺等多种方法后，确定了采用毒腺解剖法，后经多次比对试验，优化出一条适于毒量不大蜘蛛毒腺的解剖匀浆取毒法，步骤如下：
先将蜘蛛放入冰箱-4℃冻晕，根据鳌肢确定毒腺管位置，然后从背面“丁字型”剪开其头胸甲，依毒腺管向上延伸方向找到毒腺，并用镊子小心取出，将其冰冻干燥保存。
取15对干燥毒腺，在2～3倍去离子水中制成匀浆，用2 000 r/min的速率离心15 min，取上清液。向沉淀物中加等体积去离子水，再离心，取上清液。再向沉淀物中加等体积去离子水，调pH 值至4.0，匀浆、离心、取上清液，合并上清液，过滤，去除杂质，得到澄清液，进行冷冻，等结成冰块，将冷冻的蛛毒冰块放置于真空干燥器内，进行真空干燥，在干燥器的底层放适量的氧化钙作为干燥剂，接着用真空泵抽气，抽气过程中，要注意观察，如果发现蛛毒表面产生大量气泡时，就要停止片刻再抽，直至基本干燥，变成大小不等的颗粒结晶体为止，真空干燥一般在6 h内彻底干燥完。干燥后的蛛毒即成粉末状或块状，刮下干毒粉分装成小瓶，溶蜡密封，贴上标签，注明蛛毒毒粉的制备日期和重量，上包不透明的黑纸，置于-５℃的冰箱内可保存1年不变质。在整个取毒和制备过程中，应首先注意整个过程必须洁净卫生，确保采毒的纯度，其次取毒过程尽量在低温下进行，各种试剂必须预先冰浴。
蜘蛛毒素成分复杂，主要为蛋白质和多胺类物质，蛋白质包括各种多肽神经毒素、细胞毒素、酶、激肽类似物、凝集活性肽和抗菌肽等，多胺类物质有ATP、核苷酸、氨基酸、多胺、单胺类等低分子量物质和无机盐等。蜘蛛毒素具有多种活性，现已证实含有多种特异性多肽配体，可以选择性地和K+、Na+、 Ca2+ 通道的亚型相结合［1～11］。
新能源材料与应用论文 http://www.qikanba.com/
1 仪器与材料
1.1 仪器
上海精密A1004电子天平，Olympus CX41显微摄像系统，上海新苗DNP-9052BS-Ⅲ电热恒温培养箱和DHG-9073BS-Ⅲ恒温鼓风干燥箱，湖南星科TGL-16B台式高速离心机，江苏昆山KQ-50DB数控超声波清洗器，北京泰克0610-403体式显微镜，日本三丰560-108 NK20游标卡尺，上海光学显微镜测微尺和上海亚荣真空抽气泵与干燥器等。
1.2 悦目金蛛的采集
悦目金蛛采自于江西省贵溪市冷水林场，共28头，其中雄性3头，雌性25头。悦目金蛛主要分布于山区丘陵地带，布圆网于向阳面，以捕食较大型昆虫为主，喜结网于人居区周边灌丛，尤以牛棚猪圈旁为多。悦目金蛛脆弱，附肢较长，极易损伤，在采集过程当中应格外小心；可以用捕虫网将蜘蛛捕获，装入盒内，放入一些树叶，以保持湿度和良好通风性，避免振荡和过度高温。采集完毕返回后，应将蜘蛛及时放在灌木上实行半开放式生态放养。
2 结果与方法
2.1 悦目金蛛毒腺形态与体量相关性分析
悦目金蛛的毒腺最细端位于螯基前端，并向头部延伸，多位于头胸部前段内，覆盖在神经团上，且左右两两相对趋向于蛛体的纵中轴。为了快速、准确而高效地获得蜘蛛毒腺，避免造成材料的损失，我们对悦目金蛛毒腺进行了形态解剖，明确毒腺的结构和具体位置，然后对毒腺进行形态描述。解剖之前先用电子天平称出蜘蛛的体重， 对大型个体用游标卡尺分别量出其头胸部和腹部的长和宽， 而对小型蜘蛛个体则用显微测微尺量出其头胸部和腹部的长和宽，随后测量取出的毒腺长和宽，并称重。
具体测量结果见表1～2，对数据进行回归分析表明：悦目金蛛在性别相同、生境一致、个体大小不同时，蜘蛛毒腺的位置和形态与蜘蛛的种群演化、生活方式和形态体积有一定关系，其中，成蛛的毒腺重量与其体质量之间呈正相关，相关显着；成体的毒腺长度与其头胸长之间也为正相关，显着性检验为极显着。
2.2 悦目金蛛粗毒提取和制备方法的优化
由于悦目金蛛与特大型虎纹捕鸟蛛、敬钊缨毛蛛等相比，成体相对较小，含毒量不多，且附肢长，给采毒带来困难；我们在尝试过活体诱导取毒、电刺激取毒和解剖分离毒腺等多种方法后，确定了采用毒腺解剖法，后经多次比对试验，优化出一条适于毒量不大蜘蛛毒腺的解剖匀浆取毒法，步骤如下：
先将蜘蛛放入冰箱-4℃冻晕，根据鳌肢确定毒腺管位置，然后从背面“丁字型”剪开其头胸甲，依毒腺管向上延伸方向找到毒腺，并用镊子小心取出，将其冰冻干燥保存。
取15对干燥毒腺，在2～3倍去离子水中制成匀浆，用2 000 r/min的速率离心15 min，取上清液。向沉淀物中加等体积去离子水，再离心，取上清液。再向沉淀物中加等体积去离子水，调pH 值至4.0，匀浆、离心、取上清液，合并上清液，过滤，去除杂质，得到澄清液，进行冷冻，等结成冰块，将冷冻的蛛毒冰块放置于真空干燥器内，进行真空干燥，在干燥器的底层放适量的氧化钙作为干燥剂，接着用真空泵抽气，抽气过程中，要注意观察，如果发现蛛毒表面产生大量气泡时，就要停止片刻再抽，直至基本干燥，变成大小不等的颗粒结晶体为止，真空干燥一般在6 h内彻底干燥完。干燥后的蛛毒即成粉末状或块状，刮下干毒粉分装成小瓶，溶蜡密封，贴上标签，注明蛛毒毒粉的制备日期和重量，上包不透明的黑纸，置于-５℃的冰箱内可保存1年不变质。在整个取毒和制备过程中，应首先注意整个过程必须洁净卫生，确保采毒的纯度，其次取毒过程尽量在低温下进行，各种试剂必须预先冰浴。
蜘蛛毒素成分复杂，主要为蛋白质和多胺类物质，蛋白质包括各种多肽神经毒素、细胞毒素、酶、激肽类似物、凝集活性肽和抗菌肽等，多胺类物质有ATP、核苷酸、氨基酸、多胺、单胺类等低分子量物质和无机盐等。蜘蛛毒素具有多种活性，现已证实含有多种特异性多肽配体，可以选择性地和K+、Na+、 Ca2+ 通道的亚型相结合［1～11］。
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